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取新生1d的ICR小鼠的脑,经过机械分离和体外培养获取神经千细胞.利用免疫组化和RT-PCR对神经干细胞进行鉴定,发现原代的神经干细胞的纯度能达到95%以上.通过计数绘制第1代和第4代神经干细胞生长曲线图,发现二者生长曲线非常相似,说明第4代的神经干细胞仍具有较强的生长能力.在体外利用聚合后0.01μmol/L、0.1μmol/L、1μmol/L、2.5μmol/L的Aβ1-42寡聚体分别作用于神经干细胞8h、24h和48h,通过MTT和克隆球计数法检测Aβ1-42对神经干细胞的增殖的影响,结果表明,随着Aβ1-42浓度增加和作用时间的延长,细胞的存活率逐渐降低.通过双盲法,免疫荧光下统计Aβ1-42寡聚体作用后神经干细胞的转分化率,检测Aβ1-42对神经干细胞的分化的影响,发现Aβ1-42对神经干细胞的分化没有明显影响,且对Aβ1-42浓度和作用时间也无依赖性. 相似文献
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【目的】获得转EGFP基因神经干细胞并监测其自我更新、增殖和多向分化潜能;通过用EGFP对神经干细胞进行标记和体外追踪实验,为EGFP作为示踪标记对神经干细胞进行体内移植研究奠定基础。【方法】利用神经干细胞培养技术体系,从胎龄30 d猪胎儿脑组织中分离培养神经干细胞,通过脂质体介导转染技术,将EGFP基因导入神经干细胞,诱导转基因神经干细胞贴壁分化,观察其体外增殖、分化特点。采用RT-PCR技术检测干细胞和分化细胞表面标志或相关基因。【结果】成功分离培养出神经干细胞,获得转EGFP基因神经干细胞,神经干细胞在表达EGFP的同时仍具有多向分化潜能。神经干细胞中Nestin表达强阳性,NogoA、DCX、CyclinD2、CD133、Hes1、Oct4、CD-90、Nanog和Sox2表达阳性;体外诱导的神经干细胞可以分化为星形胶质细胞(表达GFAP)、少突胶质细胞(表达GalC)和神经元细胞(表达NF、NSE和MAP2);能分化为脂肪细胞(表达LPL和PPARγ-D)、成骨细胞(表达Osteonectin和Osteocalcin)、肌细胞(表达myf-5、myf-6和myoD)、内皮细胞(表达CD31、CD34、CD144和eNOS)和软骨细胞(表达COL2A1)。【结论】从猪胎儿大脑组织分离神经干细胞具有可行性和有效性,转EGFP基因神经干细胞具有自我更新、增殖和多向分化潜能,可以用EGFP对神经干细胞进行标记、追踪,作为示踪标记进行神经干细胞体内移植研究。 相似文献
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骨髓基质细胞诱导的神经干细胞移植对颞叶癫痫大鼠学习记忆障碍的改善作用 总被引：1，自引：0，他引：1
探讨骨髓基质细胞诱导的神经干细胞移植至海人酸(kanic acid,KA)致痫大鼠海马后对学习记忆障碍的改善作用,从而为干细胞移植治疗癫痫提供理论依据.体外分离大鼠骨髓基质细胞,并在特定条件下培养、诱导分化为神经干细胞.在海马内注射KA建立大鼠癫痫模型,之后把诱导的神经干细胞移植至KA致痫鼠的海马内,用Morris水迷宫测试大鼠学习记忆能力,用PCR方法检测海马内NSE、c-fos和SEZ-6基因表达,采用Western blot技术检测海马内NSE、C-FOS和SEZ-6蛋白表达.结果显示:骨髓基质细胞成功诱导分化为神经干细胞,诱导分化的神经干细胞移植到脑内可明显改善大鼠的学习记忆障碍;移植组大鼠海马内NSE、c-fos和SEZ-6基因表达下调,NSE、C-FOS和SEZ-6蛋白表达亦下调,与阳性对照组及假移植组比较,差异显著(P<0 05).说明骨髓基质细胞诱导的神经干细胞移植至KA致痫大鼠海马后对学习记忆障碍有明显的改善作用,其机制可能与NSE、c-fos、SEZ-6基因和蛋白的表达下调相关. 相似文献
4.
目的：比较昆明小鼠胚胎中脑腹侧与额叶皮质来源的神经干细胞生物特性的差异,为更好的研究和利用神经干细胞奠定基础。方法：无菌条件下分离胚鼠中脑腹侧组织与额叶皮质,经消化及机械吹打成单细胞后接种于含有B27、bFGF的DMEM／F12培养基,培养扩增;倒置显微镜观察比较生长状况;机械方法传代;10％血清接种分化;免疫细胞化学方法染色鉴定神经干细胞及其子代细胞的分化方向,并作比较。结果：小鼠胚胎中脑腹侧与额叶皮质均存在神经干细胞,其免疫细胞化学鉴定均呈Nestin阳性;但额叶皮质所含神经干细胞明显多于中脑腹侧,也更宜成球;结论：同样条件下,额叶皮质神经干细胞比中脑腹侧神经干细胞更易培养与增殖,但分化较晚。 相似文献
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神经干细胞广泛存在于胚胎及成年哺乳动物神经系统中。本文就近年神经干细胞的研究进展作一简要综述。 相似文献
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目的:探讨小鼠胚胎中脑分离神经干细胞的体外培养方法,以获取高纯度的神经干细胞,为神经干细胞的深入研究提供试验材料。方法:无菌条件下分离孕12~13 d小鼠胚胎中脑曲,制成单细胞悬液,碱性成纤维生长因子(bFGF)和B27存在的培养基中培养扩增,通过免疫细胞化学染色鉴定神经干细胞及子代细胞的分化方向,流式细胞术检测TH阳性神经元比例。结果:培养的部分细胞体外分裂增殖,同时表达神经干细胞特异性抗原nestin,并向神经细胞和胶质细胞分化并经流式细胞仪检测自然分化为多巴胺能神经元的比例为3.25%。结论:小鼠胚脑中脑存在具有多分化潜能的神经干细胞,它们能在体外稳定培养、传代和分化。 相似文献
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目的：探讨小鼠胚胎中脑分离神经干细胞的体外培养方法．以获取高纯度的神经干细胞．为神经干细胞的深入研究提供武验材料。方法：无菌条件下分离孕12～13d小鼠胚胎中脑曲．制成单细胞悬液，碱性成纤维生长园子（bFGF）和B27存在的培养基中培养扩增．通过免疫细胞化学染色鉴定神经干细胞及子代细胞的分化方向，流式细胞术检测TH阳性神经元比例。结果：培养的部分细胞体外分裂增殖．同时表达神经干细胞特异性抗原nestin，并向神经细胞和胶质细胞分化并经流式细胞仅检测自然分化为多巴胺能神经元的比例为3．25%。结论：小鼠胚脑中脑存在具有多分化潜能的神经干细胞．它们能在体外稳定培养、传代和分化。 相似文献
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山羊骨髓间充质干细胞的分离培养及向神经细胞诱导分化的研究 总被引：2，自引：0，他引：2
采用体外细胞培养技术将山羊胎儿骨髓中的干细胞从骨髓血中分离并培养扩增;分别用含β-巯基乙醇或当归的培养液诱导骨髓间充质干细胞分化为神经细胞,免疫组织化学鉴定神经丝蛋白和神经元特异性烯醇化酶的表达.结果表明,通过贴壁培养法,可使低丰度的山羊骨髓间充质干细胞在体外实现分离扩增;诱导后的细胞强表达神经丝蛋白和神经元特异性烯醇化酶.还建立了一种简单易行的体外分离与培养山羊骨髓间充质干细胞的方法,同时表明山羊骨髓间充质干细胞同样具有分化为神经细胞的潜能,为今后对某些疾病的治疗提供了理想的动物模型. 相似文献
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目的：探讨IL-1β对鼠胚脑皮质区与中脑区来源的神经干细胞向酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase,TH）阳性细胞分化的差异。方法：体外分别分离、培养胚鼠脑皮质区与中脑区来源的神经干细胞并传代,在有血清条件下IL-1β诱导分化,并设空白组对照,分化结果行免疫荧光细胞化学技术鉴定,镜下计数阳性细胞比例。结果：经诱导,中脑神经干细胞在IL-1β作用下分化出TH阳性细胞,其中比例约14％;皮质神经干细胞未分化出TH阳性细胞。结论：中脑神经干细胞在IL-1β作用下可以明显分化出TH阳性细胞,而皮质神经干细胞不能分化,二者体外在向TH阳性细胞分化性能上存在差异。 相似文献
10.
钱铮 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》2009,35(2)
日本庆应大学的研究人员通过仅向人类神经干细胞中植入2个基因，成功培育出了人类诱导多功能干细胞（iPS细胞）．研究人员希望这一技术能降低未来iPS细胞移植后的癌变风险. 相似文献