柑橘黄龙病LAMP快速检测方法的建立     

孔德英  孙涛  李应国  滕少娜  陆丽华  邓朝晖 《中国果业信息》2013,42(1)

本文根据GenBank中柑橘黄龙病菌的外膜蛋白（omp）基因序列,设计了1套环介导等温扩增引物,建立了柑橘黄龙病的环介导等温扩增检测方法。该方法敏感度可达25pg/μL,与实时荧光PCR方法灵敏度相同。全部反应只需一个可控温的水浴锅在60min内即可完成,通过肉眼观察颜色即可直接判定结果。本研究建立的环介导等温扩增方法简便、快速、灵敏、特异,适用于基层工作站的柑橘黄龙病鉴定工作。  相似文献   

检测柑橘黄龙病的四对常规PCR引物特异性和灵敏度比较     

高玉霞  卢占军 《中国果业信息》2014,43(1)

柑橘黄龙病是目前危害柑橘产业的重要危险性病害,实验室中通过PCR技术检测柑橘黄龙病是最有效的方法,因此,确定一组特异性好、灵敏度高的引物至关重要。本文通过荧光定量PCR标定柑橘黄龙病菌核酸浓度的方法,对目前各实验室常规PCR应用比较广泛的4对引物（P400F/R、P535F/R、OI1/OI2,16SF/R）做了特异性和灵敏度的比较。结果发现4对引物均能排除其它来源核酸的干扰,表现出明显的特异性,但在灵敏度方面4对引物差别很大,灵敏度结果是依次为：16SF/R＞P400F/R ＞P535F/R=OI1/OI2,灵敏度最高的16SF/R引物检测柑橘黄龙病菌核酸含量约为1.87×10﹣2 ng/μl。本研究结果为实验室开展检测柑橘黄龙病研究提供了很好的理论与实践基础  相似文献   

单头柑橘木虱中黄龙病菌快速检测方法建立与应用     

黄爱军  顾佩佩  胡燕  丁敏  王莹 《中国果业信息》2021,50(5)

本研究将快速裂解制样法和环介导恒温扩增技术结合,建立了单头木虱体内黄龙病菌的快速检测方法,整个检测不需要提取核酸,仅需在65℃恒温,45min 内就可以完成。本方法和实时定量PCR法检测结果一致,其灵敏度高于普通PCR法。本研究所建立检测方法操作简便,所需时间短,准确度高,适用于基层检测部门,为单头柑橘木虱体内柑橘黄龙病菌的快速检测提供了新策略。  相似文献   

三种提取单头柑橘木虱体内黄龙病菌DNA方法的比较研究     

卢占军  丁鹏 《中国果业信息》2016,45(6)

对饲养在温室内的感染柑橘黄龙病甜橙树上的柑橘木虱采用三种方法进行单头核酸提取,通过超微量核酸蛋白分析仪和细菌通用引物27F1492R常规PCR检测核酸质量,利用柑橘黄龙病菌特异性引物OI1/OI2c常规PCR和以r-rplLAs/f-rplLAs引物进行荧光定量qPCR检测。研究结果表明,三种方法均可以成功提取到单头柑橘木虱总核酸且均能检测到黄龙病菌,李菁方法时间短,步骤简便,提取的核酸浓度较高,但核酸质量较低;氯仿-异戊醇抽提方法步骤较多、历时长,提取核酸浓度较低,但核酸质量较高;试剂盒方法简便快速,提取的核酸浓度高,核酸质量一般,成本较高。三种方法各有优缺点,可根据后续分子实验具体要求选择合适的提取方法。本文为有效的检测柑橘木虱体内黄龙病菌提供了技术基础,也可以推广到其他微小昆虫的内生细菌等相关基因研究领域。  相似文献   

定量分析柑橘黄龙病菌在沙糖橘中的分布     

褚丽萍  郑正  邓晓玲 《中国果业信息》2016,45(6)

柑橘黄龙病是由难培养的革兰氏阴性菌“Candidatus Liberibacter asiaticus”引起的严重为害柑橘的系统性病害。本研究通过实时荧光PCR 检测黄龙病菌在沙糖橘上的分布情况,结果表明不同部位黄龙病病菌浓度存在较大差异。其中果实中橘络部位病菌含量最高,且病原菌在果实中呈现富集的状态。本研究结果可为病原菌在植株体内的转运规律提供参考。  相似文献   

犬细小病毒实时荧光RPA检测方法的建立     

熊炜  薛俊欣  王楷宬  蒋静  黄保续  田桢干  林颖峥  李健 《中国动物传染病学报》2020,(2):48-54

由犬细小病毒(CPV)引起的犬细小病毒病是我国出入境口岸宠物检疫的重要疫病。为了提高检疫效率,本研究拟建立检测CPV的实时荧光重组酶聚合酶扩增(RPA)方法并进行评价。本研究根据CPV衣壳蛋白基因序列设计RPA引物,以GB/T 27533-2011中的PCR方法作为参照,通过检测其他4种犬病毒和3种其他种属的细小病毒来分析实时荧光RPA的特异性、检测不同浓度的模板分析实时荧光RPA的灵敏度、检测CPV阳性或阴性犬的不同组织、血液、尿、粪便等样本以及7株CPV野毒株来分析实时荧光RPA的稳定性。结果显示,本研究建立的实时荧光RPA特异性好、灵敏度高,检测临床组织、体液、粪便样本以及野毒株时都具有良好的稳定性。结果表明,本研究建立的实时荧光RPA可满足CPV快速检测要求。  相似文献   

江西省吉水县柑橘黄龙病菌检测     

张凯东  强遥  鄢明峰  贺哲  虞凡霜  叶莹  蒋军喜 《中国果业信息》2021,50(1)

为了确切诊断江西省吉安市吉水县近年出现的疑似柑橘黄龙病,从该县6个果园共采集12份(株)病叶样品,采用PCR和序列测定技术对病样进行黄龙病菌检测,结果从6份样品中检测到柑橘黄龙病菌即亚洲韧皮部杆菌(Candidatus Liberibacter asiaticus, CLas),结果表明吉水县已有柑橘黄龙病发生。检测结果同时还表明,依据叶片不对称斑驳症状进行柑橘黄龙病田间诊断具有可靠性。  相似文献   

柑橘黄龙病植株显症差异叶片内生细菌群落结构分析     

黄俊源 《中国果业信息》2020,49(5)

【目 的】从同株柑橘黄龙病罹病植株的不同显症部位内直接检测植物内生菌群落分布情况,为筛选出对柑橘黄龙病原菌（Ca. L. asiaticus）有相互作用的伴生菌奠定理论基础。【方 法】通过 QPCR方法对脐橙和蜜柚中Clas进行验证,并利用 16S rRNA 基因高通量测序技术对同一颗树上显症和不显症枝条叶片内生菌微生物群落的结构进行研究。【结 果】显症叶与不显症叶之间无特有的内生菌,黄龙病菌是决定植物组织是否显症的关键性因素。显症叶片与不显症叶片内生菌差异显著,显症叶片多样性降低。共有18个内生菌属是不显叶片的共同优势菌群,显症叶中较弱。其中,芽孢杆菌Bacillus与黄龙病菌CLas呈负相关,芽孢杆菌属鉴定出科氏芽孢杆菌 Bacillus cohnii,贝莱斯芽胞杆菌Bacillus_velezensis和大量未培养细菌。【结 论】同一罹病5年以上的柑橘黄龙病病株中,各部位所带病菌量不均匀,是否显症与组织内柑橘黄龙病菌CLas的量呈正相关,芽孢杆菌与黄龙病菌的量呈显著负相关。在韧皮部细胞内增殖过程中的相互作用具有深入研究的价值,下步实验可进行分离柑橘黄龙病植株内生芽孢杆菌,鉴定未培养的其他芽孢杆菌种类。  相似文献   

非洲猪瘟病毒实时荧光RPA快速检测方法的建立   总被引：3，自引：0，他引：3  

李林  刘拂晓  樊晓旭  李金明  邹艳丽  刘珊  包静月  吴晓东  王志亮 《中国动物检疫》2017,34(8):87-91

非洲猪瘟是一种跨境动物疫病,对世界养猪业危害严重。目前,该病的流行范围越来越广。为防止该病传入我国,当前急需建立快速、简便、可靠的检测方法。本研究通过分析非洲猪瘟病毒B646L基因保守区域,设计并合成了特异性引物和exo探针,建立了检测非洲猪瘟病毒的实时荧光RPA方法。利用该方法可在20 min内完成检测过程,最低可检测到16拷贝/反应;与猪的其他常见病原核酸无交叉反应;与荧光PCR方法具有相似的灵敏度和特异性;利用该方法对100份国内临床样品进行检测,结果均为阴性。本研究所建立的非洲猪瘟病毒实时荧光RPA检测方法具有简单、快速、敏感性高、特异性强的优点,在临床鉴别诊断、检验检疫和病原监测等方面具有广泛的应用价值。  相似文献   

梅迪-维斯纳病毒实时荧光RPA检测方法的建立          下载免费PDF全文

刘然  张琳  陈思旭  史晓娜  刘淑英 《中国动物检疫》2023,40(3):90-96

为实现对梅迪-维斯纳病毒(MVV)的快速检测，根据MVV gag基因保守序列设计特异性引物和探针，通过优化反应条件和反应体系，建立了MVV的实时荧光RPA检测方法，并通过灵敏度、特异性、重复性试验及样品复核检测进行评价。结果显示：该方法最佳反应温度为39℃，用时短，20 min即可完成检测；灵敏度高，检测下限可达10^-1 pg/μL，比常规PCR检测结果灵敏约10⁴倍；特异性强，与小反刍兽疫病毒、羊败血性链球菌、牛肠道病毒、传染性鼻气管炎病毒、牛副流感病毒3型、肺炎支原体等继发呼吸系统症状病原无交叉反应；重复性好，对于相同质量浓度的模板DNA检测变异系数均小于10%；可有效检测出MVV，与PCR结果一致。综上所述，本研究建立的MVV荧光RPA检测方法适用于MVV的临床快速检测，可为该病的诊断及防控提供依据。  相似文献