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一种快速提取小麦基因组DNA的改良CTAB方法 总被引：6，自引：2，他引：4
旨在寻求一种微量、快速提取小麦DNA的方法。以小麦幼叶为材料,用改良CTAB法、改良SDS法、沸水浴法提取小麦叶片总DNA,通过琼脂糖凝胶电泳法、紫外吸收法和PCR检测DNA完整性和纯度。改良CTAB法提取小麦基因组DNA质量和纯度高、无降解,每人每天可以轻松提取200个DNA样品,对转基因植株的PCR检测显示扩增目标条带清晰一致,无假阳性,试验结果理想。改良SDS法所提DNA纯度和浓度虽略不如改良CTAB法,但仍然符合实验要求。沸水浴法提取量少且杂质多,PCR无有效扩增,结果不理想。改良CTAB法提供了一种简便、快速微量小麦DNA提取方法,适用于PCR和其他分子生物学研究。 相似文献
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传统的辣椒DNA提取常采用CTAB法,该技术已难满足大量开展分子生物学工作的需要,为了解决此困境,进行了辣椒上碱煮法提取的尝试。一个可用于新品种的SSR分子标记被用作检验手段,验证碱煮法所提DNA是否可满足实验需要。结果表明针对不同的研究目的需采取不同的组织部位来进行DNA的提取,当面临种子纯度测定的任务时,需要截取种子的芽根。当面临成熟植株的基因型筛选的任务时,需要截取植株的顶端嫩叶。以上这些植物材料置PCR管中,在向管中加入80 μL 0.2 mol/L NaOH溶液后,置PCR仪上以100℃处理30分钟,
再以40 μL Tris-HCl缓冲液将pH值调节至7~8之间后,以之为模板可在后续的SSR-PCR中得到良好的实验结果。综上,本研究表明相较其他耗时耗力的传统DNA提取方法,碱煮法确是更适合解决辣椒大规模鉴定问题的技术手段。 相似文献
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传统辣椒DNA提取常采用CTAB法,该技术已难满足大量开展分子生物学工作的需要,为了解决此困境,进行了辣椒上碱煮法提取的尝试。将待测物置PCR管中,向管中加入80μL 0.2 mol/L Na OH溶液,置PCR仪上以100℃处理30 min,再以40μL Tris-HCl缓冲液将PCR管中溶液调至p H 7~8后,以之为模板可在后续的SSR-PCR中得到良好的实验结果。结果表明针对不同的研究目的需采取不同的组织部位来进行DNA的提取,当面临种子纯度测定的任务时,需要截取种子的芽根。当面临成熟植株的基因型筛选的任务时,需要截取植株的顶端嫩叶。综上,本研究表明相较其他传统的DNA提取方法,碱煮法确是更适合解决辣椒大规模鉴定问题的技术手段。 相似文献
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利用SSR分子标记鉴定玉米杂交种‘吉祥1号’纯度 总被引：5，自引：2，他引：3
纯度是种子质量的重要指标。‘吉祥1号’玉米杂交种是在甘肃省选育并大面积栽培的主推玉米品种。为鉴定该品种的纯度,本研究开展了‘吉祥1号’纯度鉴定SSR标记方法研究。通过比较快速提取法和改良CTAB法2种DNA提取方法在SSR分子标记纯度鉴定中的应用,结果表明:2种方法提取的DNA均适用于SSR分子标记纯度检测,但快速提取法具有简单、快速的特点,更适用于分子标记纯度鉴定。从20对SSR引物中筛选出2个标记bnlg2291k4和bnlg2305k4,用于‘吉祥1号’品种的纯度鉴定,2个标记均能明显的区分亲本和杂交种。在‘吉祥1号’杂交种中人为混入双亲,采用本研究确定的方法可准确鉴定出混入的自交系。 相似文献
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为探求适宜的转基因苹果种子和果肉DNA提取方法,以转豇豆胰蛋白酶抑制剂基因（CpTI）嘎拉（Gala）苹果果实为试材,采用改良CTAB法、SDS法与高盐低pH值SDS法对苹果种子和果肉进行基因组总DNA提取。结果表明,在提取种子基因组DNA时,供试3种提取方法均可获得纯度较高的DNA,但不同方法所获得的DNA产量差异较大,以改良CTAB法获得的DNA产量最高,为0.221 mg?g-1鲜重,SDS法和高盐低pH值SDS法所获得DNA产量偏低,分别为0.053 mg?g-1鲜重和0.034 mg?g-1鲜重;在提取果肉基因组DNA时,SDS法在纯度和产量上效果最好,DNA的A260/ A280 值为1.808,产量为0.012 mg?g-1鲜重,而其它两种方法提取质量较差。考虑到质量和得率的综合因素,认为改良CTAB法适宜提取转基因苹果种子DNA,SDS法适宜提取转基因苹果果肉DNA。 相似文献
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采用改良的3×CTAB法提取荷花品种笛女、国庆红、红苔莲的叶片、叶柄和花不同部位的DNA,并对提取的DNA进行琼脂糖凝胶电泳检测、纯度检测和ISSR分析.结果表明,除叶柄中提取的DNA效果不理想外,其余从叶片、花中提取的DNA纯度高、得率高,OD260/280比值在1.80左右,OD260/230比值在2.01左右.以红苔莲的花为试材,对改良的3×CTAB法提取基因组DNA的参数进行正交试验,选出提取DNA的最优组合.通过荷花基因组DNA的ISSR分析,完全满足实验要求. 相似文献
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《分子植物育种》2016,(9)
为建立一套丰产抗病型的茎瘤芥杂交品种"涪杂5号"种子纯度的快速鉴定方法,本研究以"涪杂5号"及其双亲为试验材料,采用改良CTAB法快速提取DNA与SSR标记分析相结合,对茎瘤芥杂交种种子纯度进行检测。利用改良CTAB法提取的DNA能够满足SSR分析要求,从600对SSR芸薹属共有引物中筛选出3对共显性SSR标记引物Ol11-G11、Na14-G06和Na14-G10,父母本条带互补,可将杂交种中的假杂株分离开。分别利用其中两对引物相结合,对"涪杂5号"种子群体进行SSR检测,结果发现分子标记鉴定结果与田间鉴定结果基本一致。研究结果表明了利用SSR引物Na14-G06与Na14-G10或Ol11-G11相结合可实现对茎瘤芥杂交种"涪杂5号"种子纯度的快速和准确鉴定,并为其大面积推广和安全生产提供了理论依据。 相似文献
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海南龙血树基因组DNA提取方法比较 总被引：2，自引：0，他引：2
摘 要：为选择一种简单、快速、有效的海南龙血树总DNA的提取方法,分别采用CTAB法、SDS法、SDS-CTAB法和改良CTAB法提取海南龙血树嫩叶片的总DNA,用琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计和ISSR对所提取的总DNA进行检测。结果表明,改良CTAB法提取的DNA A260/A280在1.7-1.9之间,纯度高、杂质少、DNA完整性好。以该方法提取的总DNA为模板进行ISSR扩增,谱带清晰,多态性、稳定性、重复性好。该法提取的总DNA适用于PCR扩增和其他分子生物学研究是有效提取海南龙血树基因组的方法。 相似文献
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对转基因玉米深加工产品中DNA的提取技术进行了研究。首先,通过经典CTAB法、CTAB初步改良法、CTAB有效改良法和煮沸法等4种方法提取了玉米片和爆米花中的DNA;其次,用琼脂糖电泳检测法将DNA进行了分离;再次,用紫外可见分光光度法检测出4种方法提取的DNA的纯度。结果表明,4种方法中的CTAB有效改良法提取DNA的完整性、纯度更好。 相似文献
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黑核桃叶片基因组DNA提取方法比较研究 总被引：2，自引：1，他引：1
探索从富含多酚和多糖等次生代谢物质的黑核桃叶片中获得高质量DNA的提取方法。以黑核桃与核桃叶片为材料,采用SDS、CTAB和改良CTAB 3种DNA提取方法对黑核桃与核桃基因组DNA提取效果进行比较研究,并通过琼脂糖凝胶电泳与紫外分光光度计检测所提取样品的质量;SDS与CTAB法重复性较差,提取的黑核桃DNA易降解;改良CTAB法可有效抑制酚类物质及细胞内多糖对DNA纯度的影响,对样品提取的DNA也无降解现象,纯度较高,得到的DNA A260/A280值均处于1.80~1.95之间;改良CTAB法是适用于高质量黑核桃DNA的提取方法。 相似文献
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甘蓝型油菜成熟籽粒DNA快速提取方法探讨 总被引：1，自引：0，他引：1
以室温保存不同年份的甘蓝型油菜种子为材料,采用改良的CTAB法和DNA抽提试剂盒分别提取甘蓝型油菜籽粒DNA,探讨适合甘蓝型油菜籽粒DNA提取的方法。结果表明,不同保存年份种子提取的DNA含量无显著差异;受种皮色泽的影响也较小;用改良的CTAB法比试剂盒所提DNA产量高,结构完整性好,成本较低。PCR扩增检测结果表明两种方法获得的DNA均能满足一般的分子实验。因此,从油菜干籽粒中直接提取DNA可以节约时间,显著提高工作效率,为快速高效地进行甘蓝型油菜种质资源和遗传多样性分析奠定了基础,同时,也利于快速鉴定推广品种是否带有外源基因。 相似文献
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种子纯度检测是产品质量检测的中心，检验种子纯度是促进农业发展和维护种业秩序的必经之路。随着信息化发展，种子纯度快速分子检测技术不断更新优化，如何使用现代化纯度快速分子检测技术验证玉米种子纯度是值得思考的问题。文章阐述了机器视觉技术、分子标记技术、DNA快速提取法，分析了玉米种子纯度快速分子检测技术应用方法，结合试验结果得出玉米种子纯度快速分子检测技术步骤以及梯度要求。 相似文献
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黄山木兰叶片基因组DNA提取方法的比较研究 总被引：1，自引：0，他引：1
《分子植物育种》2016,(3)
以珍贵渐危植物黄山木兰的嫩叶为材料,利用改良CTAB法、SDS法、高盐低p H法和Bio Teke试剂盒法提取基因组DNA,通过超微量紫外分光光度计检测、琼脂糖凝胶电泳、限制性内切酶消化和EST-SSR引物扩增法系统地检测DNA的质量及得率。结果表明,在DNA纯度和得率方面,改良CTAB法提取的DNA结果最佳,Bio Teke试剂盒法提取的DNA纯度较好但得率较低,SDS法和高盐低p H法提取的DNA有明显的蛋白质杂质、多糖及其他次生代谢物和RNA的污染;酶切消化结果中改良CTAB法和Bio Teke试剂盒法表现良好;EST-SSR引物扩增结果中唯有改良CTAB法提取的DNA扩增目的基因条带数目最多且清晰。综合分析,改良CTAB法是最适合黄山木兰叶片基因组DNA提取的方法。 相似文献
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豆粉基因组DNA不同提取方法的比较 总被引：1，自引：1，他引：0
以市售豆粉为材料,分别采用热解法、异丙醇沉淀法、CTAB法、SDS法、高盐低pH法等以及它们的改良方法提取基因组DNA,并对提取的DNA进行光密度、琼脂糖凝胶电泳和PCR检测。结果表明除改进高盐低pH法外,其它所有方法提取的基因组DNA均可满足PCR检测要求。同时,综合考虑基因组DNA的纯度和浓度,此研究认为豆粉基因组DNA提取方法的优劣依次为：改进热解法、改进异丙醇沉淀法、热解法、异丙醇沉淀法、高盐低pH法、改进CTAB法、CTAB法和改进SDS法。这几种豆粉基因组DNA提取方法都具有操作简单、耗时短、利于快速检测的优点。 相似文献
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一种适用于PCR扩增的甜菜干种子DNA快速提取方法的研究 总被引：2，自引：2，他引：0
为了寻求一种快速提取甜菜DNA的方法,利用改良CTAB法对甜菜干种子DNA进行了提取,经琼脂糖电泳及SRAP和SSR两种随机引物扩增检测,结果表明该法提取的DNA完整性好,SSR及SRAP扩增条带清晰,符合甜菜SSR-PCR及SRAP-PCR对DNA质量的要求。本研究建立了快速提取甜菜DNA的体系,为分子标记在将来甜菜品种指纹图谱构建及辅助育种等方面的应用奠定了坚实的基础。 相似文献