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《动物营养学报》2015,(10)
本研究旨在建立山羊瘤胃平滑肌细胞的体外培养模型。采集42日龄山羊的瘤胃肌肉组织,采用胶原酶消化法进行了山羊瘤胃平滑肌细胞的体外培养。通过光学显微镜观察了原代培养和传代培养阶段的细胞形态,采用细胞计数法检测了第5代山羊瘤胃平滑肌细胞的生长曲线及第1~11代细胞生长活性,采用细胞免疫荧光法对细胞进行了鉴定,采用蛋白质印迹(Western blotting)技术检测平滑肌细胞特异表达的α肌动蛋白(α-actin)在各代次细胞中的表达。结果表明,经0.20%Ⅱ型胶原酶消化获得的原代培养山羊瘤胃平滑肌细胞于培养1 d后开始贴壁生长,2 d开始进入对数期生长,呈典型的"波峰"状生长,5 d进入平台期,第5代细胞生长活性达到最高;免疫荧光染色显示胞浆内α-actin阳性表达,各代次间细胞α-actin表达稳定,表达量无显著差异(P0.05)。试验表明,应用0.20%Ⅱ型胶原酶消化法可成功获得山羊瘤胃平滑肌细胞,为进一步研究营养物质对山羊瘤胃功能的影响提供了理想的细胞模型。 相似文献
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通过组织块培养法和胶原酶消化法分离培养犊奶牛皱胃平滑肌细胞,采用免疫细胞化学方法和免疫荧光化学方法对其进行鉴定,并将鉴定结果、细胞生长曲线进行比较。结果,两种方法培养出的细胞生长曲线基本相同,细胞纯度免疫细胞化学鉴定结果为：组织块培养法为95％以上,胶原酶消化法为90％;免疫荧光鉴定结果为：组织块培养法为96％,酶消化法为89％。组织块培养法操作简单、经济,但耗时较长;胶原酶消化法快速、获得细胞较多,但价格昂贵,故在实际操作中可将两种方法联合应用。 相似文献
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为探究Ghrelin免疫阳性细胞山羊胃肠道的定位分布、形态特征与发育性变化,选用0、30、60、90、120、150和180日龄雌性济宁青山羊,按试验要求取材后进行免疫组织化学方法染色。结果显示,Ghrelin免疫阳性细胞主要分布在黏膜上皮、腺体和固有层,有"闭合型"和"开放型"2种类型。2种类型细胞在皱胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠和结肠均有分布,但未在瘤胃、网胃、瓣胃和直肠中检出。Ghrelin阳性细胞在皱胃中最多,由皱胃至结肠逐渐减少,"闭合型"细胞所占比例也由皱胃至结肠逐步减少。从0～120日龄,皱胃和空肠中阳性细胞数随着年龄增长而增加,150和180日龄有所下降;十二指肠中阳性细胞在90日龄达到高峰。回肠、盲肠和结肠中阳性细胞数较少,均呈现随日龄增长而缓慢增长的趋势。Ghrelin免疫阳性细胞的数量变化表明Ghrelin可能与山羊胃肠道发育密切相关。 相似文献
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本试验旨在研究不同培养方法对山羊瘤胃上皮细胞生长及角蛋白18(CK18)表达量的影响。采集42日龄山羊的瘤胃上皮组织,分别采用酶消化法和组织块法对其进行体外培养。通过光学显微镜观察原代培养和传代培养阶段的细胞形态,检测第5代山羊瘤胃上皮细胞的生长曲线,并采用细胞免疫荧光法对山羊瘤胃上皮细胞进行鉴定。结果显示:1)经0.25%胰蛋白酶+0.02%乙二胺四乙酸消化获得的原代培养山羊瘤胃上皮细胞于2 d开始贴壁生长,5 d细胞开始明显增多,10 d细胞数量达到最大。2)经组织块法获得的原代培养山羊瘤胃上皮细胞于4 d开始"爬出"组织块,8 d细胞开始明显增多,14 d细胞数量达到最大。3)经免疫荧光染色显示2种方法获得的细胞胞浆内CK18均呈阳性表达且细胞纯度后者明显高于前者。4)组织块法获得的细胞CK18表达量显著高于酶消化法(P0.05)。综合得出,与酶消化法相比,应用组织块法可成功获得纯度更高的山羊瘤胃上皮细胞。 相似文献
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以牛皱胃平滑肌细胞为研究对象,采用MTT法和CCK-8法检测添加不同浓度β-羟丁酸(β-hydroxybutyric acid,β-HB)对牛皱胃平滑肌细胞活性的影响.通过接种不同的细胞密度((0.2、0.5、1、2、3)×105个/mL),加入MTT/ CCK-8孵育后,在不同的波长下读取D值并进行分析.确定CCK-8法的最佳检测波长为450 nm,最佳细胞浓度为1×10 5个/mL,最佳检测时间为4 h;MTT法的最佳检测波长为490 nm,最佳细胞浓度为3×105个/mL.在检测β羟丁酸对牛皱胃平滑肌细胞活性的影响时,2种方法的结果对比发现CCK-8法的数据偏差小,准确性高,灵敏,优于MTT法. 相似文献
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组织贴块法培养肉鸡肺动脉平滑肌细胞 总被引：3，自引：0，他引：3
建立组织贴块法培养原代和传代肉鸡肺动脉平滑肌细胞(PASMC).将1～10日龄雏鸡的肺动脉中膜切成小于1 mm2的组织块,用翻转干贴壁法进行贴块培养.采用形态学和抗α肌动蛋白抗体(α-actin)免疫组化染色法对所培养的细胞进行鉴定.倒置显微镜观察培养的细胞呈梭形,重叠生长,呈典型的"峰-谷"状.抗α-actin单克隆抗体免疫组化染色可见胞浆内有明显的细丝,呈现棕黄色,表明所培养的细胞为肺动脉平滑肌细胞.组织贴块法简便易行,可用于血管病理生理变化研究. 相似文献
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试验采用免疫组织化学、Real—timePCR和Western blotting方法测定ghrelin的功能性受体GHSR-1a（Growth hormone seeretagogue receptor-1a,GHSR-1a）在奶山羊胃肠道的分布和表达。免疫组织化学结果显示,GHSR—1a免疫阳性细胞广泛分布于奶山羊胃肠道。在皱胃主要定位于黏膜层和肌层;瘤胃、网胃和瓣胃黏膜层及肌层中也可见GHSR-1a免疫阳性细胞;在小肠主要位于十二指肠、空肠和回肠的黏膜层、黏膜下层和肌层;在结肠、盲肠和直肠GHSR—1a免疫阳性细胞也有广泛分布;GHSR—1a主要表达于内在神经丛神经细胞、胃底腺上皮细胞、肠腺上皮细胞、复层鳞状上皮细胞、平滑肌细胞中。real—timePCR和Westernblotting结果显示,皱胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠和直肠GHSR—1a的表达水平相对较高,显著高于瘤胃、网胃和瓣胃的表达（P〈0．05）。结果表明,ghrelin可能通过GHsR-1a对奶山羊胃肠功能具有重要的调节作用。 相似文献
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为探讨5-羟色胺转载体(5-HTT)在肉鸡肺动脉高压综合征发病中的机制,采用MTT比色法、流式细胞术及Hoechst33258荧光染色法研究5-羟色胺(5-HT)和5-HTT抑制剂氟西汀对体外培养的肉鸡肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖与凋亡的影响,发现氟西汀能够抑制5-HT促PASMC增殖的作用;氟西汀能明显促进PASMC的凋亡,但氟西汀和5-HT共同作用于细胞,PASMC凋亡率明显少于氟西汀单独处理组。表明5-HTT在调节肉鸡PASMC的增殖和凋亡方面起重要作用,有可能参与肺动脉高压肉鸡肺血管重构的形成。 相似文献
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本研究旨在建立浏阳黑山羊瘤胃上皮细胞的体外培养模型,并对其周期分布、增殖和凋亡特点进行研究。试验采集60日龄浏阳黑山羊的瘤胃上皮组织,应用0.25%胰蛋白酶+0.02%乙二胺四乙酸(EDTA)消化法对山羊瘤胃上皮组织进行消化,得到单个的山羊瘤胃上皮原代细胞进行体外培养。通过倒置显微镜对原代和传代培养阶段细胞形态进行观察,采用细胞计数法检测细胞的生长活性,应用细胞免疫组化学方法对传代细胞进行鉴定,并用流式细胞术检测山羊瘤胃上皮传代细胞周期分布情况和凋亡比率。结果显示:1)经0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA消化获得的山羊瘤胃上皮原代细胞,培养1 d开始贴壁生长,2 d开始生长较快(对数期),呈典型的"波峰"状生长,3~4 d生长最为迅速,7 d生长速度平稳(平台期)。2)经细胞免疫组化学方法的鉴定,细胞胞浆为黄褐色,即细胞角蛋白19呈阳性表达。3)膜联蛋白-V/碘化丙啶联合染色显示,随着培养时间的延长,细胞凋亡比率显著增加(P0.01)。结果表明,通过0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA的消化方法成功得到了浏阳黑山羊瘤胃上皮细胞,可为今后研究反刍动物瘤胃相关机制与功能提供模型。 相似文献
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This report describes the findings of ultrasonographic examination of the abomasum in 30 goats. A 5.0 MHz linear transducer was used to scan the left and right paramedian regions, the linea alba and the right abdominal wall of standing goats. The abomasum appeared as a heterogeneous, moderately echogenic structure with echogenic stippling. The abomasum could be seen from the linea alba in all the goats. The abomasal folds were easily identified in 19 goats and appeared as prominent echogenic bands. The cranial visible limit of the abomasum was -0.3 [2.34]cm from the xyphoid, and the caudal limit was 10.3 [3.08]cm caudal to the xyphoid. The visible length of the abomasum was 10.7 [1.96]cm and the maximum width 30.2 [7.43]cm. The height of the abomasum was 6.7 [1.79]cm. 相似文献
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酶消化法分离培养肉鸡肺动脉平滑肌细胞 总被引：1，自引：0，他引：1
试验旨在探讨胶原酶消化法分离并培养肉鸡肺动脉平滑肌细胞(pul monary artery smooth muscle cell,PASMC)的方法。将1～7日龄雏鸡的肺动脉中膜剪成小于1 mm2的组织块,0.1%Ⅱ型胶原酶消化分离PASMC并进行原代培养和传代培养。倒置显微镜下观察培养细胞的形态,对培养细胞进行HE染色和光学显微镜观察,并采用抗α-肌动蛋白单克隆抗体(α-Smooth muscle actin)免疫组化染色法检测细胞胞浆内α-肌动蛋白的表达,用以鉴定所培养的细胞。结果表明,倒置显微镜下细胞为长梭形,呈典型的"峰—谷"状,未见明显异型细胞。α-actin胞浆染色阳性细胞数占总细胞数的97%以上。因此,胶原酶消化法可用于分离培养肉鸡PASMC,且有方法简单,成活细胞数多、传代周期短的特点,可用于肉鸡心血管疾病如肺动脉高压和肺血管重构的研究工作。 相似文献
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Two groups of goats were experimentally infected with Haemonchus contortus and Trichostrongylus colubriformis, and killed at various days after infection (DAI). The percentage of worms that established in the abomasum and the small intestine was low. At necropsy, abomasums from infected goats had thickened walls and oedematous folds. At 7 DAI there was an initial infiltration of eosinophils and some neutrophils which tend to increase with age of infection. The mean pH of the abomasum in goats infected with H. contortus was 5.43 (range 5.3-5.7), while that of the control goats was 3.30 (range 2.8-3.7). 相似文献
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Pérez J Garcia PM Hernandez S Martinez-Moreno A Martin de las Mulas J Camara S 《Veterinary research》2001,32(5):463-473
Histopathological changes and the distributions of T and B lymphocytes and IgG producing plasma cells were recorded in the abomasum and abomasal lymph nodes of goats 3, 7 and 21 weeks post-infection (wpi) after an experimental infection with H. contortus. The low rate of worm recovery by 3 wpi (5.6%) might have been due to larvae death as suggested by the presence of granulomas in the abomasal mucosa at 3 and 7 wpi, or simply due to a poor larval establishment. Marked increase in the secretion of mucus by mucous cells together with an abundant infiltration of eosinophils, mast cells, CD3+ T lymphocytes, CD79a+ B cells, IgG+ plasma cells and globule leukocytes were recorded in the abomasal mucosa, especially at 7 wpi. Except for the globule leukocytes, this reaction decreased substantially by week 21, suggesting this cell type may have been involved in rejection of adult nematodes. The abomasal lymph nodes showed marked hyperplasia, particularly of CD79a+ B cells and IgG+ plasma cells in all infected goats. These reactions may have been responsible for the reduction in the number of worms found in the abomasum between 3 and 7 wpi. 相似文献