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以受番木瓜环斑病毒（Papaya ring spot virus,PRSV）侵染的番木瓜（Carica papaya）叶片为供试材料,采用RT-PCR 方法克隆其外壳蛋白基因cp,并将其连接到原核表达载体pET-28b（+）上,酶切鉴定及克隆测序确定开放阅读框的正确性,将获得的重组质粒转化大肠杆菌表达宿主菌。通过摸索转化的表达宿主菌种类、IPTG 浓度及诱导时间,获得高效表达PRSV cp 的条件。SDS-PAGE 分析结果表明,CP 融合蛋白分子量为36.8 kD。以Ni2+-NTA 亲和层析柱纯化的融合蛋白为抗原,免疫注射新西兰大白兔制备得到高效价抗体,间接ELISA 测定效价为1︰16 384。Western blot 检测结果表明,制备的抗血清可与诱导表达的融合蛋白发生特异性反应。通过ID-ELISA 检测田间样品证实了制备的抗血清与PRSV 侵染病叶发生了良好的特异性反应。本试验为PRSV 的快速检测以及PRSV 编码蛋白的功能研究奠定了基础。 相似文献
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番木瓜（Carica papaya Linnaeus）原产热带美洲,与香蕉、菠萝并称热带三大草本果树。2005年我国番木瓜栽培面积已达1万hm2,产量52万t。不仅广东、广西、福建等南方省份大规模种植,而且北方也有设施栽培。但由于番木瓜环斑病毒（Papaya Ringspot Virus,PRSV）的为害,番木瓜生产受到严重威胁,有的甚至绝产。番木瓜环斑病毒病已成为番木瓜生产的主要限制因子㈦。 相似文献
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商业化的抗番木瓜环斑病毒（papayaringspotvirus,PRSV）的转基因番木瓜品种‘华农1号’的应用成功控制了华南地区该毁灭性病毒。然而近年来在广东和海南的一些转基因或非转基因植株上发现了另一种具有严重危害的病毒——番木瓜畸形花叶病毒（papayaleafdistortionmosaicvirus,PLDMV）。为了明确这两种病毒在番木瓜上的相互关系,通过人工接种分析二者在转基因和非转基因番木瓜上的侵染率、症状、细胞病理变化以及病毒积累量等特征。结果表明,‘华农1号’对PRSV有很强的抗性,但对PLDMV却高度感病,且PLDMV并不能协助PRSV克服转基因番木瓜对其的抗性;两种病毒单独侵染和复合侵染非转基因番木瓜均能引致严重的症状,二者症状无明显差异。细胞病理学分析表明,病毒侵染后叶片叶绿体萎缩且排列不紧凑,复合侵染并未对叶肉细胞造成更为严重的损害。接种PRSV的转基因番木瓜15d后PRSV积累量逐渐减少,直至检测不到;而接种PLDMV后其积累量逐渐升高并保持在一个较高的水平。在转基因和非转基因番木瓜上,PRSV的积累量始终低于PLDMV,在非转基因番木瓜上,两种病毒长期共... 相似文献
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番木瓜环斑病毒（papaya ringspot virus,PRSV）是瓜类作物主要病毒之一,分析了甜瓜分离物HaNHK10的基因组序列和分子变异,构建了具有侵染性的全长cDNA克隆。结果显示,HaNHK10分离物基因组全长为10 332 nt,与其他分离物的核苷酸和氨基酸序列一致性分别为74.60%～97.80%和85.30%～98.50%。基于全基因组序列的系统进化分析显示,HaNHK10与来自中国的所有分离物均聚集于II组中,并与中国山东的西葫芦分离物PRSV-SD亲缘关系最近。接种试验显示,HaNHK10分离物的全长cDNA克隆具有侵染性,它能系统侵染甜瓜、黄瓜、西瓜、南瓜、西葫芦和瓠瓜6种作物,经接种产生的病毒后代也能够通过摩擦接种侵染植株。 相似文献
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番木瓜环斑病毒西瓜株系（PRSV—W）和小西葫芦黄化花叶病毒中国株系（ZYMV—CH）是危害我国西瓜的主要病害。以抗病毒病西瓜野生种质P．I．595203与感病普通西瓜自交系98R为亲本，采用单粒遗传方式得到109个F3代株系。分别对亲本、F1及F3代109个株系群体进行了苗期抗PRSV—W和ZYMV—CH接种鉴定，通过F3代群体的抗感分离情况来推测F2代单株的基因型，并分别对PRSV—W与ZYMV—CH抗性遗传及其这2个抗性基因的连锁关系进行分析。研究结果发现P．I．595203对PRSV—W的抗性是由单隐性基因控制，同时可能存在微效修饰基因，将此基因暂定名为prs—W；同时进一步证实了西瓜对ZYMV—CH的抗性由单隐性基因zym-CH控制，zym-CH和prs-W2个抗性基因在遗传上存在一定连锁关系，其遗传距离是27cM。 相似文献
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番木瓜品种资源对环斑病毒病抗性鉴定研究 总被引：1，自引：1，他引：0
番木瓜对环斑病毒病的抗病性鉴定方面的报道很少。其中以转基因番木瓜的抗性鉴定为主;其余都是间接鉴定,采用一些生理、生物化学和血清学的方法间接地判定抗病性的水平,田间鉴定只起到辅助作用,所以到目前还没有一套完整的直接抗性鉴定的方法。本研究采用室内（人工接种）和大田（自然发病）相结合进行抗性鉴定,补充番木瓜环斑病毒病抗性鉴定方法,从番木瓜品质资源对环斑病毒病的抗性鉴定入手,筛选抗性优良品种,从而为番木瓜抗病育种,优良品种推广,以及利用组织培养技术对优良品种保存和快繁奠定基础。 相似文献
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惠州优质高产番木瓜的栽培技术研究 总被引：1，自引：0，他引：1
文章研究和总结在惠州引种优质高产的番木瓜的经验:番木瓜生产过程中选用早结、丰产、优质、抗病毒病强的优良品种是前题,培育壮苗是基础,早结丰产栽培技术是关键;番木瓜1年生栽培方式有利于避开冬季霜冻危害,同时,能最大限度地减轻特别是番木瓜环斑病毒病的发生,降低防治成本. 相似文献
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通过接种PRSV Ys、Vb和Sm3个株系及田间诱发鉴定,研究了抗PRSV突变岭抗1号（聪1）的抗病稳定性。结果表明,LK-1表现出高抗PRSV-Ys和PRSV-Vb2个株系的能力,对PRSV．Sm株系则无明显抗病能力,抗病性不因自交繁殖而丧失,种植到田间的接种苗成株期的田间抗性表现与苗期表现基本一致,表明LK-1的抗病性能具较高的稳定性。 相似文献
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采集北京顺义和昌平、山东寿光及广东深圳等地田间感染病毒病的黄瓜材料284份,利用黄瓜花叶病毒(CMV)、西瓜花叶病毒(WMV)、小西葫芦黄花叶病毒(ZYMV)、黄瓜绿斑驳花叶病毒(CGMMV)及番木瓜环斑病毒(PRSV)5种黄瓜病毒抗体采用酶联免疫吸附(ELISA)法对其进行病毒病种类鉴定。结果表明,顺义和昌平采集到的126份和124份病毒样品,均在其叶片上检测到CMV、WMV、ZYMV 3种病毒,其中CMV检出率最高,均为100.00%;其次是ZYMV,检出率分别为80.95%和66.94%;WMV检出率最低,分别为51.59%和53.23%;在感病果实上只检测到CMV。在寿光采集的28份发病叶片中,检测到CMV、WMV、ZYMV、PRSV 4种病毒,其检出率分别为100.00%、35.71%、35.71%、17.86%。在深圳采集的6份黄瓜感病材料中,检测到CMV、WMV、PRSV 3种病毒,其检出率分别为100.00%、50.00%、50.00%。调查结果还发现,在北京顺义和昌平、山东寿光及广东深圳均存在2种或2种以上病毒复合侵染的现象。 相似文献
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采用双链RNA ( double-stranded RNA, dsRNA) 分析法, 发现杭州市近郊的部分萝卜植株及其子代含有约118 kbp的dsRNA; 在聚丙烯酰胺凝胶上可分离为大小接近的dsRNA1和dsRNA2。以dsRNA1为模板, 采用单引物扩增法获得其全长cDNA; 克隆测序确认为1 866 nt; 预测其最大开放阅读框ORF(Open Reading Frame) 为574个氨基酸, 与双分病毒属( Partitivirus) 中部分病毒的RdRp (RNA dependent RNA polymerase) 氨基酸序列具有一定的同源性。推测此dsRNA可能为萝卜黄边病毒( radish yellow edge virus, RYEV) 感染所致。 相似文献
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草莓品种对炭疽病抗性的鉴定技术研究 总被引：7，自引：0，他引：7
从沈阳农业大学草莓试验园的发病草莓植株上分离获得胶孢炭疽菌[Colletotrichum gloeosporioides(Penz.)Sacc.],以6个草莓主栽品种为试材,进行品种抗病性鉴定技术研究。结果表明,点滴接种、菌片接种和喷雾接种3种方法均能使供试草莓植株感染炭疽病,其中以喷雾接种法发病率和病情指数最高。据此建立了草莓对炭疽病抗性鉴定技术体系:以菌悬液在植株6叶期喷雾接种,接种适宜孢子量1.0×105个/mL,保湿时间48h,接种后5d调查叶片病情和接种后7d调查叶柄及匍匐茎病情。草莓品种抗性鉴定结果表明,红颜属感病品种,丰香表现中感,哈尼、新明星表现中抗,而玛利亚和吐德拉抗性较强,此结果与其生产上的表现基本一致。 相似文献
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During the breeding programs for Plum pox virus (PPV, Sharka) resistance in Prunus, the evaluation of the new releases through symptoms observation on leaves has been contradictory and represents one of the main handicaps in these programs. In order to increase the accuracy of this traditional evaluation method, we here analyze an alternative method based on the study of the ability of a genotype to allow the long-distance movement of the virus through its vascular vessels. Two different plant models have been assayed: (a) in Model I, the inoculation was performed in the ‘GF305’ rootstock with a later grafting of the genotype under evaluation and a scion of healthy control ‘GF305’, to evaluate the long-distance movement through the studied genotype from the rootstock to the scion (xylem transport), and (b) in Model II, the inoculation with ‘GF305’ diseased scions was performed by grafting these diseased scions onto the studied genotypes, which were grafted onto healthy ‘GF305’ peach seedlings, to evaluate the long-distance movement through the studied genotype from the scion to the rootstock (phloem transport). The results show that, regardless of the presence of symptoms, susceptible genotypes allowed the movement of the virus through their vascular vessels in both directions studied. However, the resistant apricot ‘Stark Early Orange’ did not allow this movement. We propose the study of the ability of a genotype to allow the long-distance movement of the virus as an alternative and more accurate method for the evaluation of PPV resistance. However, this protocol is much more tedious than the traditional one and could be used mainly in the evaluation of a reduced number of more interesting genotypes. 相似文献