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1.
《中国兽医杂志》2014,(9)
本试验利用体外培养的未成熟仔猪睾丸支持细胞,应用实时荧光定量PCR研究了FSH对CyclinA2 mRNA表达的影响。结果发现促卵泡素(FSH)以时间和浓度依赖的方式促进了CyclinA2 mRNA的表达(P<0.05);Forskolin促进了支持细胞CyclinA2 mRNA的表达,而Rp-cAMP、Verapamil和U0126都抑制了其表达(P<0.05),但这3种抑制剂单独作用时对CyclinA2 mRNA的表达与对照相比无显著差异(P>0.05)。这表明FSH以浓度和时间依赖的方式诱导了CyclinA2 mRNA的表达,并通过cAMP、Ca2+内流和细胞外信号调节的蛋白激酶1/2(ERK1/2)通路调节仔猪睾丸支持细胞CyclinA2 mRNA的表达。 相似文献
2.
FSH对体外培养仔猪睾丸支持细胞skp2表达的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
本研究旨在确定促卵泡素是否可通过cAMP、Ca2+内流和细胞外调节的蛋白激酶(ERK1/2)调节培养条件下未成熟仔猪睾丸支持细胞中S期激酶相关蛋白2(skp2)的表达.以培养的仔猪睾丸支持细胞为实验材料,通过添加各种信号通路的抑制剂,运用Western blot检测skp2、p27kip1蛋白的表达,运用实时荧光定量PCR检测skp2 mRNA的表达.结果发现,促卵泡素(50 ng·mL-1)以时间依赖的方式促进了skp2蛋白和mRNA的表达(P＜0.05),这一作用在30 min时达到高峰.FSH(50 ng·mL-1)和Forsko1in(10 μmol·L-1)均促进了skp2蛋白和mRNA的表达(P＜0.05),但降低了p27kip1蛋白的水平,而Rp-cAMP、Verapamil和U0126都抑制了FSH的作用,使skp2蛋白和mRNA的表达有所下降,但提高了p27kip1蛋白的表达,但3种抑制剂单独作用时对skp2蛋白、mRNA以及p27kip1蛋白的表达没有显著影响(P＞0.05).这表明FSH可能主要通过影响cAMP的产生和Ca2+内流,并激活ERK1/2通路调节skp2蛋白的表达,而skp2蛋白的水平与p27kip1蛋白成负相关. 相似文献
3.
本研究旨在阐明FSH调节睾丸支持细胞GDNF表达的信号机制.以体外培养的仔猪睾丸支持细胞为试验材料,通过加入不同信号通路因子,采用RT-PCR和Western blot等方法研究了FSH对支持细胞GDNF表达的调节.结果:(1)FSH(50 ng· mL-1)处理支持细胞,可迅速激活MEK激酶,随着FSH刺激时间的延长,ERKl/2活性逐渐升高(0～30 min)；(2)dbcAMP(100 μmol·L-1)同样能迅速激活MEK激酶,诱导GDNF蛋白、mRNA的表达；ERK1/2活性随dbcAMP刺激时间的延长逐渐升高(0～30 min)；(3)加入MEK1/2的抑制剂U0126和PKA的抑制剂H89,则显著抑制了FSH对GDNF的激活作用,GDNF蛋白、mRNA和活性明显下降；(4)加入PKA的抑制剂H89(10 μmol·L-1),则明显抑制了FSH诱导的ERK1/2磷酸化的激活作用.结果表明,FSH可通过cAMP-PKA激活ERK级联调节支持细胞GDNF的表达. 相似文献
4.
以体外培养的仔猪睾丸支持细胞为研究对象，研究了FSH对GDNF蛋白的调节及其信号传导机制。结果显示：（1）外源性FSH以浓度和时间依赖性促进GDNF蛋白表达：FSH浓度为50ng／mL、作用1h时，GDNF水平达到最高；（2）用FSH（50ng／mL）或dbcAMP（100μmol／L）处理支持细胞，可迅速激活MEK激酶，随FSH刺激时间的延长，ERK1／2活性逐渐升高（0～2h）；（3）MEK1／2的抑制剂U0126可显著抑制FSH对GDNF的激活作用。结果表明，FSH在诱导GDNF蛋白表达的过程中，通过cAMP-PKA-ERK1／2级联通路，促进GDNF基因的表达。 相似文献
5.
以原代培养的仔猪睾丸支持细胞（SC）为试验模型，研究了FSH对SC胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）表达及其增殖的影响。结果显示，外源性添加FSH可促进GDNF蛋白表达，而且这种促进作用具有浓度和时间依赖关系，GDNF蛋白水平随着FSH浓度的增加而升高，FSH浓度为50ng／mL时，GDNF水平达到最高，然后逐渐降低；FSH（50ng／mL）作用30min，可显著促进GDNF蛋白的表达（P〈0．05），当FSH作用1h时，GDNF蛋白水平达到最高，随后逐渐降低。FSH可以时间-剂量依赖性促进SC增殖细胞核抗原（PCNA）的表达，FSH（50ng／mL）作用30min时，PCNA的表达显著增加（P〈0．05），作用1h达极显著水平（P〈0．01），至2h时，PCNA蛋白的表达水平达到最高，随后逐渐降低。提示，FSH可在体外条件下通过刺激SC表达GDNF进而促进其增殖。 相似文献
6.
17β-雌二醇对仔猪支持细胞周期的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
为了研究17β-雌二醇对仔猪睾丸支持细胞周期的影响,实验采用流式细胞术测定了细胞周期中DNA含量,分析了细胞周期细胞增殖指数(PI)和S期细胞指数(SPF)的变化。结果表明:低浓度的17β-雌二醇(10-10～10-7mol/L)能够促进支持细胞周期的转化,其中17β-雌二醇浓度为10-9mol/L时的作用最强;而高浓度的17β-雌二醇(10-6mol/L)则抑制支持细胞周期的转化。17β-雌二醇(10-9mol/L)能以时间依赖性促进支持细胞周期转化,其中24h的作用最明显。ERK1/2抑制剂U0126能减少17β-雌二醇诱导的细胞周期的转化。cAMP的激动剂8-Br-cAMP促进了细胞周期的转化,而抑制剂Rp-cAMP阻止了17β-雌二醇诱导的细胞周期的转化。表明17β-雌二醇对细胞周期的调节呈现一定的时间-剂量依赖性,cAMP和ERK1/2级联参与了这一过程。 相似文献
7.
为研究褪黑素对雏鸡睾丸支持细胞增殖的影响,本实验以原代分离培养并鉴定的雏鸡睾丸支持细胞为研究对象,经不同浓度(1、10、100、1000 nmol/L)褪黑素处理细胞48 h后,使用Cell Counting Kit-8(CCK-8)、EdU和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测雏鸡睾丸支持细胞的细胞活力、细胞增殖能力和增殖相关基因的表达。结果表明:与对照组相比,添加1000 nmol/L褪黑素可提高细胞活力和细胞增殖能力(P<0.05),上调PCNA、Cyclin B和Cyclin D基因的表达(P<0.05),下调P21基因的表达(P<0.05)。结果显示褪黑素可以促进支持细胞增殖。 相似文献
8.
动态添加FSH对绵羊卵巢皮质组织体外培养的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
本研究旨在探索促卵泡素(FSH)对体外培养绵羊卵巢原始卵泡和组织活性的影响。通过稳定或动态方式添加不同浓度FSH(1、10、50、100ng·mL-1),用组织学和免疫组化PCNA方法来评估FSH对体外培养绵羊卵巢皮质组织中原始卵泡激活、生长、存活以及颗粒细胞增殖活性的影响;此外通过测定培养液中雌激素含量,评估卵巢组织体外培养过程中活性的保持。结果表明,先升后降动态添加FSH对于卵泡发育、存活和生长以及颗粒细胞的增殖具有全面的促进作用;同时组织分泌雌激素能力也高于其他组。以稳定方式添加时,50ng·mL-1FSH在培养1d时显示对卵泡发育的显著促进作用(P0.05),添加10ng·mL-1以上浓度的FSH可以促进卵泡存活和生长(P0.05)。在整个培养期内,各培养组中雌激素产量持续增加,说明卵巢活性在本培养体系中可以得到很好的维持。本试验结果表明FSH可能参与早期卵泡的发生,动态添加FSH更有利于体外培养卵泡的发育和组织活性的维持。 相似文献
9.
《畜牧兽医学报》2017,(11)
旨在研究胰岛素(Insulin)和促卵泡素(Follicular stimulating hormone,FSH)对猪卵泡发育过程的影响。猪屠宰后收集卵巢,选择健康卵泡并分离颗粒细胞(Granulesa cells,GCs),设定对照组和重复组,胰岛素、FSH浓度梯度下Long-term体外培养,7d后显微镜观察细胞增殖情况并计数,竞争法测定雌激素(E_2)浓度。数据分析表明:当FSH为0ng·mL~(-1)时,随着胰岛素浓度的增加,猪卵泡GCs细胞密度增加,细胞计数显示GCs数量呈上升趋势,且胰岛素浓度为100ng·mL~(-1)时,细胞数量最高(P0.05);当胰岛素为0ng·mL~(-1)时,随着FSH浓度的增加,细胞密度增加,细胞计数显示GCs数量呈上升趋势,且FSH浓度为5和25ng·mL~(-1)时,细胞数量显著高于其它两组(P0.05);E_2测定结果显示,当FSH为0ng·mL~(-1),胰岛素为100ng·mL~(-1)时,培养液E_2浓度显著高于他不同浓度胰岛素组(P0.05);当FSH为1ng·mL~(-1),胰岛素为10ng·mL~(-1)时,培养液E2浓度最高,但与不同浓度胰岛素各组差异不显著(P0.05);FSH浓度为5和25ng·mL~(-1)时,不同浓度胰岛素各组之间E_2浓度差异不显著。猪卵泡发育过程中,胰岛素和FSH均有促颗粒细胞增殖和E_2分泌的能力,FSH超过一定生理浓度会降低卵泡颗粒细胞分泌E_2。 相似文献
10.
旨在探讨细胞外信号调节激酶1/2-过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(ERK1/2-PPAR-γ)信号通路在肌肉生长抑制素(MSTN)抑制猪皮下脂肪前体细胞(PSPAs)成脂分化中的作用。PSPAs在诱导分化培养液(DIM)处理同时,随机分3组：对照组(0 ng/mL MSTN)、100 ng/mL MSTN组(100 ng/mL MSTN)以及ERK1/2特异性抑制剂PD98059和100 ng/mL MSTN联合组(PD98059+100 ng/mL MSTN)。采用细胞计数试剂盒-8 (CCK-8)检测细胞增殖活力,油红O染色法及甘油三酯(TG)定量分析成脂分化,使用荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot法检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)、CCAAT/增强子结合蛋白-α(C/EBP-α)、脂肪酸合成酶(FAS)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、细胞外信号调节激酶(ERK)及其磷酸化ERK(p-ERK)表达。结果表明：细胞增殖活力在3组间无显著性差异(P>0.05)。与对照组相比,100 ng/mL MSTN处理48 h后细胞内脂滴沉积量、油红O阳... 相似文献