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CD163是仅在单核细胞/巨噬细胞系统细胞膜上发现的跨膜分子,是清道夫受体超家族成员.CD163不仅与内源性配体结合,调节炎症反应,还能作为细菌、病毒的受体,与外源性配体结合.CD163是PRRSV重要的受体分子,在病毒脱衣壳和基因组释放过程起关键性作用,能够使PRRSV在非敏感细胞系中复制.近年来,在CD163结合的PRRSV囊膜糖蛋白以及相关结合功能区等领域取得了很多研究成果,为研究PRRSV入侵细胞的机制,描绘病毒在细胞中的复制过程,揭示病毒的致病机制奠定了重要基础. 相似文献
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猪繁殖与呼吸综合征,又称猪蓝耳病,是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染、引发的猪的一种流行性传染病。PRRSV病毒通过感染机体的巨噬细胞或单核细胞,进一步引发怀孕母猪妊娠后期流产或胎儿死亡。同时,该病毒感染仔猪后,可引发机体较为严重的呼吸系统相关疾病。目前研究发现,PRRSV在感染过程中,需要与CD163蛋白分子结合,从而介导其自身的膜结构与宿主细胞膜进一步融合,从而感染宿主细胞。本文系统地介绍了PRRSV的基因组结构、感染途径以及与CD163蛋白的相关性,以期为进一步研发相关抗体及生产蓝耳病抗性的猪种奠定基础。 相似文献
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猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种以母猪出现繁殖障碍及仔猪出现严重呼吸道症状的急性传染病，给养殖业带来了严重的经济损失。众多科研人员通过对PRRSV受体的研究逐步了解到该病毒的受体种类和作用机制，在受体蛋白CD169、硫酸乙酰肝素、波形蛋白、DC-SIGN(CD209)、CD151、CD163和NMHC II-A(或MYH9)中，PRRSV主要是通过CD163受体入侵感染，而这过程中又有很多因素增强或减弱CD163的表达，从而增强或抑制PRRSV的感染。本文通过对PPPSV受体蛋白CD163的功能、CD163结构域与PRRSV感染之间的关系进行总结，进一步了解PRRSV的作用机制，以及通过对影响CD163表达因素的研究进行综述，以期为PRRSV受体蛋白CD163的后续研究提供一些思路及参考。 相似文献
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《黑龙江畜牧兽医》2017,(14)
为了探索猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)细胞受体CD163在宿主感染PRRSV过程中的表达情况,根据CD163的序列在其保守区设计了1对特异性引物,基于SYBR GreenⅠ荧光染料建立了一步法检测CD163的实时荧光定量RT-PCR(real time RT-PCR)法,并对该方法进行了特异性、敏感性、重复性试验及样品检测试验。结果表明:建立的方法具有较高的特异性,PRRSV的其他几个受体(CD151、HS)均为阴性反应;对CD163的检测下线为10个拷贝数的模板RNA,比常规RT-PCR方法的灵敏度高10倍;对样品进行3次组内和组间重复试验,变异系数(CV)2%,具有较好的重复性和稳定性;利用该方法对PRRSV感染Marc-145细胞后不同时间段CD163的转录水平进行检测,结果显示CD163在48小时时的mRNA含量明显高于其他各时间段。说明所建立的针对CD163的检测方法完全可以应用于临床样品的检测。 相似文献
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为制备兔抗猪CD163多克隆抗体,采用RT-PCR方法从猪PAMRNA中扩增CD163胞质外区部分基因SRCR4-5,克隆至pGEX-6p-1原核表达载体,在IPTG诱导下获得约50000以包涵体形式表达的重组蛋白。WesternBlotting分析表明,表达产物能够被GST单抗所识别。用该重组蛋白免疫兔制备多抗血清,经间接ELISA检测,多抗血清效价可达10^5,流式检测发现可与Marc-145和PAM上的天然CD163分子相互作用。抗体阻断试验证明制备的多抗血清可以部分阻断PRRSV感染。本试验为进一步研究PRRSV与受体一CDl63相互作用机制打下了基础。 相似文献
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为构建稳定表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)受体CD163的HEK293细胞系,本研究采用RT-PCR方法从猪肺泡巨噬细胞(PAM)总RNA中扩增CD163基因并将其克隆至真核表达载体pc DNA3.1(+)中,构建重组质粒pc DNA-CD163。将该重组质粒转染HEK293细胞,并利用G418筛选、纯化,获得了稳定表达CD163受体蛋白的HEK293CD163细胞系。RT-PCR、流式细胞术及western blot检测结果表明,该细胞系在传代至15代后,CD163在HEK293细胞中仍然能够稳定表达。在该细胞系中接种PRRSV后进行间接免疫荧光及噬斑试验检测表明,病毒能够通过CD163感染HEK293CD163细胞并在其中增殖。该细胞系的建立为进一步研究PRRSV的侵入细胞和致病机制提供了病毒在体外增殖的易感细胞系。 相似文献
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从猪肺泡巨噬细胞(PAM)中提取总RNA为模板,采用RT-PCR法获得猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的受体CD163全基因,将该基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1/V5-HIS A上,构建出真核重组质粒pcDNA3.1-CD163,经酶切和DNA测序证明获得了CD163基因,其序列与GenBank报道序列比较,核苷酸同源性为99.37%。将测序正确的CD163基因在脂质体LipofectamineTM2000介导下转染PK-15细胞,通过间接免疫荧光(IFA)检测到了CD163在PK-15中的表达。将转染的细胞感染PRRSV后,经IFA检测转染CD163的细胞能够被PRRSV感染。 相似文献
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为建立检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)允许细胞表面的Sn和CD163受体的方法,本研究设计针对Sn和CD163基因的特异性引物和荧光探针,建立了检测PRRSV Sn和CD163受体的荧光定量RT-PCR方法.结果显示,该方法在检测101 copies/μL～108 copies/μL模板范围内具有良好的线性关系.标准曲线的相关系数r值均大于0.996,扩增效率分别为100％和107％;该检测方法对Sn和CD163的检测下限均为10拷贝,敏感性高;批内重复试验和批间重复试验的变异系数均小于5％,具有良好的重复性.利用该方法对PRRSV感染肺泡巨噬细胞(PAM) 72 h后Sn和CD163受体mRNA的转录水平进行了检测,结果表明Sn和CD163受体的转录 水平显著上调.本研究为PRRSV病毒感染后两种主要受体变化趋势的研究提供了有效的检测方法. 相似文献
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试验旨在构建一株高效表达猪CD163(pCD163)的Marc-145细胞系,为猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的临床分离和疫苗生产奠定基础。根据GenBank中序列设计引物从猪肺泡巨噬细胞(PAM)中扩增pCD163基因,将其插入真核表达载体pCI-neo构建真核表达质粒pCI-pCD163,将该重组质粒转染Marc-145细胞,通过G418筛选、单克隆化并扩大培养筛选获得表达pCD163的Marc-145细胞系,IFA、Western blotting鉴定其表达情况。IFA结果显示,构建的pCD163-Marc细胞系中荧光明显亮于普通Marc-145细胞;Western blotting结果显示,pCD163-Marc细胞系中CD163蛋白表达量约为对照Marc-145细胞中CD163蛋白表达量的8.7倍。且该细胞系可稳定传至20代,各代次之间表达量无差异。证明高效表达猪CD163的Marc-145细胞系构建成功。 相似文献
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（目的）研究旨在克隆猪CD163 (pCD163)基因、体外表达CD163蛋白。（方法）采用RT-PCR扩增猪CD163基因，运用生物信息学软件分析其核苷酸和编码氨基酸序列，将猪CD163的两个截短基因片段（1-1749 bp和1717-3348 bp）克隆至原核表达载体pGEX-4T-1，构建重组原核表达载体，转化Transetta(DE3)菌株，IPTG诱导蛋白表达，采用SDS-PAGE和Western blot进行蛋白鉴定。（结果）结果表明，pCD163开放阅读框为3348 bp(GenBank:OM321546)，编码1116 aa，蛋白分子量为120.5 kDa，该基因与已经测定的人、绿猴、牛、狼的CD163的核苷酸相似性依次为87.8%、88%、87.4%和88%,pCD163基因与抹香鲸和牛的CD163基因亲缘关系最近，与人、狼和绿猴的亲缘关系相对较近；pCD163截短片段1-1749蛋白分子量为92 kDa，截短片段1717-3348蛋白分子量为85 kDa，均以包涵体形式表达。（结论）试验成功克隆了pCD163基因，两个截短基因片段在原核细胞中均以包涵体形式表达，为后... 相似文献
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《中国兽医学报》2016,(8):1273-1277
本研究旨在分析CD163受体与Marc-145细胞中230 000蛋白的相互作用区域。使用Scanprosite软件对MARC-145细胞的CD163蛋白结构和功能域进行预测,结合稀有密码子分析软件对CD163进行分段,分别构建原核表达载体pET-28α-(M1、M2、M3),利用镍柱纯化重组蛋白,通过免疫共沉淀分析分段蛋白M1、M2和M3与230 000蛋白的相互作用。经PCR、双酶切及测序鉴定表明所构建的原核表达载体是正确的;SDS-PAGE检验抗独特型单克隆抗体Mab2-5G2能够识别和沉淀MARC-145细胞中230 000蛋白;通过Western blot鉴定证明230 000蛋白与M1和M3蛋白相互作用。230 000蛋白与CD163蛋白相互作用位点主要在60~777,2 143~3120nt区域内,为深入探索CD163与230 000蛋白相互作用位点奠定基础。 相似文献
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【目的】试验旨在利用CRISPR/Cas9基因编辑技术获得CD163(cluster of differentiation 163)单等位基因表达的永生化猪肺泡巨噬细胞系(immortalized porcine alveolar macrophages, iPAMs),并探究其介导猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)感染的特征,为深入研究CD163基因在PRRSV感染中的作用机制奠定基础。【方法】在猪CD163基因外显子1区域设计8条向导RNA(single guide RNA,sgRNA),并将其连接到pX458载体中,通过T7E1酶切试验检测不同sgRNA载体的活性;将活性较高的3条sgRNAs表达载体电转染到iPAMs中,通过流式细胞术分选单克隆细胞,对获得的单克隆细胞进行基因型鉴定、蛋白表达检测、脱靶分析以及PRRSV感染分析。【结果】在设计的8条sgRNAs中有3条基因编辑效率在28%以上。基因型鉴定结果表明,50株片段敲除的单克隆细胞中有4株符合预期的CD163单等位... 相似文献
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以茶皂素(Teasaponin,TS)作为候选药物,研究茶皂素对Marc-145细胞受体CD163和波形蛋白(Vimentin)基因合成和蛋白表达的影响,以及茶皂素是否能通过细胞凋亡内源性通路影响PRRSV感染细胞,探究茶皂素抗PRRSV的作用机制。通过qRT-PCR和Western blot检测TS对细胞受体CD163和Vimentin的基因合成和蛋白表达的影响。运用Western blot技术检测TS对细胞内源性凋亡通路启动子caspase-9活化的影响,初探TS的抗PRRSV机制。qRT-PCR结果表明TS能显著抑制感染PRRSV的Marc-145细胞受体CD163和Vimentin基因的合成。Western blot结果表明TS能显著抑制细胞受体CD163和Vimentin的蛋白表达。TS能够引起细胞内源性凋亡通路启动子caspase-9的活化。研究表明,TS能抑制PRRSV在Marc-145细胞上的穿入过程,从而达到抗PRRSV的作用;亦可通过激活细胞凋亡内源性通路以早期促进细胞凋亡的方式产生抗PRRSV的作用。 相似文献
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为了制备猪源CD163受体蛋白鼠源多克隆抗体并检验其病毒阻断效力,采用RT-PCR方法扩增了猪肺泡巨噬细胞(PAM)CD163受体SRCR4-6功能区域片段,将其克隆至载体pET-32a中,并在大肠杆菌中表达重组CD163受体蛋白,纯化后的重组蛋白与弗氏佐剂充分混合乳化;采用皮下多点注射免疫BALB/c小鼠,经3次免疫后获得多克隆抗体,应用间接ELISA方法检测抗体含量,以病毒阻断试验和间接免疫荧光法验证其病毒阻断效力。结果显示:重组蛋白主要以包涵体的形式表达,相对分子量约为50 kDa,制备的CD163受体蛋白多克隆抗体含量较高,经2～8倍稀释后,抗体阻断PRRSV感染细胞的能力逐渐下降。研究表明,在大肠杆菌中成功表达了PRRSV重组CD163受体蛋白,制备的鼠源多克隆抗体具有较明显的阻断PRRSV感染细胞的效力。本研究为深入研究病毒的入侵机制和PRRSV的防控提供了试验基础和新的思路。 相似文献
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《畜牧兽医学报》2017,(10)
CD4分子表达于成熟的CD4~+T细胞表面,能够指导T细胞的正常分化与成熟,识别抗原、介导免疫应答并参与免疫调节。DNA甲基化对T细胞亚群的分化调控等方面具有重要作用,特别是CD4基因的DNA甲基化显著影响CD4+T细胞数量和功能,能够在一定程度上改变家畜的免疫应答能力或抗病性能,以对抗或适应外界环境改变。目前,已发现猪和奶牛的CD4基因DNA甲基化可调控宿主细胞的免疫反应,但在羊和马上鲜有报道。为深入了解家畜复杂疾病形成的分子基础,以及为利用分子标记有效选育抗病个体提供新的思路,本文主要就CD4+T淋巴细胞分化过程中,白细胞分化抗原CD4基因的DNA甲基化修饰对免疫反应的调控机制,以及其在家畜抗病育种中的应用前景进行综述和展望。 相似文献