| 少孢节丛孢菌胞外几丁质酶AO-379基因克隆及其表达分析 |
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| 引用本文： | 钟文强,孟庆玲,乔军,陈英,贡莎莎,王熙凤,黄运福,才学鹏.少孢节丛孢菌胞外几丁质酶AO-379基因克隆及其表达分析[J].南方农业学报,2018(1). |
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| 作者姓名： | 钟文强 孟庆玲 乔军 陈英 贡莎莎 王熙凤 黄运福 才学鹏 |
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| 作者单位： | 石河子大学动物科技学院;中国农业科学院兰州兽医研究所; |
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| 摘 要： | 【目的】深入了解捕食线虫性真菌几丁质酶的生物学功能,为今后以少孢节丛孢菌重组几丁质酶AO-379研发线虫病生物防控制剂打下基础。【方法】克隆少孢节丛孢菌XJ-A1几丁质酶AO-379基因的全长序列,利用Signal P4.1 Server、Inter Pro、Ex PASy等在线分析软件对其进行生物信息学分析;构建重组表达载体p ET32a-AO-379,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞后用IPTG进行诱导表达,并以SDS-PAGE和Western blotting检测分析表达获得的融合蛋白。【结果】少孢节丛孢菌几丁质酶AO-379基因全长1475 bp,含有1个1203 bp的开放阅读框(ORF),编码400个氨基酸。几丁质酶AO-379基因序列与少孢节丛孢菌标准株(ATCC 24927)几丁质酶基因序列的同源性为97.08%,其推导氨基酸的同源性为98.75%。几丁质酶A0-379属于糖苷水解酶18家族,具有SXGG和VDGFDLDFE两个催化区保守序列。其中,SLGGS位于第127~131位,为底物结合位点;VDGFDLDFE位于第173~181位,为水解酶催化活性位点。经大肠杆菌诱导表达获得的融合蛋白AO-379相对分子质量为60.0 kD,且能与抗少孢节丛孢菌多克隆抗体发生反应。【结论】少孢节丛孢菌几丁质酶AO-379可在大肠杆菌中成功诱导表达,且获得的融合蛋白AO-379能与抗少孢节丛孢菌多克隆抗体发生反应,可用于研发线虫病生物防控制剂。
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