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甘蔗白条病(Xanthomonas albilineans)PCR,ELISA,DIA检验技术研究(英文) 总被引：1，自引：0，他引：1
应用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术检测甘蔗白条病（Ｘ．ａｌｂｉｌｉｎｅａｎｓ）蔗茎无症带菌样品和纯培养及总ＤＮＡ;并以改良半选择性培养基（ｍＸＡＭ）定量．比较了ＰＣＲ,ＥＬＩＳＡ,ＤＩＡ的检测效率和可靠性．表明ＰＣＲ能够特异性检出白条黄单胞包括标准菌株３３９１５ＡＴＣＣ和血清型Ｉ,Ｉ等１９个菌株．但是不能扩增其它５个分离自蔗茎的腐生黄单胞和１３个其它属种的植物细菌．能够检出少至１０ｐｇ靶细菌总ＤＮＡ或２０个活细菌．ＰＣＲ检测灵敏度较ＥＬＩＳＡ和ＤＩＡ高１００～１０００倍．田间样品检测结果与实际发病符合度为９３．４６％．这一分子检测技术适用于国内外甘蔗种质资源交换和口岸检疫以及病害流行学研究 相似文献
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甘蔗白条病(Xanthomonas albilineans)PCR检验技术研究 总被引：2，自引：1，他引：2
应用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术检测甘蔗茎白条病无症样品和细菌纯培养及ＤＮＡ,并以改良半选择培养基（ｍＸＡＭ）加以验证。结果表明,ＰＣＲ能特异性地检出白条黄单胞包括标准菌株３３９１５ＡＴＣＣ和血清型Ⅰ,Ⅱ等１９个菌株。但不能扩增其它５个分离自蔗茎的腐生黄单胞和１３个其它属种的植物细菌。能够检出少至１０ｐｇ靶细菌的总ＤＮＡ或２０个活细菌。ＰＣＲ检测灵敏度较ＥＬＩＳＡ和ＤＩＡ高１００～１０００倍。田间样品检测结果与实际发病符合度为９３．４６％。该项技术适用于国内外甘蔗种质资源交换和口岸检疫以及病害流行学研究。 相似文献
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应用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术检测甘蔗茎白条病无症样品和细菌纯培养及ＤＮＡ,并以改良半选择培养基（ｍＸＡＭ）加以验证。结果表明,ＰＣＲ能特异性地检出白条内单胞包括标准力株３３９１５＾ＡＴＣＣ和血清型Ⅰ、Ⅱ等１９个菌株。但不能扩增其它５个分离自蔗茎的腐生黄单胞和１３个其它属种植物细菌。能够检出少至１０ｐｇ靶细菌的总ＤＮＡ或２０个活细菌。ＰＣＲ检测灵敏度较ＥＬＩＳＡ和ＤＩＡ高１００－１０００倍。田间 相似文献
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应用聚合酶链式反应技术检测白蔗白条病茎无症带菌样品和纯培养及总ＤＮＡ；并以改良半选择性培养定量。比较了ＰＣＲ，ＥＬＩＳＡ，ＤＩＡ的检测效率和可靠性，表明ＰＣＲ能够特异性检出白条单胞包标准菌株３３９１５＾ＡＴＣＣ和血清Ｉ，Ⅱ等１９个菌株，但是不能扩增其它５个分离自蔗茎的腐生黄单胞和１３个其它属种的植物细菌。 相似文献
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柿树带化和刺槐丛枝的PCR检测 总被引：2，自引：0，他引：2
根据植物菌原体１６ＳｒＲＮＡ基因序列,合成一对寡核苷酸引物,用ＳＤＳ ＣＴＡＢ改进法直接提取田间发病的柿树带化病、刺槐丛枝病树和健康树皮层的ＤＮＡ,用ＰＣＲ方法成功地从病树ＤＮＡ模板中扩增出约１．１７ｋｂ的特异产物,经酶切进一步证实为植物菌原体１６ＳｒＤＮＡ．此项研究表明用特异合成的引物Ｆ１６／Ｒ１６,经ＰＣＲ扩增可以快速灵敏地检测植物菌原体． 相似文献
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王明霞 《福建农业大学学报(自然科学版)》1996,25(1):56-60
利用狄高辛（ＤＩＧ）标记制备菊花矮化类病毒（ＣＳＶ）特异性探针，由反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）进行ＣＳＶ ＲＮＡ的反转录和ｃＤＮＡ的扩增，然后比较２种核酸杂交方法－微量板杂交和斑点杂交检测ＣＳＶ的灵敏度。本研究结果表明，３０ｍｇ干燥样本抽提的ＣＳＶ ＲＮＡ被稀释４００倍，取４μＬ（约７５０ｐｇ样本抽提的ＲＮＡ）经ＲＴ－ＰＣＲ，其产物再用１０×ＳＳＣ稀释１００倍，采用微量板杂交仍可很容易得到 相似文献
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为明确我国甘蔗产区(简称蔗区)甘蔗宿根矮化病(Sugarcane Ratoon Stunting Disease,RSD)的发生情况,从我国甘蔗主产区的12个蔗区收集甘蔗叶片样品598份,采用特异性引物通过聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)方法进行宿根矮化病的分子检测。结果表明,598份甘蔗样品中有99份能检测到RSD,平均检出率为16.56%。12个蔗区的RSD检出率各不相同,临沧蔗区的RSD检出率最高,为27.78%;南宁蔗区的RSD检出率最低,为4.88%。15个主要甘蔗栽培品种均能检测到RSD,阳性检出率为15.38%～44.44%,其中新台糖22号RSD发病最严重,阳性检出率为44.44%,海蔗22号RSD发病最轻,阳性检出率为15.38%。可见,宿根矮化病在我国甘蔗栽培品种中普遍发生。 相似文献
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本实验建立了用ＰＣＲ（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ）技术体外扩增牛Ｙ染色体特异ＤＮＡ序列的方法。根据牛的ＳＲＹ序列设计一对引物，两条引物均为２３ｂｐ，对公牛１９４ｂｐ序列进行体外扩增。从屠宰的公、母牛肝和血液中提取ＤＮＡ，用作ＰＣＲ模板，ＰＣＲ仪内进行扩增。结果表明公牛个体样品显示清晰可见的特异ＤＮＡ扩增带，而母牛个体样品无扩增片段出现，与预期的结果完全符合。 相似文献
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DNA提纯方法对6种甘蔗亚族植物RAPD的影响 总被引：19，自引：1，他引：18
甘蔗植物组织内的多酚类、色素类等物质是干扰ＲＡＰＤ扩增反应的主要成分。本研究以ＣＡＴＢ法和ＳＤＳ法为基础,着重对抗氧化剂（ＰＶＰ等）、酶（蛋白酶Ｋ、ＲＮａｓｅＡ）和酚抽提等因素对提取ＤＮＡ的质量及其ＲＡＰＤ的影响进行了比较筛选。结果表明：①甘蔗ＤＮＡ提取质量和纯度与ＲＮａｓｅＡ、抗氧化剂等处理直接相关,蛋白酶Ｋ、ＣＡＴＢ和ＳＤＳ的处理无明显差异;②对于甘蔗ＲＡＰＤ反应,模板ＤＮＡ中含有一定量的ＲＮ 相似文献
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利用从澳大利亚引进的RSD标准抗原抗体,研究建立了TBIA快速检测甘蔗宿根矮化病（RSD）的方法。通过对田间采集的样本进行检测,并用I-ELISA检测法验证,结果表明：TBIA能简便、快速、准确、有效的检测出RSD,且检测效率高,适合于田间大批量样品快速检测。该方法为甘蔗宿根矮化病的诊断和防治、脱毒种苗的生产、对外甘蔗品种/材料交换检疫检测提供了技术支撑。 相似文献
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利用从澳大利亚引进的RSD标准抗原抗体,研究建立了TBIA快速检测甘蔗宿根矮化病(RSD)的方法。通过对田间采集的样本进行检测,并用I-ELISA检测法验证,结果表明:TBIA能简便、快速、准确、有效的检测出RSD,且检测效率高,适合于田间大批量样品快速检测。该方法为甘蔗宿根矮化病的诊断和防治、脱毒种苗的生产、对外甘蔗品种/材料交换检疫检测提供了技术支撑。 相似文献
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几种茄属植物基因组DNA提取与RAPD分析 总被引：11，自引：1，他引：11
研究了适于茄子及其近缘野生种基因组ＤＮＡ的提取方法，并对ＤＮＡ初步进行了ＲＡＰＤ分析。结果表明：ＳＤＳ－氯仿－异戊醇法不适于茄属植物ＤＮＡ提纯，而改进的ＣＴＡＢ－酚－氯仿－异戊醇对其成株叶／芽即可获得较高产率及纯度的ＤＮＡ；ＰＣＲ反应扩增出不同片段，引物ＯＰＧ—１１扩增片段在栽培品种与野茄中无差异，而在红茄与龙葵中呈现出一定的多态性。 相似文献
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云南双江蔗区甘蔗宿根矮化病的调查及病原检测 总被引：2，自引：0，他引：2
甘蔗宿根矮化病(Patoon Stunting Disease,RSD)是一种世界性的重要甘蔗病害,对甘蔗生产危害极大.摸清蔗区RSD的分布、发生危害情况,是科学推广温水脱毒健康种苗,有效防控甘蔗宿根矮化病的关键.对云南双江蔗区甘蔗宿根矮化病的发生和分布进行了调查和田间采样,采用PCR和I-ELISA法,对田间采集的60个样本进行RSD检测.结果表明,51个样本为阳性,阳性检出率85％,9个样本为阴性,确认双江蔗区存在RSD;通过系统分析,明确了不同品种、不同植期、不同蔗地RSD发生状况,为双江蔗区推广应用温水脱毒健康种苗、有效防控甘蔗宿根矮化病提供科学依据. 相似文献
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参考人、鸡,鼠的ＥＳＲ基因序列,设计一对引物,采用ＰＣＲ技术扩增出猪的ＥＳＲ基因一段ＤＮＡ片段,将该片段克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ Ｅａｓｙ质粒载体中,重组质粒经ＰＣＲ鉴定和酶切分析确定克隆成功,经测序结果分析确定该片段为猪ＥＳＲ基因与其他动物第４号外显子相对应的一段ＤＮＡ片段,大小为３３２ｂｐ。 相似文献
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用ＰＣＲ技术,从马立克氏病病毒（ＭＤＶ）ＣＶ１９８８／Ｃ株感染的鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）基因组ＤＮＡ中扩增出含起始密码子的ＭＤＶｐｐ３８基因同源物编码序列,在以Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记的ｐｐ３８基因作为探针,在Ｓｏｕｌｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ中,该探针能识别该ＰＣＲ扩增片段。将该ＰＣＲ扩增片段在ＢａｍＨ Ｉ和ＰｓｔＩ位点克隆进ｐＵ１８质粒载体,酶切分析筛选到含ｐｐ３８基因同源物的重组质粒并进行了全序 相似文献
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PCR方法进行牛Y—DNA特异性片段的分子克隆 总被引：1，自引：1，他引：0
本研究应用聚合酶链反应扩增牛Ｙ染色体特异性ＤＮＡ片段,从宰后成年公,母牛肝提取ＤＮＡ,分别俄为ＰＣＲ扩增模板,扩增产物电泳结果,公牛样品具有特异性ＤＮＡ扩增谱带,而母牛样品则没有扩增带,以ｐＵＣ１８为载体,将扩增片段构建成牛Ｙ特异性的部分Ｙ染色体文库。本实验所克隆的牛Ｙ特异性ＤＮＡ片段可以作为奶牛胚胎性别鉴定的探针ＤＮＡ。 相似文献
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海南槟榔黄化病与椰子致死性黄化病的病原关系初探 总被引：1，自引：2，他引：1
应用多聚酶链式反应（ＰＣＲ）技术检测结果表明,海南槟榔黄化病株及台湾槟榔黄化病株样品用于椰子致死性黄化病病原特异性扩增引物对Ｐ１、Ｋ２３－１及Ｐｈｙｔｏｐｌａｓｍａ通用引物对Ｎｅｓｔｅｄ,Ｆｕｓ－０７进行扩增,均未发现有特异的Ｐｈｙｔｏｐｌａｓｍａ ＤＮＡ谱带,呈阴性结果。其他３个感染Ｐｈｙｔｏｐｌａｓｍａ的植物对照样品用引物对Ｎｅｓｔｅｄ、Ｆｕｓ－０７扩增,均得到特异的Ｐｈｙｔｏｐｌａｓｍａ Ｄ 相似文献
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齿突斜纹蟹线粒体DNA中12S rRNA基因序列的研究 总被引：5，自引：0，他引：5
于１９９６年８月在日本东京水产大学坂田试验场海岸岩礁地带采集齿突斜纹触（Ｐｌａｇｕｓｉａ ｄｅｎｔｉｐｅｓ）样品,参考果蝇（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｙａｋｕｂａ）线粒体ＤＮＡ中１２ＳｒＲＮＡ基因片段序列进行了其引物设计、ＰＣＲ扩增及序列测定。得到齿突斜纹触线粒体ＤＮＡ中１２ＳｒＲＮＡ基因片段的碱基序列为４４７ｂｐ,其中腺嘌呤（Ａ）、胸腺嘧啶（Ｔ）、鸟嘌呤（Ｇ）、胞嘧啶（Ｃ）含量分别为１６０ｂｐ（３５ 相似文献
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[目的]调查广西主要蔗区甘蔗宿根矮化病(Ratoon stuning disease,RSD)的发生情况,了解其分布、危害程度及发生规律,为推广甘蔗健康种苗,有效防控RSD提供科学依据.[方法]2013~2014年在广西9个糖料蔗主产区进行RSD发生情况调查和田间取样,采用PCR对采集的蔗茎样品进行RSD检测,并按不同蔗区、不同品种、不同植期、不同蔗地类型的发病率分析广西蔗区RSD发生状况.[结果]在278个样品中有198个样品检测出RSD,检出率为71.2%;调查的9个主产区均检测出RSD,阳性检出率在58.3%~100.0%;采集的27个甘蔗品种(系)均检测出RSD,其中主栽品种ROC22发病严重,RSD检出率达80.8%;新植蔗的RSD检出率为36.0%,宿根蔗的RSD检出率为75.7%,宿根年限越长,RSD检出率越高;旱地蔗的RSD发病率比水田高18.1%(绝对值).[结论]RSD在广西普遍发生且发生严重,生产中急需推广甘蔗温水脱毒种苗和选育高抗且综合性状优良的甘蔗品种. 相似文献
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提取植物和微生物DNA的SDS-CTAB改进法 总被引：40，自引：1，他引：40
该文介绍了一种简便快速地提取植物和微生物细胞总ＤＮＡ的方法，该法是对提取真菌ＤＮＡ的ＳＤＳ ＣＴＡＢ法进行改进而成，经过修改后的ＳＤＳ ＣＴＡＢ法可在数小时内高效地提取细胞总ＤＮＡ．制备物经琼脂糖凝胶电泳检测到大于２０ｋｂ的ＤＮＡ主带，基本无ＤＮＡ碎带；不用ＲＮａｓｅ处理，就已经无ＲＮＡ的干扰．ＯＤ２６０／２８０值显示产物纯度较高，无需任何纯化处理即可以用于ＰＣＲ扩增和ＲＡＰＤ分析 相似文献