| 黄鳝nanos3基因克隆鉴定及其组织表达分析 |
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| 引用本文： | 何坤,吴华东,张士林,刘铮铮,阮记明,孙艺文,李福贵.黄鳝nanos3基因克隆鉴定及其组织表达分析[J].南方农业学报,2022,53(8):2321-2330. |
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| 作者姓名： | 何坤 吴华东 张士林 刘铮铮 阮记明 孙艺文 李福贵 |
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| 作者单位： | 江西农业大学动物科学技术学院, 江西南昌 330045 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（31860735）；江西省科学计划重点研发项目（20192ACB60009）；江西省教育厅科技计划项目（GJJ200401，GJJ180168） |
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| 摘 要： | 【目的】明确nanos3基因在黄鳝卵巢发育和维持过程中的重要作用，为黄鳝PGCs可视化分子标记、生殖细胞移植及性腺发育分化机制研究打下基础。【方法】通过RACE克隆黄鳝nanos3基因cDNA序列，运用ProtParam、 SOMPA、 SWISS-MODEL、 SignalP、 TMHMM及NetPhos等在线软件进行nanos3蛋白生物信息学分析；采用实时荧光定量PCR检测nanos3基因在黄鳝不同组织中的表达情况，并以冰冻切片荧光原位杂交进行性腺组织定位。【结果】黄鳝nanos3基因cDNA序列全长1289 bp，包括147 bp的5'非编码区 （5'-UTR）、 531 bp的开放阅读框 （ORF）及611 bp的3'非编码区（3'-UTR），共编码176个氨基酸残基。黄鳝nanos3蛋白分子量为19.61 kD，理论等电点（pI）为9.07，为碱性蛋白；在黄鳝nanos3氨基酸序列第108~162位处存在2个锌指基序 “CCHC”结构域，无信号肽和跨膜结构域；蛋白二级结构以无规则卷曲的占比最高 （64.20%），其次是α-螺旋 （占24.43%），延伸链、 β-转角的占比分别为6.82%和4.55%。黄鳝与大刺鳅、射水鱼、斑马鱼等鱼类的nanos3氨基酸序列相似性分别为67.5%、 57.2%和50.3%，与中国林蛙、粗皮蛙等两栖类动物的相似性分别为39.3%和30.3%，与人类、小鼠等哺乳类动物的相似性分别为33.3%和30.9%。nanos3基因在黄鳝肌肉中不表达，在精巢、肾脏、脾脏、脑、肝脏、肠道、心脏和血液中的相对表达量较低，在卵巢中的相对表达量最高，极显著高于在其他组织中的相对表达量（P<0.01），呈明显的组织特异性表达模式；冰冻切片荧光原位杂交分析结果显示，黄鳝nanos3基因仅在生殖细胞中表达，支持细胞中未见表达。【结论】黄鳝nanos3基因进化相对保守，主要在卵巢的生殖细胞中表达，且以细胞质中的表达为主，与核遗传信息的传递相关，是黄鳝性腺发育及分化相关的功能基因。
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| 关 键 词： | 黄鳝 nanos3基因 克隆 生物信息学 组织表达特征 荧光原位杂交 |
| 收稿时间： | 2022-04-13 |
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