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赣州橘园根系内生丛枝菌根真菌群落多样性鉴定及其受黄龙病菌侵染的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
【目的】鉴定赣州橘园黄龙病菌侵染和健康柑橘根系内生丛枝菌根真菌(AMF)的多样性,并明确黄龙病菌的侵染对于AMF群落的影响。【方法】使用AMF 18S小亚基核糖体特异引物AMV4.5NF/AMDGR对黄龙病菌侵染和健康柑橘根系DNA扩增建库,通过454高通量测序和生物信息学分析挖掘赣州橘园根系AMF多样性及其受黄龙病菌侵染的影响。【结果】从赣州橘园的柑橘根系中鉴定到80个AMF种,其中包括44个已知的AMF种和36个新种。进化分析发现,球囊霉属AMF占总AMF数的78.75%,是赣州柑橘根系内生AMF群落的优势菌属。鉴定到类球囊霉属的12个AMF,其中Paraglomus.N2和Paraglomus.N7的丰度位于总AMF的第二和第三,说明类球囊霉属AMF在赣州柑橘AMF群落中占有重要地位。PCoA分析表明黄龙病菌侵染显著改变了柑橘根系AMF的群落结构,而AMF群落的α多样性指数无显著性变化。通过丰度差异分析鉴定到6个在黄龙病菌侵染后丰度差异显著的AMF种,表明黄龙病菌侵染可能通过改变AMF菌种组成和相对丰度来影响其群落结构。【结论】全面揭示了赣州橘园根系内生AMF多样性,并且黄龙病菌侵染可通过改变菌种组成和相对丰度来影响AMF群落结构。 相似文献
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采用直接组织免疫印迹(Direct tissue blot immunoassay,DTBIA)和常规PCR技术,对采自广东梅州新建‘Cocktail’葡萄柚园内表现疑似黄龙病症状的样品进行检测。DTBIA检测发现疑似样品的韧皮部存在特征性紫红色反应,与黄龙病阳性对照反应一致。PCR检测发现枝条、叶片和果实样品中均检测出了黄龙病菌特异性条带,其中果蒂、中柱和种皮内病菌含量较高。进一步测序分析发现,来自‘Cocktail’葡萄柚病样的16Sr DNA和ef Tu基因与NCBI中的柑橘黄龙病菌亚洲种(Candidatus Liberibacter asiaticus,CLas)对应基因的序列相似性均为100%,证实‘Cocktail’葡萄柚感染了柑橘黄龙病菌亚洲菌株。 相似文献
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定量分析柑桔黄龙病菌在沙糖桔中的分布 总被引：1，自引：0，他引：1
《中国南方果树》2016,(6)
在广东清远感染柑桔黄龙病的沙糖桔园采带果枝条,分部位取样提取总DNA,并通过实时荧光PCR检测"Candidatus Liberibacter asiaticus"浓度。结果表明,不同部位的黄龙病菌浓度存在较大差异。其中,果实桔络的黄龙病菌含量最高,且黄龙病菌在果实中呈现富集状态。 相似文献
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白粉病寄主范围广，不仅为害九里香，还为害蔷薇、月季、玫瑰、杜鹃、山楂、白栎、木防已、桃等林木。九里香是城乡绿化带公园重要的观赏林木，近些年部分地区白粉病在九里香上发病普遍，且呈蔓延趋势，严重影响九里香的绿化观赏价值。 相似文献
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杂柑‘W·默科特’黄龙病菌分子鉴定和遗传多样性分析 总被引：1，自引：0，他引：1
《园艺学报》2019,(6)
2017年12月在云南红河新引种的‘W·默科特’杂柑植株上发现疑似黄龙病的叶片斑驳及"红鼻子果"症状。采集疑似的叶片和果实,分别提取其叶片中脉和橘络的DNA,利用黄龙病菌的特异引物对其16S rRNA基因和β–操纵子基因进行PCR扩增,并对扩增产物进行测序分析。研究结果表明,采自云南的‘W·默科特’样品中PCR能够扩增出黄龙病菌的特异条带,通过上述基因进行系统发育分析,发现该病菌归属于黄龙病菌亚洲种;为了进一步探明这些黄龙病菌的遗传多样性,利用3种类型的原噬菌体特异性引物对样品进行扩增分析,结果表明采自云南的‘W·默科特’植株上的黄龙病菌遗传多样性较为丰富。 相似文献
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利用与柑桔黄龙病相关的韧皮部杆菌("Candidatus Liberibacter sp.",简称Ca.L.sp.)16SrDNA基因、β-操纵子核糖体蛋白基因、外膜蛋白基因以及16S-23SrRNA间隔转录区基因位点的4对特异性引物,对采自云南瑞丽柠檬园的柚木虱(Psylla citrisuga)DNA样品进行PCR扩增,将扩增产物进行纯化、回收,连接至PEASY-T3载体并转化大肠杆菌感受态细胞Trans1-T1,筛选阳性克隆进行测序,利用NCBI Blastn软件以及MEGA5.05软件对所克隆的序列进行同源性分析与聚类分析。结果表明:柚木虱体内韧皮部杆菌亚洲种在这4个基因位点与已报道的Ca.L.asiaticus psy62株系全基因组相应基因位点的同源率均为99%。本研究证实柚木虱能够携带韧皮部杆菌亚洲种,是该菌新的昆虫宿主。 相似文献
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柑橘黄龙病病原菌Las在叶圆片嫁接接种的‘锦橙’中早期扩散研究 总被引：1，自引：0，他引：1
为了探究黄龙病（Citrus Huanglongbing,HLB）病原菌在柑橘韧皮部的早期运动情况,以柑橘黄龙病亚洲致病种Candidatus Liberibacter asiaticus（Las）为毒源,黄龙病高感品种‘锦橙’实生苗为受体材料进行叶圆片嫁接传毒。利用定量PCR技术对嫁接口处近端主脉、远端主脉、叶柄以及缘周叶组织进行了为期84 d的菌量测定。结果发现,病原菌在近端主脉中积累最快,其次是远端主脉、叶柄和缘周叶组织。以近端主脉为原初侵染部位,Las在嫁接叶片中1 ~ 84 d的早期运动可分为潜伏期（1 ~ 42 d）、指数期（43 ~ 70 d）和稳定期（71 ~ 84 d）。在早期侵染过程中,Las病原菌主要沿叶主脉从原初侵染部位由近向远扩散,其扩散趋势与症状从原初侵染部位向外扩散紧密相关。证实叶圆片嫁接法可作为柑橘HLB一种有效的传毒方式。 相似文献
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柑橘黄龙病、裂皮病和衰退病病原的多重RT-PCR检测 总被引：2，自引：0，他引：2
建立了一种同时检测柑橘黄龙病病原类细菌(Candidatus L iberibacter asiaticus, HLB) 、柑橘裂皮类病毒(Citrus exocortis viroid, CEVd) 、柑橘衰退病病毒(Citrus tristeza virus, CTV) 的多重RT-PCR技术体系。运用根据3 种病原核苷酸保守区序列设计的特异性引物, 成功的对同一样品中的HLB、CEVd、CTV进行多重RT2PCR扩增, 得到1 160 bp、371 bp、273 bp 3条特异性大小与试验设计相符的条带。就影响多重PCR 的主要因素引物浓度和退火温度进行了一系列优化, 建立了能同时检测HLB、CEVd、CTV的多重RT2PCR技术体系。该体系最低能从10 pg总RNA中检测出黄龙病类细菌和柑橘裂皮类病毒, 从1 pg总RNA中检测到柑橘衰退病毒。对采自田间37份材料的实际检测表明: 存在两种或3种病原的复合侵染。 相似文献
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《Scientia Horticulturae》2002,92(2):177-182
A successful micrografting technique in cashew was developed using in vitro germinated seedlings as rootstocks and axenic shoot cultures (shoot-tip and nodal cultures) established from mature tree source as microscions. In vitro germinated seedlings, which emerged 20–25 days after inoculation on absorbent cotton, were decapitated and used as rootstock. Mature tree explants initiated on hormone-free Murashige and Skoog [Physiol. Plant. 15 (1962) 473] (MS) modified medium were made into scion of 3–15 mm length for grafting. Micrografts could be easily cultured on hormone-free liquid half-MS medium and were potted out after 10–12 weeks of culture growth. Grafting success was dependent on the method of grafting and size of the scion. Shoot-tip grafting and side grafting were equally successful (79.5–100%). Length of scion shoot had significant effect on micrografting success. Graft success was high (79.5%) when the scion length was >5 mm and it was less (0.5%) when size of scion was small (3–5 mm). Scion presoaked in either water or 0.01% ascorbic acid and 0.015% citric acid (1:1) reduced phenolic browning and drying of scion. Micrografting techniques standardized could be used for rejuvenation of shoot explants of mature tree. 相似文献
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对NCBI基因库黄龙病亚洲种病原菌序列进行拼接, 并根据拼接结果在rplKAJL-rpoBC, 16S/23S rRNA和omp 3个位点上设计引物, 采用基因组步行方法, 在其亚洲种3个位点上共获得了15 168 bp非冗余新序列, 其中, 在rplKAJL-rpoBC位点上5′端上游区和3′端下游区分别获得了3 218和2 653 bp的非冗余新序列; 在16S/23S rRNA 位点上5′端上游区和3′端下游区分别延伸了1 853和2 459 bp的新序列; 在omp基因位点上分别获得了4 014和971 bp的新序列。序列分析表明在rplKAJL-rpoBC位点上的新序列包含2个新基因(suhB和serA); 16S/23S rRNA位点新序列包含4个新基因(膜转运蛋白基因、细胞壁脱氢酶假基因、5S rRNA、tRNAMet ) , omp位点新序列包含6个新基因(rpsB、tsf、pyrH、frr、cdsA2、cds2) 。这些新序列的获得为以PCR为基础的黄龙病相关研究提供了有用的参考依据。 相似文献
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以不同倍性穿心莲诱导的愈伤组织为试材,采用秋水仙素对穿心莲种子进行四倍体诱导,通过在穿心莲四倍体及二倍体诱导愈伤组织培养基中添加化感自毒物质肉桂酸进行共培养的方法,研究了肉桂酸对不同倍性穿心莲愈伤组织的褐化率、细胞鲜质量、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量的影响,以期为筛选穿心莲抗化感自毒物质的优良种质资源提供参考依据。结果表明:用0.05%的秋水仙素处理48h,穿心莲种子诱导成活率达89%,经过植株形态、气孔及染色体数目检测,确定了穿心莲四倍体株系PZ-1、PZ-2、PZ-3、PZ-4、PZ-5、PZ-6、PZ-7、PZ-8,其染色体数为4x=96,二倍体为2x=48。在1.00mmol·L-1肉桂酸的愈伤组织诱导培养基中培养7d,穿心莲四倍体愈伤组织的褐化率和MDA含量较二倍体低,而愈伤组织鲜质量、SOD、POD、CAT活性较二倍体高,显示四倍体较二倍体具有对肉桂酸更强的抵御能力,其中四倍体PZ-7表现出较显著的优异性状。 相似文献
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柑橘响应黄龙病侵染的韧皮部蛋白2基因CsPP2B15的克隆与表达分析 总被引：1，自引：0，他引：1
黄龙病病原菌诱导柑橘筛孔胼胝体过度积累是其致病的一个重要因素。柑橘韧皮部蛋白（Phloem Protein,PP）在筛孔胼胝体积累中起着重要作用。为研究柑橘韧皮部蛋白响应黄龙病亚洲种（Candidatus Liberibacter asiaticus,CLas）侵染的功能,克隆获得了一个响应黄龙病侵染差异表达的PP基因CsPP2B15的编码区和长1.5 kb的启动子序列,并以高感品种锦橙和耐病品种酸柚老叶和嫩叶为材料,进行基因表达分析。结果发现,CsPP2B15在高感品种锦橙嫩叶中受CLas诱导显著上调表达,而在耐病品种酸柚嫩叶中受CLas诱导显著下调表达,且在叶肉中的表达量显著高于叶脉。嫩叶和嫩梢被认为是柑橘响应黄龙病侵染的早期原初侵染部位。因此,CsPP2B15可能在CLas侵染柑橘早期中起重要作用。CsPP2B15启动子的顺式作用元件预测分析发现,CsPP2B15启动子含有许多与逆境和激素有关的顺式作用元件。进一步构建了CsPP2B15启动子控制GUS报告基因的植物表达载体,转化枳[Poncirus trifoliata（L.）Raf.]上胚轴。GUS组织化学染色和GUS酶活性测定均表明,CsPP2B15启动子具有较强的韧皮部组织特异性。 相似文献
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不同嫁接组合对西瓜植株生长及果实品质的影响 总被引：4，自引：1，他引：3
采用优质中大果型西瓜品种中科1号为接穗,常规一段嫁接用抗生王、超丰F1、西嫁强生、京欣砧3号、野生西瓜1号、野生西瓜2号为砧木,二段嫁接采用西嫁强生作基砧、超丰F1作中间砧,研究了常规一段嫁接法与二段嫁接法对西瓜生长发育及果实品质的影响。结果表明,采用二段嫁接的西瓜植株生长势、抗枯萎病能力、单果质量、小区产量、中心可溶性固形物含量、瓜瓤果胶含量在所有嫁接组合中表现最佳,果实脆度与对照差异不显著。南瓜类砧木西嫁强生、京欣砧3号在生产上可大量推广,同时二段嫁接法具有一定的推广价值。 相似文献
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During the breeding programs for Plum pox virus (PPV, Sharka) resistance in Prunus, the evaluation of the new releases through symptoms observation on leaves has been contradictory and represents one of the main handicaps in these programs. In order to increase the accuracy of this traditional evaluation method, we here analyze an alternative method based on the study of the ability of a genotype to allow the long-distance movement of the virus through its vascular vessels. Two different plant models have been assayed: (a) in Model I, the inoculation was performed in the ‘GF305’ rootstock with a later grafting of the genotype under evaluation and a scion of healthy control ‘GF305’, to evaluate the long-distance movement through the studied genotype from the rootstock to the scion (xylem transport), and (b) in Model II, the inoculation with ‘GF305’ diseased scions was performed by grafting these diseased scions onto the studied genotypes, which were grafted onto healthy ‘GF305’ peach seedlings, to evaluate the long-distance movement through the studied genotype from the scion to the rootstock (phloem transport). The results show that, regardless of the presence of symptoms, susceptible genotypes allowed the movement of the virus through their vascular vessels in both directions studied. However, the resistant apricot ‘Stark Early Orange’ did not allow this movement. We propose the study of the ability of a genotype to allow the long-distance movement of the virus as an alternative and more accurate method for the evaluation of PPV resistance. However, this protocol is much more tedious than the traditional one and could be used mainly in the evaluation of a reduced number of more interesting genotypes. 相似文献