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1.
【目的】了解广西贵港地区猪繁殖与呼吸障碍综合征的感染情况,为广西贵港地区猪繁殖与呼吸障碍综合征的监督及防控工作提供参考。【方法】通过对Nsp2基因的分析,合成新的特异性诊断引物,并利用RT-PCR的方法对广西贵港地区111个规模猪场采集的1865份扁桃体同时进行高致病性猪繁殖与呼吸障碍综合征和经典猪繁殖与呼吸障碍综合征的分子流行病学调查。【结果】25个猪场检出92份猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒,场点总阳性率为22. 5%,样品总阳性率为4. 93%。其中9个猪场检测出24份高致病性猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒,场点阳性率为8. 10%,样品阳性率为1. 29%; 18个猪场检测出68份经典猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒,场点阳性率为16. 2%,样品阳性率为3. 65%; 2个猪场同时检测出高致病性猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒和经典猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒。【结论】广西贵港地区规模猪场感染猪繁殖与呼吸障碍综合征的现象较为严重。 相似文献
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[目的]建立具有高敏感性能区分猪繁殖与呼吸综合征病毒经典株和高致病株的双重RT-PCR检测方法.[方法]首先从退火温度与引物浓度先对猪繁殖与呼吸综合征病毒经典株、高致病株的单项RT-PCR方法的条件分别进行筛选与优化,然后对其双重RT-PCR方法的条件进行筛选与优化,并进行特异性与敏感性检测,最后初步应用于临床样品检测.[结果]建立的猪繁殖与呼吸综合征病毒经典株和高致病株双重RT-PCR检测方法不能检出猪流行性腹泻病毒和猪瘟病毒等当前流行较广的其他猪源RNA病毒,对猪繁殖与呼吸综合征病毒经典株、高致病株的检测灵敏度分别是100、200copies/μL.此方法对2020-2021年8个猪场的220份血清样品的检测结果显示,猪繁殖与呼吸综合征病毒经典株、高致病株的个体阳性率分别为7.73％和43.64％,与单项RT-PCR方法检测结果完全一致.[结论]建立了一种高敏感性的猪繁殖与呼吸综合征病毒经典株和高致病株双重RT-PCR检测方法. 相似文献
3.
《安徽农业科学》2020,(14)
为了解华东地区猪繁殖与呼吸综合征的感染状况,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)/聚合酶链反应(PCR)方法对2017—2018年在华东地区各大中小规模猪场采集的210份临床样品进行病原学检测(肺、脾、淋巴结等),并对分离的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)进行测序,由于2017—2018年江苏、安徽和福建一些中小养殖场发生小规模的流产死胎,因此也对其他一些相关常见病毒[如猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)、猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病毒(PRV)]进行了检测,以确定导致流产死胎的主要原因以及猪繁殖与呼吸综合征的流行情况和流行毒株。结果表明:210份样品中,PRRSV阳性样品78份,阳性率为37.1%;PCV2阳性样品189份,阳性率90.0%;PRV阳性样品5份,阳性率2.4%;CSFV阳性样品0份,阳性率0。在这些阳性样品中,福建、浙江、上海、江苏、安徽、江西和山东等地区抗原阳性率有所差别,但都以PRRSV和PCV2为主。通过此次调查了解了华东地区猪繁殖与呼吸综合征的基本流行情况,为今后猪繁殖与呼吸综合征的防控提供了参考。 相似文献
4.
[目的]通过建立的荧光定量PCR方法对猪繁殖与呼吸综合征病毒载量的检测,探究双黄连水煎液在体外对猪繁殖与呼吸综合征病毒增殖的影响.[方法]建立非洲绿猴胚胎肾细胞与猪繁殖与呼吸综合征病毒共感染模型,并应用CCK8法筛选双黄连水煎液的最大安全质量浓度.根据DNA序列数据库公布的猪繁殖与呼吸综合征病毒-N蛋白参考序列,设计特异性引物,构建猪繁殖与呼吸综合征病毒N基因质粒,建立检测猪繁殖与呼吸综合征病毒N基因的荧光定量PCR方法,研究最大安全质量浓度下的双黄连水煎液对猪繁殖与呼吸综合征病毒载量的影响.[结果]双黄连水煎液对非洲绿猴胚胎肾细胞的最大安全质量浓度为6.25 mg/mL,在此安全质量浓度下对猪繁殖与呼吸综合征病毒具有良好的阻断吸附和抑制复制作用,作用效果呈时间和剂量依赖性,而对猪繁殖与呼吸综合征病毒的直接杀灭作用效果不显著.[结论]成功建立了检测猪繁殖与呼吸综合征病毒载量的荧光定量PCR方法,通过此方法检测到双黄连水煎液在6.25 mg/mL时具有抗猪繁殖与呼吸综合征病毒作用. 相似文献
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广西PRRSV、PCV、CSF的混合感染及PRRSV分子病原学研究 总被引：1，自引：0，他引：1
为了弄清2007年发生于广西一些县市猪场的高致病性猪繁殖与呼吸综合征和其他疾病的混合感染情况,从广西7个县市发生高致病性猪繁殖与呼吸综合征的猪场采集病料,进行猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒(PCV)及猪瘟病毒(CSF)检测,并对检测的PRRSV进行分子病原学分析。结果显示,经PCR检测,86份样品中有60份为PRRSV阳性,36份为PCV阳性,2份为CSF阳性,说明发生于广西猪群的PRRSV与PCV共感染情况比较严重。通过PRRSVORF5基因序列比较分析发现,来自广西7个县市不同猪场的PRRSV高度同源,核苷酸序列同源性为98.5%~99.8%,推导编码的氨基酸序列同源性为98.0%~100.0%;与VR2332和LV株的核苷酸序列同源性分别为88.7%~89.7%和62.2%~63.1%,氨基酸序列同源性分别为88.6%~89.6%和60.5%~61.3%,表明7个县市不同毒株的ORF5基因区域变异不大,均属美洲型。 相似文献
6.
间接血凝试验检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体 总被引：3，自引：0，他引：3
以猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）病毒致敏猪红细胞作诊断液,用间接血凝试验（IHA）检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体。检测了可疑猪场80份血清样本,PRRS阳性32份,阳性率40%,与ELISA试验比较符合率98%。用此方法检测PRRS疫苗免疫猪血清,发现其抗体水平在初免后15天升高,二免后15天达最高峰,二免后45天抗体水平消失。 相似文献
7.
为建立一种方便快捷的检测猪繁殖与呼吸综合征的RT-PCR方法,根据GenBank中已发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因设计一对引物,并以合成的cDNA为模板,初步建立了检测猪繁殖与呼吸综合征的RT-PCR方法,进而对对照病毒及采集的病料组织进行了特异性、敏感性和重复性检测。结果显示,该研究建立的RT-PCR方法敏感性高,最低检测阈为10 TCID50/mL,扩增产物的特异性良好,重复性良好,可用于猪繁殖与呼吸综合征的临床诊断及流行病学调查。 相似文献
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猪瘟病毒(CSFV)和猪蓝耳病(猪繁殖与呼吸综合征)病毒(PRRSV)是引起严重的种猪繁殖障碍的病原,而且经常混合感染,及时准确诊断是防治的前提.根据已发表的猪瘟病毒(CSFV)E2基因的保守序列和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7基因的保守序列,设计合成了2对特异引物,分别扩增出大小为509 bp和372 bp的特异性基因片段,通过优化RT-PCR条件,分别对江苏不同地区送检的21份病死猪的血清、淋巴结、肺、肝、脾、心脏等组织进行单重RT-PCR检测.结果4份CSFV阳性,9份PRRSV阳性,其中3份CSFV和PRRSV同时为阳性.结果表明,CSFV和PRRSV单重RT-PCR诊断方法具有高度特异性,可用于临床诊断. 相似文献
9.
《中国畜禽种业》2016,(5)
对广西某市以发热、咳嗽、呼吸困难、皮肤及耳朵发绀和高发病率及高病死率等为主要临床特征的39个发病猪场所采集的53份病料进行了主要病毒病的检测。检测结果显示,猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)阳性30份,阳性率56.60%(30/53);猪2型圆环病毒(PCV2)阳性25份,阳性率47.17%(25/53);猪流感病毒(SIV)阳性21份,阳性率39.62%(21/53);猪瘟病毒(CSFV)未检出阳性;其中可检出两种以上病原的有29份病料,占54.72%(26/53)。检测结果与调查分析表明,猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)、猪2型圆环病毒(PCV-2)和猪流感(SI)是导致该市猪场疾病发生流行的主要病种,而且PRRS、PCV2和SIV常呈多重感染,这为该市发病猪场针对性地做好疫病的防控提供了科学依据。 相似文献
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YANG Ke-li LI Yong DUAN Zheng-ying HUANG Xiang-yong LIU Ze-wen GUO Rui LIANG Wang-wang YUAN Fang-yan ZHOU Dan-na TIAN Yong-xiang 《江西农业学报》2012,24(7)
为建立一种方便快捷的检测猪繁殖与呼吸综合征的RT - PCR方法,根据GenBank中已发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因设计一对引物,并以合成的cDNA为模板,初步建立了检测猪繁殖与呼吸综合征的RT - PCR方法,进而对对照病毒及采集的病料组织进行了特异性、敏感性和重复性检测.结果显示,该研究建立的RT - PCR方法敏感性高,最低检测阈为10 TCID50/mL,扩增产物的特异性良好,重复性良好,可用于猪繁殖与呼吸综合征的临床诊断及流行病学调查. 相似文献
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从疑似猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的发病猪场采集组织和血清样品并按病料分成2组,通过反转录—聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测样品中高致病性PRRSV发生变异的Nsp2部分基因,初步筛选出PRRSV阳性样品后分别通过Marc-145和PAM细胞分离培养。结果表明：从45份阳性病料中成功分离到29份高致病性PRRSV,其中从血清样品中成功分离的约占总数72.5%,从组织样品中成功分离的约占总数27.5%;通过Marc-145细胞分离获得的病毒有19份,通过PAM细胞分离获得的有24份,其中有14份是Marc-145和PAM共同分离得到。试验获得的血清是高致病PRRSV分离的理想样品,该病毒对Marc-145和PAM细胞的敏感性差异不显著。 相似文献
14.
【目的】确定新疆南疆猪养殖场是否存在PRRSV感染,以及感染的PRRSV毒株类型及基因特点,从而针对性的有效防制PRRS。【方法】设计7对引物,对疑似PRRS发病猪场组织样品进行RT-PCR、克隆、测序和序列分析。【结果】47例样品,35例PRRSV阳性,阳性率高达74.47%（35/47）;35株均为美洲型毒株,其中有10株属于高致病性PRRSV,占总检测样品的21.28%（10/47）,占阳性样品的28.57%（10/35）;综合分析本研究采集样品猪养殖场不存在欧洲型毒株。【结论】新疆南疆存在美洲型PRRSV感染,且存在高致病性毒株。 相似文献
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河南地区NADC30-like PRRSV毒株的增殖特性与遗传进化分析 总被引：1，自引：0，他引：1
为研究河南地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行特点和遗传变异情况,采集河南省滑县地区猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)发病猪场中的病料,经研磨、稀释、离心处理后将悬液上清接种于原代猪肺泡巨噬细胞,进行病毒分离培养,结果显示,PAM出现典型细胞病变效应,将得到的分离株命名为HNhx。应用PRRSV N蛋白的特异抗体进行间接免疫荧光(IFA)试验,结果表明,接种HNhx分离株的PAM出现特异性荧光,证明该分离株为PRRSV。应用RT-PCR技术对Nsp2区进行扩增分析,根据扩增目的产物大小推测HNhx分离株为NADC30-like毒株。遗传分析发现,与其他参考毒株相比,HNhx毒株的ORF3、ORF4和ORF5基因与NADC30毒株的同源性最高。基于ORF3、ORF4和ORF5序列构建进化树,系统进化分析的结果表明,HNhx归于NADC30-like亚群。 相似文献
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北京集约化养殖畜禽饲料Zn含量及粪便Zn残留特征研究 总被引：5，自引：1，他引：4
针对集约化养殖中大量使用含Zn饲料添加剂及其在畜禽粪便中的残留问题,采集北京6个郊区县集约化养殖场208个猪、奶牛、鸡饲料样品和204个粪便样品,分析测定了其中Zn含量.结果表明,北京地区集约化养殖饲料和粪便中Zn含量差异很大,猪饲料和猪粪中Zn含量远高于奶牛和鸡.猪、奶牛、鸡饲料中Zn的含量范围分别为72.77～3 170.37 mg·kg~(-1)、13.63～471.39 mg·kg~(-1)、32.64～34.4.67mg·kg~(-1),平均含量分别为347.57、86.44、138.76mg·kg~(-1);猪、奶牛、鸡粪便Zn的平均含量分别为2 333.97、119.41、391.01 mg·kg~(-1),含量范围分别在458.21～14031.79、10.36～502.39、73.15～678.91 mg·kg~(-1)之间.猪饲料和猪粪Zn超标率分别为9.3%和15.0%,奶牛、鸡的饲料和粪便均未超标.畜禽粪便中Zn含量与其饲料中Zn含量之间呈显著或极显著正相关(P<0.05),猪、奶牛、鸡粪便中Zn的平均含量分别是其饲料的6.7倍、1.4倍、2.8倍,表现出一定的"浓缩"效应,其中断奶仔猪饲料和粪便中Zn的平均含量最高,分别为645.37和5 133.64 mg·kg~(-1),"浓缩系数"高达6.61.高Zn含量的畜禽粪便在土地利用时可能会带来土壤污染风险. 相似文献
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陕西省PRRSV与CSFV、PCV2、PRV混合感染的检测 总被引：5，自引：0，他引：5
运用RT-PCR和PCR技术对高热病期间陕西西安、宝鸡、渭南、榆林、汉中、商洛等地区猪场送检的146 份样品进行猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV) 、猪圆环病毒2 型( PCV2) 和猪伪狂犬病毒(PRV)检测.结果显示:被检样品中PRRSV的阳性率达46.6%(68/146);PRRSV与CSFV、PCV2 和PRV 3种病毒均有混合感染现象, PRRSV + CSFV混合感染率为25%(17/68),PRRSV +PCV2为19.1%(13/68),PRRSV + PRV为4.4% (3/68),PRRSV + PCV2+ CSFV为14.7%(10/68), PRRSV + PCV2+ CSFV+PRV为2.9%(2/68).结果表明以PRRSV为主要病原的混合感染在所检测的高热病发病猪群的存在是非常普遍的. 相似文献
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猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒和乙型脑炎病毒多重RT-PCR检测方法的建立 总被引：1，自引：0，他引：1
根据猪瘟病毒(CSFV)的E2基因保守序列、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)的ORF7基因及部分ORF6和3-UTR基因序列和猪乙型脑炎病毒(JEV)的E基因保守序列,设计了3对引物,扩增大小分别为288 bp、430 bp和1 015 bp目的片段.以纯培养病毒抽提RNA,制备cDNA模板,利用3对引物,通过条件的优化,建立了同时检测这3种病毒的多重RT-PCR.CSFV、PRRSV和JEV的RNA最小检出量分别为0.270 ng、0.049 ng、0.067 ng,其它的RNA病毒如TGEV以及DNA病毒如PPV、PrV、PCV-2检测结果为阴性.以β-actin为对照,利用本方法检测了174份临床样品(血清、肺脏和胎儿),其结果为:PRRSV、CSFV和JEV的阳性率分别为30.4%、4.6%和1.7%;CSFV和PRRSV混合感染阳性率为1.7%.同时对临床样品中CSFV、JEV和PRRSV阳性PCR产物进行测序分析,发现CSFV、PRRSV和JEV的PCR产物序列和NCBI数据库中目标基因的同源性分别为92%、90%和89%,这证实了多重PCR的阳性结果为上述3种病毒.结果证明,所建立的多重RT-PCR可用于临床检测. 相似文献