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为建立一个稳定的蝴蝶兰RAPD反应体系,对RAPD反应体系中模板DNA、Taq DNA聚合酶用量、随机引物浓度、Mg2+浓度和dNTPs浓度等各项参数进行筛选比较。结果表明,最佳反应体系为:25μl反应体系中,其中含模板DNA(20 ng/μl)1.5μl,Taq DNA聚合酶(5 U/μl)0.4μl,随机引物(20μmol/L)1μl,Mg2+(25 mmol/L)2.5μl,dNTPs(10 mmol/L)0.5μl,10×PCR Buffer2.5μl,ddH2O 16μl。 相似文献
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SSR在鸭茅种质资源遗传多样性研究中的应用初探 总被引：1，自引：0，他引：1
本文以鸭茅基因组DNA为模板,利用小麦SSR引物对鸭茅SSR反应体系中的一些重要参数进行摸索和优化实验,建立了一套鸭茅SSR分子标记的最优化反应体系,在15μl体系中,最终浓度或量:Mg2 为2.5 mm/L、dNTP为400μmol/L、Taq酶为1.0U、引物浓度为2.0~2.5μpmol/L、模板NDA量为60~80 ng。同时成功的筛选出20对能较好的应用于鸭茅种质资源遗传多样性研究的SSR引物,可用于鸭茅SSR标记的进一步研究。 相似文献
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[目的]研究东北红豆杉RAPD反应体系的优化条件。[方法]以东北红豆杉叶片为材料,用改进CTAB法提取DNA,分别从模板DNA浓度、引物浓度、dNTP浓度,Taq DNA聚合酶量及镁离子浓度5个方面对东北红豆杉RAPD扩增效果的影响进行分析。[结果]通过各因子的比较分析,建立了东北红豆杉RAPD优化体系：20μl PCR反应总体积中含模板DNA 10 ng,Mg^2＋2.0 mmol/L,引物15pmolμ/l,dNTPs 0.2 mmol/L,Taq DNA聚合酶1.0 U,10×buffer缓冲液2μl,以双蒸水补充至20μl。[结论]为进一步探索与东北红豆杉性别鉴定相关的研究提供技术支持。 相似文献
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以鼠尾草属植物叶片为材料,提取基因组DNA,并对RAPD反应条件进行了系统优化.结果表明,采用核DNA法提取的DNA质量较高,适宜于RAPD分析;RAPD扩增最佳反应体系为20μl反应体系中,10×buffer 2.0μl,模板DNA 20 ng,Mg 浓度2.0 mmol/L,引物浓度0.6μmol/L,dNTPs浓度0.2mmol/L,Taq酶1.0U.扩增反应程序为94℃预变性5min,94℃变性1min,36℃退火1main,72℃延伸2main;40个循环;72℃后延伸10main,4℃保存. 相似文献
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以七彩鲑尾鳍为试验材料,对影响七彩鲑随机扩增多态性DNA(RAPD)扩增体系的重要参数进行了优化,建立了七彩鲑RAPD的最适反应体系.七彩鲑RAPD的最佳反应体系为:反应体系25μL,模板DNA的质量浓度4 ng/μL,Mg2+浓度2.0 mmol/L,dNTP浓度0.5mmol/L,引物浓度0.5μmol/L,Taq... 相似文献
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胡卢巴RAPD反应体系优化及应用 总被引：1，自引：0，他引：1
以胡卢巴DNA为模板,采用随机引物,优化胡卢巴的RAPD反应体系和反应条件.结果表明,在 20μL反应体系中,5种主要因素Taq DNA聚合酶、引物、dNTPs、模板DNA的最适浓度和退火温度分别是1μmol/min,15μmol/L,0.30mmol/L,20ng和34℃.在优化的RAPD反应体系条件下,构建22个胡卢巴种质的RAPD指纹图谱,为胡卢巴遗传多样性检测和其他方面的应用提供分子标记手段. 相似文献
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为了建立小麦RAPD反应的最佳体系,保证反应结果的稳定性和可靠性,寻找小麦冷暖型基因差异,降低试验成本,在相同PCR扩增程序(94℃预变性5 min,94℃变性45 s,38℃退火1 min,72℃延伸1.5 min,40个循环,72℃延伸10 min,4℃保存)下,对冷暖型小麦基因组DNA的RAPD扩增体系各参数进行比较筛选,创建其最佳反应体系为:25μl反应体系中,模板DNA 20 ng,10×PCR缓冲液2.5μl,dNTPs 0.2 mmol/L,Taq酶1 U,Mg2+浓度为2.0 mmol/L,ddH2O 12μl,随机引物10 ng。 相似文献
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[目的]研究辣木（Moringa oleifera Lamarch．）PAPD最佳反应体系,为辣木RAPD扩增提供研究基础。[方法]以辣木为研究材料,通过正交设计建立辣木RAPD最佳反应体系。[结果]辣木最佳RAPD反应体系为：10×PCR Buffer 2．5μl,Taq酶0．5μl（2．0U／μl）,dNTPs4．0μl（2．0mmol／L）,primer 4．0μl（2．0μmol／L）,DNA2．0μl（30．0ng／μl）,ddH2O 12．0μl;反应总体积为25．0μl。[结论]RAPD可以应用于辣木研究。 相似文献
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油菜RAPD最佳反应体系的初步构建 总被引：4，自引：0，他引：4
初步构建了油菜中RAPD扩增的最佳反应体系 ,结果表明 ,油菜的RAPD扩增最佳反应体系为 :在 2 0 μl的反应体系中 ,2 .0 μl 1 0倍的反应缓冲液、1 .2 μl 2 5mmol/LMgCl2 (终浓度为 1 .5mmol/L)、2 .0 μl1 .0mmol/LdNTPs(终浓度为 0 .1mmol/L)、0 .2 μl 5U/μl的Taq酶(每反应体系为 1 .0U)、2 .0 μl 5 μmolPrimer(终浓度为 0 .5 μmol/L)、6μlDNA(约 90ng)和6.6μlddH2 O。 相似文献
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家兔RAPD分析反应体系的优化 总被引：3，自引：0，他引：3
《山东农业科学》1999,(5):15-17
以家兔的基因组ＤＮＡ 为模板,研究影响家兔ＲＡＰＤ 扩增的因素。实验结果表明,Ｔａｑ酶、随机引物和Ｍｇ２ ＋ 浓度及模板ＤＮＡ 的纯度对ＲＡＰＤ 扩增影响较大。本实验建立了适于家兔ＲＡＰＤ 分析的反应体系：反应体积为２０μｌ,其中含有１ ×扩增缓冲液,２ ．０ｍ ｍｏｌ／Ｌ ＭｇＣｌ２ ,０ ．１ｍ ｍｏｌ／ＬｄＮＴＰ,０－２μｍｏｌ／Ｌ 随机引物,１ ．５ＵＴａｑ 酶,９０ｎｇ 模板ＤＮＡ 相似文献
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用砂培法研究紫花苜蓿(Medicago sativa)的六个品种苗期地上部分水浸提液对鸭茅(Dactylis glomerata L.)的化感效应.结果表明,紫花苜蓿六个品种茎叶水浸提液对鸭茅的化感效应在供试品种间差异显著.游客、苜蓿对鸭茅的种子发芽及幼苗生长有抑制作用,但游客却对鸭茅的苗干重有促进作用;三得利和赛迪对鸭茅的种子发芽、根长及根干重有抑制作用,却对苗生长的影响无显著差异.此外,供试紫花苜蓿浸提液对鸭茅的化感作用,随着浓度的升高,抑制作用随之增强. 相似文献
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NaCl盐胁迫对四种野生牧草发芽特性的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
研究了NaCl盐胁迫对紫云英、益母草、鸭茅和羊蹄4种野生牧草种子发芽特性的影响,结果表明,4种野生牧草种子发芽率因NaCl盐浓度的高低而有一定的差异,在0.3%低浓度盐胁迫下,紫云英、益母草和羊蹄种子的发芽率相对都较高,均在70%以上,而鸭茅在4种牧草中耐盐性最差.紫云英和羊蹄的发芽速度随盐浓度的增加减缓最慢,鸭茅最快.4种牧草胚根和胚芽的长度在不同盐浓度下与对照相比都有所减少,NaCl对紫云英和益母草胚根的伤害低于对胚芽的伤害,对鸭茅胚根和胚芽的影响均为严重,低浓度的钠盐对羊蹄的胚根长度有促进作用.4种野生牧草的发芽指数、相对发芽指数、活力指数和相对活力指数随着盐浓度的增加都呈下降趋势. 相似文献
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茶树基因组DNA提纯与RAPD反应系统建立 总被引：7，自引：0，他引：7
DNA的提取质量是决定RAPD分析成功与否的关键。茶树幼嫩新梢中含有大量的茶多酚等次生物质，采用磨样对添加杭酚氧化褐变的物质，在细胞核裂解之前去除细胞质中的茶多酚和蛋白质，而后再用改进的DNA微量快速提取法-SDS法分别从不同茶树品种新梢中提取和纯化基因组DNA，所得到的DNA样品适宜于RAPD反应，通过对茶树RAPD分析中影响扩增结果的因素的研究。建立了茶树RAPD的最适反应系统，即在25ul反应体系中，含20-50ng模板DNA，1.5mmol/1MgCl2，各0.1mmol/1DNTPs,0.2umol/L引物和1UTaqDNA聚合酶；扩增程序为：95℃预变性300s,94℃变性60s,35℃退火60s，72℃延伸120s，共进行40个循环，最后72℃延伸600s，这样可以取得较好的扩增效果。 相似文献