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1.
建立了５株分泌抗ＥＤＳ－７６病毒的单克隆抗体细胞株，分别是Ｃ４＾１３，Ｃ１１＾１３，Ｃ１１＾１５，Ｅ７＾１５和Ｆ９＾１３，各株分泌抗体的能力均稳定，且者是抗ＥＤＳ－７６病毒的特异性抗体，不与其它多种禽病毒发生交叉反应。其中Ｃ４＾１３，Ｃ１１＾１５分泌的抗体是ＩｇＧ２ａ，Ｃ１１＾１３分泌的抗体是ＩｇＧ１。这５株细胞株所分泌的抗体都有较强的中和活性。 相似文献
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采用腹腔的接种１次脾内注射禽呼肠孤病毒（ＡＲＶ）蛋白免疫小鼠，经３次融合后，共筛选８株分泌抗禽呼肠孤病毒（单克隆抗体杂交瘤细胞株，这８株ＭｃＡｂ均可与ＡＲＶＳ１１３３株，ＦＤＯ株发生反应，而与ＩＢＤＶ，ＭＤＶ，ＥＤＳ－７６病毒不发生反应，经亚类鉴定，ＡＥ７，ＡＦ８，ＢＤ１，ＤＨ１０，ＥＥ５为ＩｇＧ１；ＡＤ６，ＣＧ４为ＩｇＣ２ａ，ＡＧ７为ＩｇＧ２ｂ。腹水效价在１０＾３～１０＾５之间。 相似文献
3.
抗鸡传染性支气管炎病毒单克隆抗体的制备及其特性的研究 总被引：2，自引：0，他引：2
本实验将鸡传染性支气管炎病毒（澳大利亚Ｔ株）进行纯化，制成抗原，应用杂交瘤技术建立了５株分泌抗鸡传染性支气管炎病毒的杂交瘤细胞株，其免疫球蛋白的亚类分别属于ＩｇＧ１、ＩｇＧ３、ＩｇＭ。杂交瘤细胞分泌抗体的能力稳定，长期传代对其抗体分泌能力没有影响。５株单克隆抗体与其它１２株鸡传染性支气管炎病毒标准株之间存在不同程度的交叉反应，但对鸡新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒、产蛋下降综合征病毒及禽流感病毒均无交叉反应。用此杂交瘤细胞制备腹水的ＥＬＩＳＡ效价为１０－６～１０－７，抗体对热的稳定性有一定的差别。抗体纯化后，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶电泳表明具有单克隆抗体的特征，经快速蛋白分析鉴定其纯度为８９．４９％。竞争ＥＬＩＳＡ法证明其中４株的单抗与抗原结合位点并不完全相同。采用单抗夹心ＥＬＩＳＡ法，对抗原的检测方法进行了初步探索。 相似文献
4.
抗鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体中和株的建立 总被引：6，自引：1，他引：5
将纯化的鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）组织毒免疫的ＢＡＬＢ／ｃ鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，用ＥＬＩＳＡ，病毒中和试验检测分泌抗体，获得了６株稳定分泌抗ＩＢＤＶ单隆抗体的杂交瘤细胞，命名为ＮＩＢ－１，ＮＩＢ－２，ＮＩＢ－３，ＮＩＢ－４，ＮＩＢ－５，ＮＩＢ－６；６株ＭＣＡｂ均具ＥＬＩＳＡ特性和免疫沉淀特性，亚类鉴定表明，前４株属于ＩｇＧ２ａ，后２株属于ＩｇＧ１。杂交瘤细胞冻存６个月后复苏，均 相似文献
5.
郑州地区９个鸭场鸭群中有７个鸭场为ＥＯＳ－７６ＨＩ抗体阳性，阳性率为６６～１００％．不同日龄和不同品种鸭群对感染无明显差异．被感染ＥＤＳ－７６病毒鸭群虽无可见临床症候，对产蛋率也无明显影响，但有一定流行病学意义．试验证明，使用ＥＤＳ－７６ＨＩ母原抗体４．８Ｌｏｇ２以下的鸭胚，用ＨＡ５×２１２的种毒接种，对其病毒增殖没有明显的影响，可用于制造ＥＤＳ－７６灭活疫苗．但鸭胚母原抗体超过４．８Ｌｏｇ２以上，每增加１个滴度，所培养的病毒ＨＡ价下降５×２１．７．不宜作为制苗鸭胚．鸭群ＥＤＳ－７６血清抗体和卵黄抗体检测比较结果表明，被检的血清和卵黄抗体平均效价基本相同，可用卵黄代替血清作为血清学检查的被检材料． 相似文献
6.
产蛋下降综合征病毒单克隆抗体的制备 总被引：2，自引：1，他引：1
以粗提的ＥＤＳ－７６病毒（ＮＥ－４株）作为抗原，按常规方法免疫ＢＡＬＢ／ｃ鼠，最后一次免疫后第３天取脾细胞与ＳＰ２／０细胞进行融合，采用间接ＥＬＩＳＡ和ＨＩ进行双重筛选，共检出２５个阳性孔，阳性率为１４．８８％。对其中的１１个阳性值较高的孔进行３次克隆，最后获得的１１株杂交瘤细胞，经长期体外培养和冻存后复苏仍能稳定地分泌抗体；ＥＬＩＳＡ阻断试验和与其他病毒的交叉试验证明，其分泌的抗体具有高度特异性。经鉴定，１１株ＭｃＡｂ均为ＩｇＧ，均无免疫沉淀特性，腹水和细胞培养上清的ＥＬＩＳＡ效价分别为１：３２００～１：５１２００和１：１２８～１：２０４８。杂交瘤细胞的染色体数目为８０～１１２，平均９２。尤为重要的是，１１株杂交瘤细胞中有４株分泌抗ＥＤＳ－７６病毒血凝素决定簇的中和单抗，细胞培养上清和腹水的ＨＩ价分别为２１０～２￣（１２）和２￣（２２）～２￣（２４），腹水的中和效价为１：１２８０～１：５１２０。 相似文献
7.
应用ＮＤＬａＳｏｔａＮ７９株和ＥＤＳ－７６Ｈ９３１株，分别接种鸡胚和鸭胚增殖病毒．血凝价分别达到≥１：１２８０和≥１：１００００时，收取病毒．经福尔马林灭活．按一定比例加入吐温８０、司本８０、硬脂酸铝和白油，高速搅拌均匀，制成ＮＤ和ＥＤＳ－７６二联疫苗。该苗具有良好的免疫力，其中两种病毒无相互干扰性，接种鸡群无不良反应。疫苗置４～８℃和１５～３０℃分别保存８和６个月不破乳．不分层，颜色无变化。用联苗接种６０００余只父母代种鸡，接种后２５天．ＮＤ和ＥＤＳ－７６抗体可先后达到高峰，接种后９个月，鸡群ＮＤ和ＥＤＳ－７６抗体平均效价仍分别保持在７．０和５．６ｌｏｇ２水平上。对１６～１８周龄产蛋母鸡（皮下注射１ｍｌ／只）应用２０万羽份的联苗证明，疫苗安全．效力确实，使用方便．效益显著。 相似文献
8.
通过ＳＤＳＰＡＧＥ、免疫印迹和相加ＥＬＩＳＡ分析了五株抗伪狂犬病病毒杂交瘤细胞系所分泌的单抗５Ｈ２、２Ｅ６、２Ｇ１１、３Ｄ１０和１Ｂ５（均为ＩｇＧ１）各自所识别的病毒多肽。结果证明：单抗５Ｈ２、２Ｅ６、２Ｇ１１和３Ｄ１０识别伪狂犬病病毒９７ＫＤ多肽，单抗１Ｂ５识别５４ＫＤ多肽。相加ＥＬＩＳＡ证实单抗５Ｈ２、２Ｅ６、２Ｇ１１和３Ｄ１０识别同一多肽的重叠表位或邻近表位。 相似文献
9.
郑州地区家鸭EDS—76血清学调查 总被引：3，自引：0，他引：3
郑州地区９个鸭场鸭群中有７个鸭场为ＥＤＳ－７６ＨＩ抗体阳性，阳性率为６６～１００％，不同日龄和不同品种鸭群对感染无明显差异。被感染ＥＤＳ－７６病毒鸭群虽无可见临床症候，对产蛋率也无明显影响，但有一定流行病学意义，试验证明，使用ＥＤＳ－７６ＨＩ母原抗体４．８Ｌｏｇ２以下的鸭胚，用ＨＡ５×２＾１２的种毒接种，对其病毒增殖没有明显的影响，可用于制造ＥＤＳ－７６灭活疫苗，但鸭胚母原抗体超过４．８Ｌｏｇ２以 相似文献
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间接血凝试验检测EDS—76病毒抗体的研究 总被引：1，自引：1，他引：0
本研究通过纯化ＥＤＳ－７６病毒，成功地建立了间接血凝试验用于检测ＥＤＳ－７６病毒抗体。结果表明，该方法具有很强的特异性，其敏感性比血凝抑制试验８倍，而且操作简便，快速，适合于疫苗免疫血清抗体的监测及流行病学的血清学诊断。 相似文献
12.
应用提取纯化的抗ＩＢＤＶ ＩｇＧ免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，其脾细胞与ＳＰ２／Ｏ细胞在ＰＥＧ作用下融合，应用ＥＬＩＳＡ法检测筛选，经有限稀释法克隆２次，获得了２株（２Ｂ６株、５Ｆ４株）分泌抗ＩＢＤＶ独特型抗体的杂交瘤细胞株，并能诱生Ｂａｌｂ／ｃ小鼠产生高效价的含抗ＩＢＤＶ独型抗体腹水。 相似文献
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产蛋下降综合征（EDS－76）病毒DNA酶切图谱分析 总被引：4，自引：0，他引：4
选用ＥｃｏＲＩ、ＰｓｔⅠ、ＰｖｕⅡ、ＨｉｎｄⅢ、ＢｇｌⅠ和ＢｇｌⅡ６种限制性内切酶，对国内４株ＥＤＳ－７６病毒鸡源分离株和国外标准株ＡＶ－１２７及１株鹅源腺病毒的ＤＮＡ进行酶切图谱的比较，结果发现４种鸡源分离株与ＡＶ－１２７株用上述６种酶切的片段数分别为４、８、１０、１０、６和７条。各酶切图形、片段大小亦十分相似，表明均为ＥＤＳ－７６病毒。ＥｃｏＲＩ－ＨｉｎｄⅢ和ＰｓｔＩ－ＥｃｏＲＩ的双酶切也得到同样结果。鹅源分离株的酶切片段数分别为６、７、９、７、４和１０条，酶切图形和片段大小均与ＡＶ－１２７有很大不同，表明该分离株可能为１株血清型相同而基因组不同的ＥＤＳ－７６鹅腺病毒。 相似文献
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抗猪流行性腹泻病毒单克隆抗体的研制及其特性鉴定 总被引：1，自引：1，他引：0
以新生乳猪增殖猪流行性腹泻病毒（ＰＥＤＶ）,通过蔗糖密度梯度离心将其纯化,获得较为完整的病毒颗粒。病毒ＥＬＩＳＡ效价为１∶３×１０５,蛋白含量为３．９６ｇ／Ｌ。将提纯的ＰＥＤＶ免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,取免疫鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞进行融合,融合率为９５．６％。用间接ＥＬＩＳＡ进行筛选,共检出３８个阳性孔,阳性率为２８．８％。对其中１５个阳性值较高的孔进行３次再克隆,阳性率达１００％,最后获得１５株稳定分泌特异性抗ＰＥＤＶ单抗（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞。ＥＬＩＳＡ阻断试验与交叉试验证明,其分泌的抗体具有高度特异性。腹水和细胞培养上清的ＥＬＩＳＡ效价分别为１∶１０３～１∶１０６和１∶１２８～１∶５１２。经鉴定,１５株ＭｃＡｂ的分子类型均为ＩｇＧ,均无免疫沉淀特性。杂交瘤细胞的染色体数目为９０～１１０,平均９５。尤为重要的是,这些杂交瘤细胞所分泌的抗体,有的对ＰＥＤＶ具有中和作用,能够阻断病毒对猪只的侵害作用。 相似文献
16.
在对ＥＤＳ７６－ＮＥ４株病毒进行血清学鉴定之后，于鸭胚（ＤＥ）、鸭胚成纤维细胞（ＤＥＦ）、鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）和鸡胚肝细胞（ＥＣＬ）上适应培养。结果表明，ＥＤＳ７６－ＮＥ４株病毒为鸡产蛋下降综合症病毒，该病毒能在ＤＥ、ＤＥＦ、ＣＥＬ上增殖，在ＤＥ上增殖，尿囊液的血凝价（ＨＡ）可达１：２０４８０－１：３２７６８０倍。 相似文献
17.
用同一鸭胚增殖鸡新疫Ｄ１０（ＮＤ－Ｄ１０）的减蛋综合征ＧＣ２（ＥＤＳ７６－ＧＣ２）两株病毒制成的异源二联灭活苗,与常规生产的新减二联灭活苗,分别免疫４月龄蛋鸡,均在免疫后第４周,产生的ＮＤ和ＥＤＳ７６ＨＩ抗体水平达到峰值,前者产生的ＨＩ抗体价分别为１０．６ｌｏｇ２和９．４ｌｏｇ２,后者为１０．１ｌｏｇ２和８．７ｌｏｇ２。免疫后第５２周,二者产生的ＮＤ和ＥＤＳ７６和ＥＤＳ７６ＨＩ抗体价均维持在７ｌｏ 相似文献
18.
对我省几个暴发产蛋下降综合征的鸡群进行了流行病学调查。用９日龄的鸭胚从病鸡的输卵管和子宫内分泌到两株ＥＤＳ－７６病毒。该病毒对鸡红细胞的凝集作用可被ＥＤＳ－７６的标准阳性血清所抑制。用分离毒接种１８９日龄产蛋母鸡６只，６／６发病。接毒后５天，可从血中测出ＨＩ抗体，１５天时达最高峰，２５天后开始渐渐下降。卵黄ＨＩ抗体与血液ＨＩ抗体呈正相关，只是卵黄ＨＩ抗体价比血液的高一个滴度。接毒鸡所产的蛋，ＥＤＳ 相似文献
19.
用赭曲霉素Ａ（ＯＡ）－ＢＳＡ合成抗原免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，取免疫鼠脾细胞与ｓｐ２／０细胞融合，通过克隆和ＥＬＩＳＡ法筛选，建立三株泌抗ＯＡ单克隆抗体杂交瘤细胞株（３Ｃ１２，１Ｄ１２和２Ｇ７）。用间接ＥＬＩＳＡ法测定，细胞上清液抗体效价为１２８＾×（３Ｃ１２）和６４＾×（１Ｄ１２和２Ｇ７）腹水抗体效价为１０＾－７（３Ｃ１２，１Ｄ１２）和１０＾－６（２Ｇ７）。三株单抗（ＭｃＡｂ）均属ＩｇＧ类，分泌抗体 相似文献
20.
产蛋下降综合征（EDS－76）病毒DNA探针的制备及应用研究 总被引：2，自引：0，他引：2
用纯化的产蛋下降综合征（ＥＤＳ－７６）病毒（Ｈ９１毒株）悬液提取的核酸，经琼脂糖凝胶电泳只出现１条分子量较大、背景清晰的核酸带。用ＢａｍＨＩ酶消化产生４个片段，大小分别为１７ｋｂ、１０ｋｂ、４．０ｋｂ和２．０ｋｂ。将其中的２．０ｋｂ片段克隆进ｐＵＣ１８ＤＮＡ载体中，重组质粒ＤＮＡ用ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记作为ＤＮＡ探针，在ｄｏｔｂｌｏｔ中该探针不与鹅胚尿囊液核酸抽提物、马立克氏病病毒（ＭＤＶ）ＤＮＡ、鸡传染性贫血病毒（ＣＡＶ）ＤＮＡ、ＳＰＦ鸡基因组ＤＮＡ等核酸反应，只与３株ＥＤＳ病毒（ＥＤＳ标准毒株ＡＶ－１２７、ＥＤＳＨ９１毒株和从健康鹅体中分离的ＥＤＳＹ８１毒株）ＤＮＡ呈阳性反应。人工感染产蛋母鸡和雏鸡后２４ｈ即可用该探针从泄殖腔棉拭子样品中检测出ＥＤＳ病毒ＤＮＡ，在感染后３５ｈ仍能从部分感染鸡样品中检出。对部分探针检测阳性鸡的泄殖腔棉拭子样品用ＳＰＦ鸡胚分离病毒，并用ＨＡ和ＨＩ试验检测分离病毒的特异性；在感染过程中，同时检测了血清中ＨＩ抗体的消长情况。结果表明，人工感染鸡排毒至少可以维持２个月左右，而且血清中ＨＩ抗体即使很高，也不能阻止感染鸡的排毒。 相似文献