| 竹林金针虫实时荧光定量PCR内参基因的筛选与应用 |
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| 引用本文： | 叶碧欢,陈友吾,舒金平,张威,张亚波,李海波,宋其岩.竹林金针虫实时荧光定量PCR内参基因的筛选与应用[J].浙江农林大学学报,2021,38(3):644-651. |
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| 作者姓名： | 叶碧欢 陈友吾 舒金平 张威 张亚波 李海波 宋其岩 |
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| 作者单位： | 1.浙江省林业科学研究院，浙江 杭州 3100232.中国林业科学研究院 亚热带林业研究所，浙江 杭州 311400 |
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| 基金项目： | 浙江省自然科学基金资助项目(LQ19C160006)；浙江省省属科研院所资助项目(2019F1068-1) |
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| 摘 要： | 目的 筛选平沙绿僵菌Metarhizium pingshaense侵染条件下筛胸梳爪叩甲Melanotus cribricollis幼虫稳定表达的内参基因，为该竹林金针虫相关基因的表达研究奠定基础。 方法 基于筛胸梳爪叩甲幼虫的转录组数据，利用实时荧光定量PCR扩增特异性引物，分析相关性和扩增效率；利用GeNorm、NormFinder和BestKeeper软件评估筛选出6个候选内参基因(β-actin、GAPDH、α-tubulin、RPL13α、RPS3、RPS27a)，并验证其表达稳定性。 结果 GeNorm分析结果显示:PRS27a和RPS3的表达最稳定，随后依次是α-tubulin、RPL13α、β-actin和GAPDH；最适合的内参基因数目为2。NormFinder分析结果显示:RPL13α的表达最稳定，随后依次是α-tubulin、RPS3、RPS27a、β-actin和GAPDH。BestKeeper分析结果显示:β-actin和GAPDH的P＞0.5，不适合作为本试验条件下的内参基因。不同软件分析得出的候选内参排序存在一定差异。综合分析和表达稳定性验证表明PRS27a或RPS3是最佳内参基因，6个目的基因的表达水平变化趋势均基本一致。 结论 PRS27a和RPS3是研究平沙绿僵菌侵染的竹林金针虫相关基因表达的最佳内参基因。图3表3参27
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| 关 键 词： | 森林保护学 竹林金针虫 平沙绿僵菌 内参基因 实时荧光定量PCR |
| 收稿时间： | 2020-07-28 |
Screening and application of reference genes for qRT-PCR in bamboo wireworm |
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| YE Bihuan,CHEN Youwu,SHU Jinping,ZHANG Wei,ZHANG Yabo,LI Haibo,SONG Qiyan.Screening and application of reference genes for qRT-PCR in bamboo wireworm[J].Journal of Zhejiang A&F University,2021,38(3):644-651. |
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| Authors: | YE Bihuan CHEN Youwu SHU Jinping ZHANG Wei ZHANG Yabo LI Haibo SONG Qiyan |
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| Affiliation: | 1.Zhejiang Academy of Forestry, Hangzhou 310023, Zhejiang, China2.Institute of Subtropical Forestry, Chinese Academy of Forestry, Hangzhou 311400, Zhejiang, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | |
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