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从自然发病死亡貂体内分离到１株水貂病毒性肠炎（ＭＶＦ）强毒株－ＭＥＶ，将该株病毒在犊牛睾丸（ＣＴ）细胞和猫肾传代细胞（ＣＲＦＫ）上混合培养进行适应。当传至５６代时，在ＣＴ细胞上出现细胞病变（ＣＰＥ），而后单独在ＣＴ细胞上传至７０代，经终点稀释克隆和鉴定获得一弱毒株。以其制备的ＣＴ细胞弱毒疫苗，给每只貂注射或口服１～５ｍＬ均未见任何不良反应。注苗后１２、６０、７２、１８０ｄ攻毒，保护率均为１００％。 相似文献
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应用从唐山地区ＭＶＥ病死水貂中分离强毒，经牛睾细胞（ＣＴ细胞）和ＣＲＦＫ细胞混合培养，强迫感染，传至５８代后，ＣＴ细胞出现ＣＰＥ变化，除去ＣＲＦＫ细胞，单用ＣＴ细胞传毒，传至７０代，经电镜、ＨＡ和ＨＩ试验证明，驯化弱毒株为典型细小病毒，经终点衡释克隆和致病性试验结果，对貂未发生致病性反应，注射和口服弱毒株的貂ＨＩ比对照貂有明显升高。 相似文献
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犬瘟热,猫细小病毒,犬腺病毒弱毒株的理化特性及生物学试验 总被引：4，自引：2，他引：2
以鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）、猫肾传代细胞（ＣＲＦＫ）、狗肾传代细胞（ＭＤＣＫ）从引进的疫苗中分别分离到犬瘟热ＣＤＶ－Ａ株、猫细小病毒ＦＰＶ株、犬腺病毒ＣＡＶ１株。对三个弱毒株的细胞病变规律,形态特征,病毒滴度,理化特性,核酸型,血清学交叉反应,本动物的安全性及免疫原性等内容进行了试验。鉴定结果表明,３个弱毒株均可作为制苗用毒种 相似文献
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抗水貂肠炎细小病毒单克隆抗体的建立 总被引：3，自引：1，他引：2
以我国分离的水貂肠炎细小病毒（ＭＥＶ）为抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠获得的脾细胞与ＮＳ－１骨髓瘤细胞融合，筛选出８株分泌抗ＭＥＶ的单克隆抗体杂交瘤细胞。经鉴定，８株杂交瘤细胞都属于Ｂ型抗ＭＥＶ单克隆抗体。 相似文献
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用ＰＥＤＶＣＶ７７７株强毒适应Ｖｅｒｏ细胞系并传至１４７代。以ＰＥＤＶ沪株做效检用强毒。传代毒８３代之后适应了仔猪肾原代细胞。自９０代起进行了５次克隆纯化,克隆是在２次群斑（由５～７个单斑组成）的基础上,再进行３次单斑挑选（均是１ｍｍ以内小空斑）。以８３７斑５株继续传代并做系列试验。传代毒的毒价为１０７．０～１０７．５ＴＣＩＤ５０／０３ｍｌ。免疫接种途径为后海穴位。克隆后５代（总代次１０４代）～２５代的５批次主动免疫试验的总保护率为９５９２％（４７／４９）,对照组８８８％（１６／１８）发病。克隆后１７代～４０代的８批次被动免疫试验的总保护率为９６２％（７６／７９）,对照组１００％（１０／１０）发病。以克隆后２５代（总代次１２５代）进行稳定性试验,经６代次返祖传代毒力未返强,仍是稳定的,已符合弱毒株的标准。在与ＴＧＥ弱毒株组合制备的二联弱毒苗的初步田间试验中取得良好效果。 相似文献
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狂犬病 犬肠炎 犬瘟热 犬腺病毒病犬副流感五联弱毒冻干疫苗的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
从国外引进的犬瘟热病毒（ＣＤＶ）、犬细小病毒（ＣＰＶ）、犬腺病毒－２型（ＣＡＶ２）和犬副流感病毒病毒（ＣＰＩＶ）四联弱毒样品中，分离筛选出增殖性良好的ＣＰＶ０ＸＮ１，ＣＡＶ２－ＸＮ３和ＣＰＩＶ－ＸＮ４株。另外还通过离体异种细胞交叉传代，获得的ＣＤＶ－ＸＮ１１１２弱毒株；从狂犬病毒株疫苗样品中筛选出ＥＲＡ８３６株。经试验证明这５株病毒在５代以内可作为制苗用种毒。采用静置和旋转培养法高滴度扩增这５株弱 相似文献
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针对鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）弱毒株Ｆ蛋白前体（Ｆ０）Ｆ２片段的特异结构,人工合成特异性多肽,将多肽与牛血清白蛋白（ＢＳＡ）化学偶联制和轩成全抗原后免疫小鼠,制备抗多肽血清。经ＥＬＩＳＡ检测,该抗体与ＭＤＶ弱毒株呈阳性反应,而与鸡痘病毒（ＦＰＶ）,鸡传染性腔上囊病病毒（ＩＢＤＶ）,ＭＤＶ强毒Ｆ４８Ｅ８株和四平析呈阴性反应,试验结果证明该抗体可以用于鉴别ＮＤＶ弱毒株。 相似文献
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适应Ｖｅｒｏ细胞传染性腔上囊病毒（ＩＢＤＶ）Ｘ毒株,通过对鸡胚的致死作用、病理变化的结果表明,ＩＢＤＶ Ｘ毒株在Ｖｅｒｏ细胞上传代后,各试验代次毒株均能适应鸡胚,并引起鸡胚死亡,对鸡胚的致病性随传代次数的增加而减弱。 相似文献
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用病毒ＤＮＡ限定酶及抗猫泛白细胞减少症病毒（ＦＰＬＶ）单克隆抗体对源于猫、水貂及犬的１４株猫细小病毒（ＦＰＶ）进行抗原和基因（差异）的比较测定。且在抗原性及基因特性方面与日本的ＦＰＬＶ及水貂肠炎病毒（ＭＥＶ）毒株进行比较。最近从中国东北部分离出来的几株ＭＥＶ和狗细小病毒（ＣＰＶ，“新”抗原型）具更多的相同之处。由于抗原及基因特性所决定我们还是把一份从普通猫粪便中分离出的一个毒株看作ＣＰＶ。用限定酶（ＨｉｎｆＩ）消化显示。早期分离到的一株“新”抗原型ＣＰＶ和分离到的“旧”抗原型ＣＰＶ毒株具有相似的消化片断。包括上述提到的这些特性的测定结果显示．在ＦＰＶ的不同亚种间存在抗原的多相性和基因的多型性。 相似文献
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马传染性贫血病毒弱毒株LTR的克隆及序列分析 总被引：9，自引：0，他引：9
从马传染性贫血病毒（ＥＩＡＶ）弱毒株感染的驴胎皮肤（ＦＤＤ）细胞中提取前病毒ＤＮＡ，以其为模板，通过ＰＣＲ扩增出ＥＩＡＶ弱毒株的ＬＴＲ，并将其克隆到载体质粒ｐＵＣ１９中。经酶切分析，ＰＣＲ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交筛选、鉴定，获得含有ＥＩＡＶ弱毒株ＬＴＲ片段的重组质粒ｐＬＴＲ。对该质粒的序列分析发现，在中国ＥＩＡＶ弱毒株ＬＴＲ的Ｕ３区含有４个与细胞转录因子结合的位点，其中有３个ＰＵ．１位点和１个ＡＰ－１位点，Ｕ３区还存在１个ＴＡＴＡＴＡＡ启动子序列；Ｒ区长为８１ｂｐ，含有１个帽位点ＧＧ和１个Ｐｏｌｙ（Ａ）信号序列ＡＡＴＡＡＡ；在帽位点下游是１个病毒Ｔａｔ蛋白结合位点，即ＴＡＲ位点；Ｕ５区长为３９ｂｐ。中国ＥＩＡＶ弱毒株ＬＴＲ序列与国外发表的其他毒株序列相比，在ＬＴＲ的一些调控部位有变异发生，中国ＥＩＡＶ弱毒株与美国ＥＩＡＶ原型株（Ｗｙｏｍｉｎｇ株）ＬＴＲ区核苷酸序列有１８．７２％的差异。 相似文献
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犬冠状病毒YS1株的致弱驯化与免疫试验 总被引：2，自引：0，他引：2
应用猫肾传代细胞（ＣＲＦＫ）单层接毒方法将犬冠状病毒（ＣＣＶ）强毒ＹＳ１株连续传代驯化至６０代,经安全性试验和免疫原性测定,该强毒株已驯化对弱毒水平,对犬安全,免度原性良好。 相似文献
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应用鸡胚培养、电镜观察、血清学试验及病理组织学检查，分离与鉴定了来自河南省鸡传染性法氏囊病（ＩＢＤ）免疫鸡群Ｈｅ１、Ｈｅ２、和Ｈｅ３三株ＩＢＤＶ毒株。鸡胚传代试验表明，Ｈｅ１和Ｈｅ２株连续传代到第４代出现规律性死亡和ＩＢＤ病变，而Ｈｅ３株在第１代时鸡胚即全部死亡，且出现ＩＢＤ典型鸡胚病变。Ｈｅ１、Ｈｅ２和Ｈｅ３毒株对易感鸡致病力有一定的差异。病死率分别为２０％、１０％和４０％，多数为弱毒株。免疫保护试验证明，用常规的ＩＢＤＶ血清Ｉ型病毒株Ｂ２疫苗对Ｈｅ１、Ｈｅ２和Ｈｅ３毒株的免疫保护试验，与对照组相比保护率分别为０％、０％和１０％。未死亡扑杀的免疫试验鸡法氏囊有不同程度的病理组织学病变，表明Ｉ型毒株疫苗对ＩＢＤ基本上无免疫保护作用。所分离的毒株可能是ＩＢＤＶ的变异株。 相似文献
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犬冠状病毒超免疫血清的制备及应用 总被引：2，自引：0，他引：2
采用犬冠状病毒（ＣＣＶ）弱毒株和强毒株多次免疫健康犬，采集超免疫血清，其ＣＣＶ血清中和（ＳＮ）抗体效价高达１：２１０。试验结果表明，该超免疫血清安全、特异，无毒副作用，每只幼犬注射１．５ｍＬ／ｋｇ体重的该血清即可使９０％以上的犬获得１０￣１５ｄ的被动免疫保护；对１１０只患ＣＣＶ性肠炎病犬的临床治疗结果表明，该超免疫血清治疗效果可靠，其治愈率达９４％。 相似文献
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多聚酶链反应区分血清Ⅰ型MDV强弱毒株 总被引：1，自引：0，他引：1
选用血清Ⅰ型马立克氏病病毒（ＭＤＶ＿１）基因组中位于１３２ｂｐ正向重复序列两侧的２段寡聚核苷酸为多聚酶链反应（ＰＣＲ）的引物，分别对Ⅰ型ＭＤＶ强毒株（京－１株）和弱毒株（Ｍｄ１１／７５Ｃ株）的核酸进行基因扩增。结果显示：该弱毒株核酸基因中含６个或更多个拷贝数的１３２ｂｐ正向重复序列，而强毒株核酸基因中仅含２个，相同引物对Ⅱ型、Ⅲ型ＭＤＶ（ＳＢ－１株，Ｆｃ１２６株）和禽网状内皮组织增生病病毒（ＲＥＶ）核酸作ＰＣＲ扩增，未检出任何核酸片段。 相似文献
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应用宜兴赛尔生物化工厂产１９９、Ｆ－１０、１６４０和ＤＭＥＭ细胞培养基与美国Ｓｉｇｍａ公司产１９９、Ｆ－１０、１６４０和ＤＭＥＭ细胞培养基分别配制细胞培养液，培养ＳＰ２／０和Ｖｅｒｏ细胞系及原代鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ），做细胞培养动力学比较试验。比较这两种来源的细胞培养基对细胞生长的形态、分裂速度及鸡马立克氏病毒（Ｍａｒｅｋ＇ｓｄｉｓｅａｓｅｖｉｒｕｓ．ＭＤＶ）疫苗毒株ＨＶＴ－ＦＣ１２６和ＲｉｓｐｅｎｓＣＶＩ９８８在ＣＥＦ单层上增殖量的差异。研究结果表明，四种国产细胞培养基与对应的四种进口培养基对细胞生长及病毒增殖的影响无显著差异 相似文献
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应用胶体金免疫电镜技术检测鸭肝炎病毒 总被引：17，自引：1，他引：16
本研究应用胶体金免疫电镜技术和直接电镜（ＤＥＭ）、免疫电镜（ＩＥＭ）比较观察了鸭肝炎病毒（ＤＨＶ）ＱＬ＿７９弱毒株和Ｒ＿８５９５２标准强毒株。ＱＬ＿７９株和Ｒ＿８５９５２株的形态结构是一致的，球形，大小为２０～４０ｎｍ。胶体金免疫电镜技术可作为检测ＤＨＶ的常规方法，具有简便、快速、灵敏、直观等特点。 相似文献
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将重组质粒ｐＵＣＬａＦｃ和ｐＵＣＦ４６Ｆｃ用ＥｃｏＲＩ和ＳａｌⅠ酶切,回收新城疫病毒融合蛋白裂解位点（Ｆｃ）基因,将此Ｆｃ片段用光敏生物素标记,制备出Ｆｃ探针。该探针能够与新城疫病毒（ＮＤＶ）的强毒株Ｆ４６Ｅ９、中毒株Ｍ株和弱毒株ＬａＳｏｔａＥ４株杂交,而不与对照的传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）、减蛋综合征（ＥＤＳ－７６）病毒杂交,说明探针是特异的。用ｐＵＣＬａＦｃ的Ｆｃ探针检测了各５份ＮＤＶ强中弱毒株的尿囊液,均为阳性。但强毒株和弱毒株的Ｆｃ探针都能与所用的强、中、弱毒株杂交,说明该Ｆｃ探针尚不能区分强、弱毒株。 相似文献
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将引进的猫细小病毒(FPV)、鼻气管炎病毒(FKV)和杯状病毒(FCV)三联弱毒疫苗经理化学方法处理,通过猫肾传代细胞系 FK_(81)细胞培养,分离到 FPV 弱毒株,分离毒株的血清学及理化学特性与猫细小病毒一致;在 FK_(81)细胞上出现的病变较规律,毒力稳定;与水貂病毒性肠炎病毒有密切的亲缘关系;对水貂、貉和猫具有良好的免疫原性与安全性,是较理想的弱毒株. 相似文献