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卵母细胞体外成熟(IVM)是山羊胚胎体外生产的关键步骤,其对山羊体外生产胚胎的数量和质量均具有非常重要的意义。此外,IVM还可以满足胚胎工程技术如体细胞核移植、转基因动物生产对卵母细胞的大量需求。然而,由于山羊卵母细胞体外成熟研究起步较晚,与牛、猪等家畜相比仍然存在不小的差距,存在诸如体外成熟率低、胚胎质量不佳、培养体系可重复性低等问题。因此,分析山羊卵母细胞体外成熟的主要影响因素,提高山羊卵母细胞体外成熟率,建立山羊卵母细胞体外成熟稳定培养体系,就成为了近年来山羊胚胎体外生产的研究重点。论文综合国内外学者近年的相关研究,对可能影响山羊卵母细胞体外成熟效率的各种因素进行了综述分析,同时对山羊卵母细胞体外成熟现存问题进行了分析,以期为建立山羊卵母细胞体外成熟体系提供理论支持。 相似文献
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羊卵母细胞的体外成熟培养技术(IVM)是体外受精技术和胚胎工程的基础环节.卵母细胞体外成熟培养是指离体条件下的卵母细胞由未成熟状态发育为成熟状态.一般认为,可以把卵母细胞生发泡破裂(GVBD)作为向成熟方向发育的标志.GVBD的主要特征是染色质高度凝集,核仁消失及核膜破裂等[1].GVBD一旦发生,卵母细胞就将向着MⅠ发育并最终发育到MⅡ期、排出第一极体而达到成熟状态[2-3].IVM后卵母细胞可受精分裂成胚胎并移植获得妊娠.卵母细胞成熟优劣对随后受精、胚胎卵裂、囊胚形成均具有重要的影响,是制约体外生产囊胚率和胚胎移植受胎率的关键.生产中可通过卵巢卵母细胞体外培养成熟结合体外受精、胚胎移植等技术,得到大量廉价优质胚胎,为解决胚胎供需不足开辟了一条新的途径. 相似文献
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本研究利用卵母细胞体外成熟(IVM)、体外受精(IVF)技术,体外生产牛胚胎,以获得试管牛.结果表明:卵母细胞体外培养22～24h后,其成熟率为85％;体外受精率为83％.体外受精卵分别在颗粒细胞单层(GCM)和输卵管细胞单层(OCM)上培养,其胚胎最后产量(以授精时卵母细胞的数目为基数)分别为19％和29％,差异极显著(P<0.01).若体外受精卵先在GCM中培养72h后,再将已发生卵裂的(>4细胞)胚胎移到OCM中培养,其胚胎最后产量为35％.由此表明,早期胚胎在其发育过程中至少存在着3个发育相期,即1～8细胞、8～16细胞和16细胞～囊胚3个阶段,各阶段需要不同的培养环境.IVM/IVF胚胎移植到受体黄牛体内后,其足月时的妊娠率为15％.第一头试管犊牛已于1993年4月18日凌晨产出. 相似文献
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为研究表皮生长因子(EGF)、β-巯基乙醇(β-ME)、亚硫磺酸(HTAU)对牛卵母细胞体外成熟(IVM)及孤雌激活胚胎体外发育(IVC)效果的影响,实验采集牛卵巢采用切割法收集卵丘-卵母细胞复合体(COCs)随机处于不同浓度EGF、β-ME培养液成熟培养24 h后孤雌激活,研究其在不同胚胎培养液中的后续发育,以期筛选出最好的牛卵母细胞IVM-IVC条件。结果表明:添加25、50、100 ng/mL EGF组的成熟率、卵裂率均高于对照组,其中50 ng/mL EGF组的成熟率、卵裂率与对照组差异显著(P<0.05);50、100、500μmol/L的β-ME对牛卵母细胞体外成熟没有促进作用;50 ng/mL EGF与50、100μmol/Lβ-ME组合并无协同作用;胚胎培养基中添加不同浓度EGF对早期胚胎的体外发育无显著影响;而添加100μmol/Lβ-ME组的囊胚率、囊胚细胞数均极显著高于对照组(P<0.01);在成熟液中添加50 ng/mL EGF和100μmol/Lβ-ME、胚胎培养液中添加0.5 mmol/L HTAU孤雌胚发育最好。 相似文献
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《中国畜牧杂志》2016,(21)
为了探讨小卵泡液、放线菌酮(CHX)对卵母细胞预成熟、囊胚滋养层细胞囊泡(TVS来源于体外受精培养14 d的滋养层细胞)、维生素对牛体外胚胎质量的影响。在B超仪下进行牛活体取卵(OPU),从牛活体卵巢采集卵母细胞,进行体外成熟、体外受精、早期胚胎体外培养。结果表明:10%小卵泡液及8%CHX的卵母细胞预成熟4 h组显著优于对照组;在体外受精及早期胚胎培养液CR1aa中添加10μg/m L维生素C组与TVS共培养组的卵裂率和囊胚发育率均高于其他试验组(P0.05);体外胚胎与TVS共移植受胎率显著高于对照组(P0.05)。说明活体采集的卵母细胞经体外预成熟处理,可以达到核质同期化的目的,早期胚胎的培育过程中加入TVS、抗氧化剂等可以克服早期胚胎的发育阻滞,提高体外胚胎的囊胚发育率。 相似文献
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本研究利用卵母细胞体外成熟(IVM)、体外受精(IVF)技术,体外生产牛胚胎,以获得试管牛。结果表明:卵母细胞体外培养22～24h后,其成熟率为85％;体外受精率为83％。体外受精卵分别在颗粒细胞单层(CCM)和输卵管细胞单层(OCM)上培养,其胚胎最后产量(以授精时卵母细胞的数目为基数)分别为19％和29％,差异极显著(P<0.01)。若体外受精卵先在CCM中培养72h后,再将已发生卵裂的(>4细胞)胚胎移到OCM中培养,其胚胎最后产量为35％。这表明:早期胚胎在其发育过程中至少存在着三个发育时期,即1—8细胞、8—16细胞和8细胞—囊胚三个阶段,各阶段需要不同的培养环境。IVM/IVF胚胎移植到受体黄牛体内后,其足月时的妊娠率为15％。 相似文献
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牛卵丘细胞对卵母细胞体外成熟与孤雌发育的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
试验以牛卵泡内卵丘-卵母细胞复合体(COCs)为材料,探讨了牛卵丘细胞包裹程度对卵母细胞体外成熟(IVM)和孤雌胚胎(PAEs)发育的影响。试验1,将COCs随机分为2组,在开展IVM前,将其中一组COCs的卵丘细胞机械吹打去除成为机械裸卵(DOs),研究卵丘细胞层存在与否对卵母细胞体外核成熟(排出第一极体)和孤雌激活后发育能力的影响;试验2,根据COCs卵丘细胞包裹层数将COCs分为3组,即卵丘细胞层少(1～4层)的COCs为A组、卵丘细胞层多(5层以上)的COCs为B组及包裹5层以上卵丘细胞且附带卵泡壁颗粒细胞层(FSP)的COCs为C组,研究卵丘细胞层包裹程度对卵母细胞的体外核成熟和孤雌激活后胚胎发育能力的影响。结果表明:卵丘细胞的存在更有利于卵母细胞体外成熟和孤雌胚胎发育;COCs中卵丘细胞包裹层数对卵母细胞体外核成熟率没有显著影响,但包裹卵丘细胞层数多且附带FSP的卵母细胞,其PAEs的囊胚率显著高于包裹卵丘细胞少的卵母细胞PAEs。 相似文献
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近年来，体外胚胎生产(in vitro embryo production, IVP)技术取得了很大进步，尤其是卵母细胞活体采卵(ovum pick-up, OPU)技术得到广泛应用。OPU是20世纪90年代发展起来的一项新型的能获得优秀种母牛卵母细胞的技术，该技术在动物胚胎生产和发育机理研究及人类辅助生育技术临床实践中有着广阔的应用前景。可以提高种母畜和珍贵野生动物的资源保护效率，提高优良母畜的遗传潜力，为奶牛生物技术发展提供必要的支撑技术。卵母细胞的质量是IVP系统取得成功的关键，卵母细胞的体外成熟(in vitro maturation, IVM)是成功受精和胚胎发育必不可少的步骤。卵母细胞IVM完成了卵母细胞的细胞质和核成熟，准备了发育至胚胎基因组激活所必需的所有必要成分。但体外成熟的卵母细胞发育能力低于体内成熟卵母细胞，卵母细胞减数分裂和细胞核质成熟不同步，氧化应激损伤等对卵母细胞成功受精和胚胎发育非常重要，因此，需要进一步提高卵母细胞体外成熟能力，以改善牛体外胚胎生产系统。本文从卵母细胞体外成熟面临的核质成熟不同步，氧化应激等问题进行概述，同时，叙述C型钠肽、褪黑素、FLI... 相似文献
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目前牛卵母细胞体外成熟培养（IVM）技术体系已经建立起来，并在不断的探索与完善当中。国内外的研究热点主要集中在各种因素对体外生产步骤的影响上，尤其是对卵母细胞IVM和胚胎发育阻滞的研究，突破这些难点将有利弄清卵母细胞成熟的机理，促进胚胎操作技术和商业化胚胎IVP快速发展，在奶牛与肉牛的扩繁与母畜资源利用方面发挥巨大作用。本文将就现阶段牛卵母细胞体外成熟培养体系及影响因素的研究情况加以综述。 相似文献
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《畜牧兽医学报》2020,(5)
随着全球马产业的发展,马发挥的经济价值越来越大。辅助生殖技术有利于发挥优良马匹的潜在价值。马卵母细胞体外成熟(IVM)是辅助生殖技术重要的组成部分,卵母细胞的获取是体外成熟的前提,切刮法能从离体卵巢中获得较多的马卵母细胞,而活体采卵技术(OPU)则能持续地获得卵母细胞,并能较好的保存马卵母细胞的发育能力。扩张型卵母细胞的成熟率高于紧密型卵母细胞,母马的年龄会影响到其卵母细胞的质量。马卵母细胞体外存放较长时间不会影响其发育能力,现在已有较为成熟的体系能使马卵母细胞在体外保存24 h以上而不影响其成熟率。在马卵母细胞成熟体系中常用的基础培养液是M199,添加胎牛血清(FBS)、促卵泡素(FSH)、促黄体生成素(LH)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)等物质能显著提高成熟率,常用培养环境为38～39℃,5%CO_2饱和湿度下培养,培养时间30 h。成熟的卵母细胞有扩张的卵丘细胞和极体,且成熟的卵母细胞的细胞骨架及微管结构也会发生变化。本文针对马卵母细胞的采集和体外成熟培养的相关研究进行总结,重点阐述了不同采集技术的回收率以及影响马卵母细胞体外成熟率的关键因素,以期对今后马卵母细胞体外成熟的进一步研究及后期体外受精技术的发展提供借鉴与参考。 相似文献
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近年来,随着卵母细胞体外成熟(IVM)、体外受精(IVF)以及细胞核移植技术的不断发展,牛胚胎的体外生产已经在几个不同的培养体系中获得了成功.但是,卵母细胞生长发育是一个非常复杂的过程,受多种因素的影响,有些因素的作用对于同种类动物的卵母细胞或体外/体内培养条件下的卵母细胞有着较大的差别.要找出各种动物卵母细胞体外培养的最佳方案以提高卵母细胞体外成熟率,尚有许多工作需要做.研究以延边黄牛卵母细胞为试验材料,试图探明不同浓度的半胱氨酸对延边黄牛卵母细胞体外成熟和体外受精的影响,现报道如下. 相似文献
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随着全球马产业的发展,马发挥的经济价值越来越大。辅助生殖技术有利于发挥优良马匹的潜在价值。马卵母细胞体外成熟(IVM)是辅助生殖技术重要的组成部分,卵母细胞的获取是体外成熟的前提,切刮法能从离体卵巢中获得较多的马卵母细胞,而活体采卵技术(OPU)则能持续地获得卵母细胞,并能较好的保存马卵母细胞的发育能力。扩张型卵母细胞的成熟率高于紧密型卵母细胞,母马的年龄会影响到其卵母细胞的质量。马卵母细胞体外存放较长时间不会影响其发育能力,现在已有较为成熟的体系能使马卵母细胞在体外保存24 h以上而不影响其成熟率。在马卵母细胞成熟体系中常用的基础培养液是M199,添加胎牛血清(FBS)、促卵泡素(FSH)、促黄体生成素(LH)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)等物质能显著提高成熟率,常用培养环境为38~39℃,5%CO2饱和湿度下培养,培养时间30 h。成熟的卵母细胞有扩张的卵丘细胞和极体,且成熟的卵母细胞的细胞骨架及微管结构也会发生变化。本文针对马卵母细胞的采集和体外成熟培养的相关研究进行总结,重点阐述了不同采集技术的回收率以及影响马卵母细胞体外成熟率的关键因素,以期对今后马卵母细胞体外成熟的进一步研究及后期体外受精技术的发展提供借鉴与参考。 相似文献
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本试验以屠宰场获取的奶水牛卵巢为试验材料,收集卵母细胞进行体外成熟培养(IVM)、体外受精(IVF)及早期胚胎培养(IVC)。研究激素(FSH、LH、E2、P4)的不同浓度对奶水牛卵母细胞成熟和早期胚胎发育的影响,以期探讨奶水牛卵母细胞成熟和早期胚胎体外培养发育机制,优选不同激素的最佳浓度。结果表明:添加FSH试验组奶水牛颗粒细胞扩散率和卵裂率高于未添加试验组(P<0.05);添加LH试验组奶水牛颗粒细胞扩散率、卵裂率及8-细胞率与未添加试验组比较,差异不明显(P>0.05);17β-E2试验组(1.0μg/mL)的奶水牛颗粒细胞扩散率、卵裂率及8-细胞率高于未添加试验组(P<0.05);添加P4试验各组(0.9μg/mL、1.2μg/mL)的颗粒细胞扩散率明显低于未添加试验组(P<0.01)。 相似文献
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铁对牛卵母细胞体外成熟和体外受精的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
本试验研究铁对体外生产牛胚胎的影响。从屠宰场收集牛卵巢,抽取卵巢表面的卵母细胞,采用体外成熟和体外受精的方法,研究不同浓度的铁(0.45mg/L,0.81mg/L,1.96mg/L,2.78mg/L)对牛卵母细胞体外成熟和体外受精的影响。结果如下:当卵母细胞在体外培养22h时,不同浓度的铁之间对卵母细胞体外成熟影响较小,差异不显著(p>0.05),且与对照组之间差异不显著(p>0.05);在体外受精的研究中,铁浓度为1.96mg/L和2.78mg/L的受精卵培养液可以明显提高8细胞胚胎发育率,差异显著(p<0.05);铁浓度为1.96mg/L的受精卵培养液可以明显提高囊胚发育率,囊胚发育率为31.6%,与其他浓度的铁相比,差异显著(p<0.05)。本试验结果说明:在卵母细胞体外成熟阶段,培养液中的铁对卵母细胞体外成熟没有影响,但对受精后早期胚胎的发育有促进作用,1.96mg/L是比较合适的早期胚胎培养液中铁的添加量。 相似文献
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卵母细胞体外成熟(IVM)不仅是胚胎体外生产的关键一环,还可以为体细胞核移植提供受体卵母细胞.卵母细胞的成熟是一个复杂的动态过程,影响卵母细胞体外成熟的因素众多,成熟率通常为40%～80%,优化培养条件是提高体外培养卵母细胞成熟率及体外成熟卵母细胞质量的关键,大量的研究者通过在培养液中添加细胞因子来促进卵母细胞成熟[1].文献报道将胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、白血病抑制因子(LIF)、干细胞因子(SCF)用于小鼠、绵羊和人的细胞培养中取得了较理想效果[2],但未见将三种成分用于山羊的报道.本试验研究比较了不同浓度GDNF、LIF、SCF及其不同组合对山羊体外培养卵母细胞成熟率的影响,拟优化培养条件,提高卵母细胞的成熟率. 相似文献
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作为胚胎生物工程技术研究的基础之一的牛卵母细胞体外成熟培养技术自上世纪30年代起至今,许多科学研究人员在牛卵母细胞体外生长、发育领域做了大量工作,对牛卵母细胞培养条件进行了广泛而深入地研究,并取得了较大的进展,目前牛卵母细胞体外成熟培养技术体系已建立,但在卵母细胞成熟机理、成熟调控方面尚存在许多尚未阐明的问题和一些亟待解决的问题。本文从卵母细胞的来源、卵母细胞体外培养条件、培养液的完善及卵母细胞成熟判定方法等方面详尽介绍了当前牛卵母细胞体外培养技术的研究进展。 相似文献