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为了对大茂山地区苏云金芽孢杆菌的分布与多样性进行研究,本试验利用温度-抗生素筛选法从大茂山不同海拔地区采集的784份土壤样品中分离得到76株苏云金芽孢杆菌,发现在海拔900~1200 m之间为土壤最佳采集区域。对这76株菌株进行光学显微观察,发现其伴孢晶体呈现球形、菱形、方形、不规则形等多种形态;PCR-RFLP对分离获得的76株菌株基因鉴定发现,主要包含cry1、cry2等7种基因类型,其中有28株未鉴定出基因型;其SDS-PAGE晶体蛋白分析发现,这些菌株主要表达130 kDa、97 kDa、66 kDa和45 kDa蛋白。对铜绿丽金龟进行生物活性测定,17株具有高毒力的菌株中的16株含有cry8Ca基因,另一株未鉴定出已有基因型。从晶体形态、基因类型、SDS-PAGE检测以及生物活性方面均说明苏云金芽孢杆菌在河北省大茂山地区的分布具有良好的多样性。 相似文献
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五岳寨苏云金芽孢杆菌资源多样性分析及杀虫基因的鉴定 总被引：1，自引：1，他引：0
分离筛选高效广谱野生苏云金芽孢杆菌菌株并对五岳寨地区苏云金芽孢杆菌资源多态性进行分析。采用温度筛选法进行菌株分离筛选,光学显微镜下观测菌株的晶体形态,通过PCR-RFLP和SDS-PAGE法对这些菌株进行基因鉴定和蛋白分析,并进行生物活性测定。从土壤中分离得到72株Bt菌株,共包含13种cry基因,9种基因组合,另有8株未鉴定出基因型,SDS-PAGE蛋白分析发现这些菌株主要表达130、90、50 kDa蛋白;生物活性测定结果显示有20株对小菜蛾和棉铃虫具有高效毒力,另有4株对华北大黑鳃金龟有高效毒力,其中2株的校正死亡率可达80%。五岳寨地区苏云金芽孢杆菌资源丰富并具有良好的多态性。 相似文献
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对铜绿丽金龟幼虫有活性的苏云金芽孢杆菌菌株的分离及鉴定 总被引：6，自引：0，他引：6
为了发掘新的斑资源,从3种不同土壤类型的样品中分离得到了285株苏云金芽孢杆菌菌株。采用杀虫活性测定方法从中获得了13株对铜绿丽金龟幼虫具有高毒力的菌株。利用PCR—RFLP鉴定体系和SDS-PAGE蛋白分析法,研究了这13株苏云金芽孢杆菌的杀虫晶体蛋白基因类型和晶体蛋白表达情况。结果显示,有12株均含有编码毒杀铜绿丽金龟幼虫毒素蛋白的cry8Ca基因,而FTL53没有鉴定到已有的基因类型。这13株菌的伴孢晶体都含有分子量为130kDa的蛋白。本研究为不断发现新型的、具有高毒力的cry毒素基因奠定了基础。 相似文献
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一株苏云金芽孢杆菌的分离与杀虫基因的鉴定 总被引：1，自引：0，他引：1
采用温度筛选从云南省刁苓山土壤中分离得到一株伴孢晶体为长菱形的苏云金芽孢杆菌BSH-1。利用PCR-RFLP鉴定体系和SDS-PAGE对菌株所含cry基因类型和晶体蛋白的构成进行鉴定、分析,结果表明:菌株BSH-1具有的cry基因组合为:cry1Aa,cry1Ac,cry1Db,cry2Ab,cry1Ia,表达的晶体蛋白有130,70和56 kDa 3种,该蛋白对甜菜夜蛾具有较高杀虫活性,LC50为1.43 ng/mg。该菌株的基因组合类型对构建杀虫基因工程菌具有重要参考价值。 相似文献
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为发掘对蛴螬有防治作用的苏云金芽孢杆菌及其cry基因,在河北省各县市共采集土壤样品254份,采用温度筛选法分离出Bt菌株42株,经PCR-RFLP方法鉴定,其中10株含有cry8型基因。这些菌株有如下特点：同一菌株含1种或多种质粒;PCR-RFLP鉴定证明有多种cry8基因存在,多数菌株中含2种cry8基因,如cry8E和cry8F常共存于同一菌株中;Cry8杀虫晶体蛋白分子量约为130~140 kDa,晶体形态均为球形。这10株菌采样地点分布于保定、衡水、邯郸、廊坊、唐山和邢台等地,植被类型多样化,说明cry8型Bt菌株在河北省分布广泛,可为蛴螬类害虫的防治提供丰富的Bt资源。 相似文献
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利用稀释平板培养法从连云港地区的土壤中分离了一株苏云金芽孢杆菌新菌株GGD-4,通过PCR-RFLP鉴定体系和SDS-PAGE方法分析了此菌株中cry基因类型和表达蛋白。结果表明:该菌株中含有cry1Aa基因型,同时表达130~140kD的蛋白;但EcoRⅠ和PstⅠ酶切结果不同于正常的cry1Aa基因,实验中利用生物信息学方法设计的cry1Aa基因特异引物对扩增后也证明含有cry1Aa基因。室内生测结果显示,该菌株对重要的农业害虫甜菜夜蛾、菜青虫等均有较高的杀虫毒力。 相似文献
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两株杀鞘翅目害虫Bt菌株的生物活性及杀虫蛋白基因鉴定 总被引：2，自引：0，他引：2
发掘对鞘翅目害虫具有活性的苏云金芽孢杆菌(Bt)菌株和杀虫蛋白基因在生物防治中日益受到人们的重视。利用杀鞘翅目Bt基因通用引物进行PCR检测与生物测定相结合的方法,从山东省各地土壤中分离的66株Bt中筛选获得了两株对鞘翅目昆虫具有杀虫活性的菌株B-DLL和B-JJX,并采用SDS-PAGE和PCR-RFLP方法对其杀虫晶体蛋白和杀虫基因类型进行了鉴定。结果表明,菌株B-DLL和B-JJX对华北大黑鳃金龟1龄幼虫14 d的校正死亡率分别为86.7%和60.0%,对暗黑鳃金龟1龄幼虫14 d的校正死亡率分别为83.3%和76.7%,对柳蓝叶甲3龄幼虫5 d的校正死亡率分别为33.3%和46.7%。菌株B-DLL的伴孢晶体呈圆形,B-JJX的晶体为近方形,两株Bt的伴孢晶体主要为130 kDa的蛋白,两株Bt均含有新的cry8类基因,而不含cry1、cry2、cry3、cry4/10和cry7等基因。 相似文献
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摘要：为了明确苏云金芽孢杆菌在不同的生态区的分布特点,从河北省不同生态地区（阜平天生桥、涞源白石山、安新白洋淀、保定郊区大田、安国中草药田）采集土样806份,采用温度-抗生素法分离Bt菌株46株。利用PCR-RFLP对46株菌进行了基因型研究,结果表明从46株Bt菌株鉴定出八种不同的基因型cry1, cry1I, cry2, cry3, cry4, cry8, cry30, cry32,11株未鉴定出基因型。通过SDS-PAGE分析,结果表明这些菌株主要表达130-150KD,70-80 kD,60kD和30kD蛋白。 相似文献
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11.
为了研究美国白蛾自然种群消长动态,采用作用因子组建了美国白蛾1年连续3个世代自然种群生命表,并对美国白蛾种群生命表进行了研究和讨论。结果表明,美国白蛾种群数量发展趋势指数第一代最高为230.39,第三代最低为43.97;寄生天敌是影响第一、二代美国白蛾自然种群的重要因子,第三代重要因子是自然死亡和寄生天敌,并且寄生天敌对美国白蛾的排除作用控制指数逐代升高,第一代最低为1.150,第三代最高为1.862。白蛾周氏啮小蜂是寄生美国白蛾的优势种。该结果为美国白蛾预测预报、综合防治提供理论依据。 相似文献
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不同来源的苏云金芽孢杆菌能产生多种多样的晶体(Cry)蛋白。基于这个特性,人们可以通过基因工程的手段向工程菌中转入编码多种Cry毒素的基因来控制虫害。通过DNA重组技术,从Bt HZM2菌株中克隆出了cry1Ea基因,对其进行了生物信息学分析,同源比对结果表明,cry1Ea8基因的核苷酸序列与已知cry1Ea的同源性为99.77%~99.91%,对应的氨基酸序列同源性为99.49%~99.74%。对cry1Ea8基因的分析还揭示出了cry1Ea8及其编码蛋白的一些生物和理化性质。结构域预测表明,Cry1Ea8由3个结构域组成,其中N-末端螺旋状结构域与膜插入与孔隙形成有关,而第二和第三个结构域与受体的结合有关。该研究为转基因抗虫植物和微生物杀虫工程菌的构建提供了新的基因来源。 相似文献
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中林美荷杨具有适应性强、雄性不飞絮、速生丰产和耐瘠薄等优良性状,然而受到一些害虫的危害,造成树苗生长不良,严重影响苗木的产量和质量。采用中林美荷杨的叶片和节间组织作为外植体,通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法将人工改造后的抗虫基因Bt Cry1Ac 导入杨树基因组中。对所获得的中林美荷杨转基因植株进行PCR、Southern blotting 和Real-time PCR 等分子生物学检测,结果表明Bt Cry1Ac 基因多以单拷贝整合到受体植物基因组中,其中7 个转基因株系显示外源基因有较高的转录表达。经过实验室喂虫鉴定,筛选出2 个抗性效果好的株系。中林美荷杨转抗虫基因株系的获得为该品种绿化造林和推广提供了条件。 相似文献
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通过醋酸钠-抗生素筛选法从河北省土壤中筛选得到了苏云金芽孢杆菌新菌株CY1。镜检可观察到伴孢晶体呈小菱形。SDS-PAGE分析结果表明菌株CY1表达的晶体蛋白分子量为130 kDa。利用25对通用引物检测cry1,cry1I,cry7,cry2,cry3,cry4/cry10,cry5,cry6,cry7,cry8,cry9,cry11,cry13/14,cry16/17,cry18,cry19,cry21,cry22,cry24/25,cry26/28,cry27/29,cry30,cry32,cry34/35,cry40基因,仅从CY1菌株中检测出cry7基因,该cry7基因N末端的1 215 bp片段所编码的氨基酸序列与已发表的Cry7Ab1(Acc No.:U04367)序列同源性达99%,仅有2个氨基酸的差异。用3对cry7Ab特异引物检测,进一步证实该菌株携带有cry7Ab基因。 相似文献
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摘要：对入侵害虫美国白蛾Hyphantria cunea(Drury)进行危险性评估,可以了解其适生区分布与发生风险概率,对其监测与防治有重大意义。利用GARP（Genetic Algorithm for Rule-set Prediction Modeling System）生态位模型预测美国白蛾在中国的适生区,并应用信息扩散模糊数学方法,对河北省部分地区美国白蛾进行危险性评估。结果表明：美国白蛾发生灾害风险评估值随着灾害指数的增大而减小,美国白蛾在中国的适生区分布范围：21.20°N～46.33°N,97.80°E～132.11°E和36.81°N～41.8°5N,76.00°E～94.66°E(新疆的部分地区)。基于GARP生态位模型及信息扩散理论,针对入侵物种已知分布数据对其进行危险性评估,对害虫的监测、防治、预警提供依据,具有广泛的应用前景。 相似文献
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美国白蛾及其近似种类的鉴别 总被引：2，自引：0，他引：2
美国白蛾隶属于鳞翅目，灯蛾科，白蛾属，是重要的国际检疫害虫。据文献报道它可为害２００余种林木。为了准确地识别美国白蛾，本文在成虫形态和雄外生殖器上将它与其它为害林木的多种近似种类予以区别。 相似文献
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转双价基因抗虫杨抑制美国白蛾的作用机理研究 总被引：9，自引：1，他引：8
为明确双价基因chitinase-BmkIT对鳞翅目害虫的作用机制,以美国白蛾为供试虫源,用转双价基因(烟草天蛾几丁质酶基因和东亚钳蝎昆虫特异性神经毒素基因)杨树叶片饲喂其幼虫,至3龄时,采用石蜡切片法,对美国白蛾幼虫中肠结构进行观察,并对其头部乙酰胆碱酯酶活性进行测定.结果表明,取食转基因杨树叶片的美国白蛾幼虫中肠结构不完整,中肠细胞出现排列不整齐、脱落等现象;而取食非转化杨树叶片的美国白蛾幼虫中肠结构完整,中肠细胞排列整齐紧密.转基因杨树叶片还显著抑制了美国白蛾幼虫头部乙酰胆碱酯酶的活性(p＜0.05).取食转chitinase-BmkIT基因杨树叶片抑制了幼虫的生长,并使部分幼虫身体溃烂.该双价基因可作为防治美国白蛾的基因源. 相似文献