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为探索SPF鸡胚作为绵羊肺炎支原体实验室感染模型的可行性,本试验用不同浓度绵羊肺炎支原体（108、109、1010 ccu/mL）经由卵黄囊和尿囊腔两个部位接种7日龄SPF鸡胚,通过统计鸡胚死亡情况和不同鸡胚组织样品中绵羊肺炎支原体检测阳性率（PCR检测和支原体分离鉴定）,确定绵羊肺炎支原体鸡胚感染方式、感染剂量和最佳分离部位,再用3株不同来源的绵羊肺炎支原体分离株感染鸡胚,观察其对鸡胚的致病力。结果表明,绵羊肺炎支原体感染鸡胚最佳接种途径为卵黄囊接种,感染剂量为109 ccu/mL、0.2 mL/只,最佳分离部位为卵黄液。3株支原体均能感染和致死鸡胚,并均能从卵黄液中分离到绵羊肺炎支原体,但对鸡胚的致病性存在一定差异：FL3株致鸡胚死亡率为45%,略高于MoGH3-3株（40%）,二者均高于A3株（25%）,但差异均不显著（P>0.05）;FL3株鸡胚检测阳率为100%,高于MoGH3-3株（85%）及A3株（90%）,但差异也不显著（P>0.05）。本试验初步确定了绵羊肺炎支原体可感染和致死SPF鸡胚,不同分离株对SPF鸡胚致病力有差异,表明SPF鸡胚可作为下一步建立绵羊肺炎支原体实验室感染模型的候选,为绵羊肺炎支原体致病性研究和疫苗研制奠定基础。 相似文献
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【目的】 探究大肠杆菌噬菌体BP16对O2血清型禽致病性大肠杆菌感染引起的鸡大肠杆菌病的防治效果, 以及噬菌体BP16的最佳治疗剂量。【方法】 将O2血清型禽致病性大肠杆菌新鲜培养物稀释成5×1010、5×109、5×108、5×107和5×106 CFU/mL 5个浓度梯度, 以测定禽致病性大肠杆菌的半数致死量(LD50), 确定其感染剂量; 选取常用的对革兰阴性菌有抑菌或杀菌作用的药敏纸片进行药敏试验, 筛选出阳性对照药物; 经无菌试验和安全性试验确定噬菌体裂解液的无菌性及安全性, 用于后续试验。将80只雏鸡随机分为5个试验组与3个对照组, 试验组在雏鸡攻毒前后不同时间腹腔注射大肠杆菌噬菌体BP16, 3个对照组分别腹腔注射氟苯尼考、大肠杆菌菌液、生理盐水, 其余条件一致, 连续饲养7 d, 记录雏鸡的死亡率, 评价大肠杆菌噬菌体BP16对大肠杆菌人工感染试验鸡的防治效果。【结果】 O2血清型大肠杆菌的LD50为1.5×108 CFU/mL, 筛选出氟苯尼考作为阳性对照药物, 噬菌体裂解液中无菌, 噬菌体悬液对雏鸡安全, 可用于后续防治试验。雏鸡感染大肠杆菌前6 h使用噬菌体能有效预防大肠杆菌病, 在感染同时至感染后6 h内使用噬菌体, 能有效治疗大肠杆菌病, 且噬菌体治疗效果优于氟苯尼考; 当大肠杆菌攻毒剂量为1.5×108 CFU时, 噬菌体剂量为1.5×109 PFU时治疗效果为最佳。【结论】 大肠杆菌噬菌体BP16对大肠杆菌病具有防治作用, 本研究为进一步应用噬菌体防治大肠杆菌病及开发大肠杆菌噬菌体制剂提供了科学依据。 相似文献
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试验旨在研究大肠杆菌（E.coli）对奶牛子宫内膜上皮细胞（bovine endometrial epithelial cells,BEECs）的体外炎性损伤,探究大肠杆菌引发炎性反应的最佳浓度、作用时间及机制。首先,用不同浓度的大肠杆菌（5×104、5×105、1×106、2.5×106、5×106 CFU/mL）诱导刺激细胞3、6和9 h,通过倒置显微镜观察细胞形态、CCK-8法测D450 nm值,检测大肠杆菌对细胞活性的影响;其次,用不同浓度的大肠杆菌（5×104、5×105 CFU/mL）处理细胞3、6和9 h,用ELISA方法检测细胞上清液中白介素-1β（IL-1β）、IL-6、IL-8和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的分泌量;最后,用不同浓度的大肠杆菌（5×104、5×105 CFU/mL）处理细胞6和9 h,用Western blotting检测核因子κB抑制蛋白α（IκBα）和p65蛋白的磷酸化水平。结果显示,与对照组相比,大肠杆菌感染细胞9 h后,1×106、2.5×106和5×106 CFU/mL大肠杆菌组细胞活性均极显著降低（P<0.01）,5×105 CFU/mL大肠杆菌组显著降低（P<0.05）;大肠杆菌感染细胞9 h后,5×105 CFU/mL大肠杆菌组IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α极显著升高（P<0.01）;大肠杆菌感染细胞6 h后,5×105 CFU/mL大肠杆菌组IκBα、p65蛋白磷酸化水平和IL-6均极显著升高（P<0.01）,5×104 CFU/mL大肠杆菌组IκBα和p65蛋白磷酸化水平显著升高（P<0.05）。结果表明,大肠杆菌可以刺激奶牛子宫内膜上皮细胞产生炎性反应,且当细胞与5×105 CFU/mL大肠杆菌作用6 h或与5×104 CFU/mL大肠杆菌作用9 h为最佳。 相似文献
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旨在培育鸭甲型肝炎病毒血清3型(DHAV-3)适应鸡胚毒株并对其特性进行研究。利用鸭胚从临床病料中分离得到的DHAV-3 LC强毒株经卵黄囊接种鸡胚传代、纯化获得适应鸡胚毒株,并对毒株的致病性、毒力稳定性、免疫原性和基因组特征进行测定。结果显示,利用鸭胚接种成功从病料中分离鉴定DHAV-3 LC强毒株,对鸭胚和雏鸭的半数致死量分别为10-6.20/0.2 mL和10-4.25/0.2 mL。经卵黄囊接种鸡胚69代,获得适应鸡胚毒株DHAV-3 CA。CA株的F4、F16、F21、F31、F41和F51代病毒液的ELD50分别为10-6.44/0.3 mL,10-6.60/0.3 mL,10-7.44/0.3 mL,10-7.80/0.3 mL,10-7.43/0.3 mL和10-7.25/0.3 mL;各代病毒对1日龄雏鸭不致病,但在体内连续传代出现接种雏鸭死亡。F21代病毒制备的油包水灭活... 相似文献
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鸡白痢沙门氏菌的分离与鉴定 总被引：4，自引：0，他引：4
在禽类 ,沙门氏菌可引起鸡白痢、鸡伤寒和副伤寒。其中鸡白痢沙门氏菌感染往往是终生带菌的 ,感染母鸡所产的蛋 ,高达 1/ 3带菌。带菌蛋的孵化率低 ,孵出的雏鸡的成活率也低[1,2 ] 。所以 ,鸡白痢所造成的经济损失是巨大的。2 0 0 2年 8月南宁市某养鸡场有一群 8- 11日龄的雏鸡发病 ,发病率为 10 % ,死亡率为1%。经实验室的细菌分离和一系列的生化试验 ,确诊该群雏鸡感染了鸡白痢沙门氏菌。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 培养基血液琼脂平板、麦康凯琼脂平板、伊红美兰平板、半固体培养基等常用培养基 ,由本室制备和保存。1.1.2 生化反应管… 相似文献
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董文秀 《畜牧兽医科技信息》2016,(4):103-104
正鸡白痢是由鸡白痢沙门氏菌引起各种年龄鸡常发的传染病,病鸡和带菌鸡是本病的主要传染源。本病可通过消化道水平感染,也可通过种蛋垂直传播。本病主要侵害雏鸡和雏火鸡,雏鸡多于12~15日龄时发病死亡。临床可分为急性败血型、关节炎型和神经型。1流行在受感染的母鸡,病原菌定位在卵巢、卵泡和输卵管内,使蛋在形成蛋壳之前受到病原菌感染。这样的蛋在孵化时,一部分鸡胚死于胚期,出壳的雏鸡大多在12~15日龄时发 相似文献
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为鉴定云南某地方乌鸡场疑似沙门氏菌感染的病原菌并研究其生物学特性，通过细菌分离纯化、染色镜检、生化试验、血清分型、PCR检测、16S rRNA基因测序分析进行鉴定，并进行了药敏试验、耐药基因、毒力基因检测，以及致病性试验和动物回归试验。结果显示：分离株经纯化后在SS培养基上为圆形，半透明，中心黑色或全黑色光滑菌落；革兰氏染色镜检可见无芽孢、无荚膜的阴性短杆菌；综合沙门氏菌属血清凝集试验、生化试验、PCR检测、16S rRNA基因测序及遗传进化分析结果确定该菌株为肠炎沙门氏菌，命名为SE001株。动物试验表明：该菌株对试验小鼠致病性强，按照0.2 mL/只剂量接种小鼠(菌液浓度1×104 CFU/mL),24 h内死亡率为50%;对不同品种雏鸡致病性存在差异，按照0.2 mL/只剂量(菌液浓度1×108 CFU/mL)接种白羽蛋鸡雏鸡，7 d内全部死亡；而接种茶花鸡雏鸡不会引起死亡，但剖检可见心脏明显病变。药敏试验结果表明：该菌株对阿莫西林、头孢氨苄、庆大霉素、阿奇霉素、恩诺沙星等20种药物敏感；对红霉素、克林霉素中度敏感；对土霉素、四环素、强... 相似文献
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为评价植物乳杆菌BLCC2-0410添加对鸡白痢沙门菌感染的防治效果，试验选用120只1日龄海兰褐雏鸡随机分成3组，每组4个重复，每个重复10只鸡。1 ~ 10日龄，给予益生菌组饮用益生菌水溶液，3日龄时，感染组、益生菌组每只鸡灌服0.5 mL鸡白痢沙门菌菌液，对照组灌服等量的生理盐水。全程试验期14 d，统计雏鸡死亡率，测定脏器沙门菌载菌量、肠道乳酸菌数量、血液生化指标、免疫球蛋白和炎症因子。结果表明：（1）饲喂植物乳杆菌BLCC2-0410可降低雏鸡相对死亡率，较感染组降低60.6%|（2）益生菌组肠道乳酸菌数量较空白对照组和感染组分别提高3.32倍和11.12倍|（3）益生菌组血清中IgG含量分别较感染组提高6.69%，IgM和IgA降低14.63%和4.42%|（4）益生菌组雏鸡血清中IFN-γ和TNF-α较感染组提高3.94%和3.77%，IL-1β降低11.29%|（5）生化检验结果显示饲喂植物乳杆菌BLCC2-0410可降低沙门菌对雏鸡肝脏的损伤。综上，植物乳杆菌BLCC2-0410对鸡白痢沙门氏菌感染有较好的防治作用。
[关键词] 植物乳杆菌|鸡白痢沙门菌|载菌量|免疫球蛋白|炎症因子|血液指标 相似文献
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为了解云南某鸽场的肉鸽发病原因，拟定治疗方案，试验无菌采集病鸽肝脏组织，划线于麦康凯培养基进行细菌分离培养、生化鉴定、血清型鉴定、16S rDNA同源性分析、动物回归试验、药敏试验及毒力分析。结果显示，在麦康凯培养基上可见圆形、光滑、无色半透明的菌落，初步鉴定为革兰氏阴性菌；经沙门菌属血清凝集试验和16S rDNA同源性分析，鉴定该菌为阿哥纳沙门菌（Salmonella Agona），其抗原结构式为：O抗原1（+）、4（+）、12（+），H抗原fg（+）、s（+），将其命名为SSYN036株。细菌生长曲线测定表明，该菌株生长速度较快；动物试验表明，该菌株对试验小鼠致病强，接种浓度为5×108、5×107、5×106和5×105 CFU/mL的小鼠在7 d内死亡率分别为100%、100%、60%和30%；病理切片显示产生明显的多灶性坏死炎症及炎性细胞浸润；药敏试验表明，该菌株对青霉素、苯唑西林、链霉素、强力霉素和四环素存在耐药，对利福平中度敏感，对阿莫西林、氨苄西林、庆大霉素、妥布霉素和头孢他啶等11种抗菌药物敏感；菌株毒力基因检测表明，菌株含有spvB、spiA、pagC、msgA、invA、sipB、prgH、spaN、tolC、iroN、sitC、lpfC、sifA、sopB和pefA共15种毒力基因。本研究为了解鸽源沙门菌的致病性和菌株生物学特性提供了新的信息，具有重要的公共卫生学意义。 相似文献
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本试验旨在研究携带铜绿假单胞菌保护性抗原基因F190-342（F1）和I21-83（I2）的重组鼠伤寒沙门菌株ΔasdLH430（pYA-F1I2）在水貂上的免疫原性。将9只7月龄健康水貂随机分为3组，每组3只：对照组，皮下注射无菌生理盐水；LH430菌株免疫组，皮下注射菌株2.0×108 CFU/只；ΔasdLH430（pYA-F1I2）菌株免疫组，皮下注射菌株2.0×108 CFU/只。首免后第15天各组加强免疫一次。分别于第1次免疫后第15、30及45天断指采集水貂血液，测定血清中IgG水平。在第1次免疫后第45天分离外周血单核细胞，Eli-Spot检测F1I2特异性抗体分泌细胞数量和沙门菌特异性抗体分泌细胞数量。同时，取脾脏分离淋巴细胞，MTT法检测F1I2和沙门菌特异性的淋巴细胞增殖情况。结果表明，ΔasdLH430（pYA-F1I2）组血清中F1I2特异性IgG抗体和沙门菌特异性IgG抗体滴度在取样点逐渐升高，同时在第45天达到最大值；免疫后第45天，ΔasdLH430（pYA-F1I2）组F1I2特异性IgG分泌细胞的数量极显著高于对照组及LH430组（P < 0.01），沙门菌特异性抗体分泌细胞的数量极显著高于对照组（P < 0.01），与LH430组差异不显著（P > 0.05）。同时，F1I2抗原和沙门菌抗原刺激组极显著增强了水貂脾脏淋巴细胞的增殖（P < 0.01）。本研究可为开发防控水貂出血性肺炎和沙门菌感染的实用新型双价基因工程疫苗提供理论依据。 相似文献
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2013年高温季节在广东广州2个养殖场患病宝石鲈(Scortum barcoo)病灶处共分离到2株细菌Py1和Py2。宝石鲈攻毒试验结果显示2株分离菌均具有较强毒力(半致死量分别为7.42×106和1.72×106 CFU/mL),且都对罗非鱼具有高度感染性(半致死量分别为3.39×106和8.66×105 CFU/mL)。经ATB生化鉴定及cfb基因序列分析,确定分离株为无乳链球菌(Streptococcus agalactiae),并对其进行了相关药敏试验检测,以期为该病的预防提供参考。 相似文献
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本试验旨在研究乳酸菌制剂对肉仔鸡鼠伤寒沙门菌（ST）感染的控制效果。选择无ST感染的1日龄AA公雏480只，随机分为4组，每组6个重复，每个重复20只。其中未感染组饲喂基础日粮；感染组饲喂基础日粮且沙门菌感染；抗生素组在基础日粮中添加40 mg/kg盐酸恩诺沙星；乳酸菌组在基础日粮中添加3×109 CFU/kg乳酸菌制剂（植物乳杆菌、噬酸乳杆菌和屎肠球菌等比例混合）。5日龄时，除未感染组外，其他各组每只鸡灌服1 mL（105 CFU）ST液。7、14和21日龄时，每个重复随机选2只鸡，采血、屠宰、取样。结果显示，ST感染显著降低了1~21日龄肉仔鸡的平均日采食量和平均日增重，日粮中添加乳酸菌制剂显著提高了平均日采食量和平均日增重（P<0.05），且达到了未感染组和抗生素组水平。基于器官指数和组织载菌量，乳酸菌制剂对肉仔鸡ST感染表现出显著的控制效果（P<0.05）。14、21日龄时，乳酸菌组和抗生素组白细胞介素-10（IL-10）含量均显著高于未感染组（P<0.05）；21日龄时，乳酸菌组肉仔鸡血清IL-10含量显著低于感染组，免疫球蛋白G（IgG）和分泌型免疫球蛋白A（SIgA）含量显著升高（P<0.05）；乳酸菌组肉仔鸡血清IL-10和SIgA含量与抗生素组间差异不显著（P>0.05），而IgG水平显著低于抗生素组（P<0.05）。综上，日粮中添加乳酸菌制剂能显著抑制肉仔鸡肠道ST的数量及组织感染，能显著缓解炎症反应、提高免疫水平和生产性能。 相似文献
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本试验旨在建立一种乳品中大肠杆菌PMA-qPCR活菌检测方法.优化qPCR检测方法,探究菌浓度为1×108 CFU/mL的大肠杆菌活菌悬液、热致死菌悬液细胞数来确定不同的PMA剂量、暗孵育时间、曝光时间对死菌抑制效果的影响,确定最佳PMA处理方案.结果表明,qPCR检测可特异性扩增大肠杆菌,1×108 CFU/mL的大肠杆菌经90 ℃水浴30 s全部致死后,采用10 μg/mL的 PMA暗孵育15 min后冰上曝光10 min为最佳处理方案,这种处理方案可最大程度抑制死细胞信号,而对活细胞几乎没有影响,样品中微生物初始浓度不低于1×108 CFU/mL时较稳定,得到标准曲线回归方程y=-3.356x+47.413,R2=0.9989,最低检测限为103 CFU/mL,加标样本检测结果与实际相符.该方法为利用PMA-qPCR检测食品中的活大肠杆菌杆菌奠定了基础. 相似文献
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GAI Dong-xue REN Hong-lin LU Shi-ying HU Pan MENG Xian-mei LIU Xi SONG De-gang JIN Wen ZHANG Song CHANG Jiang LIU Yan-yan LIU Zeng-shan 《中国畜牧兽医》2016,43(2):493-498
In order to detect viable E.coli in milk,a new PMA-qPCR method was established.The influences of different PMA concentration,dark incubation time,exposure time on dead bacteria inhibition effect were determined by detection of the cell numbers of viable and heat-killed E.coli suspensions at concentration of 1×108 CFU/mL through fluorescence quantitative PCR (qPCR) method.The results showed that qPCR assay could specifically detect E.coli,and the viable E.coli must be exposed to 90 ℃ for 30 s in water bath to be lethal.The best treatment was 10 μg/mL PMA with 15 min of dark incubation time and 10 min of exposure time.This treatment could inhibit dead cell signals to a largest extend,while had little impact on aviable cells.The stability of PMA-qPCR assay was kept while the concentration of bacteria was more than 1×108 CFU/mL.The regression equation of standard curve was y=-3.356x+47.413,R2=0.9989,the lowest detection limit was 103 CFU/mL.The result of adding assay was agreed with the actual situation.This study laid a foundation for using of PMA-qPCR to detect the viable E.coli in food. 相似文献
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为使重组乳酸乳球菌在发酵生产后便于存储、运输,本试验利用可表达牛乳铁蛋白肽的重组乳酸乳球菌pAMJ399-LFBA/MG1363制备微胶囊,优化微胶囊的制备工艺条件,并对胶囊化后重组菌的相关生物学特性进行检测。通过对不同壁材及壁材浓度进行控制单一变量试验,测定其包埋量,以筛选出最佳壁材及浓度。通过模拟胃肠液环境试验,比较微胶囊释放率,并对不同壁材进行保存期试验,比较最低活菌数,利用响应面试验确定最佳工艺条件,使用最佳工艺条件制备微胶囊后进行验证。优化后的结果为:选取海藻酸钠和壳聚糖作为壁材,在海藻酸钠浓度为2.49%,壳聚糖浓度为0.96%,CaCl2浓度为6.67%,凝固时间为57 min的条件下微胶囊效果最佳,预测包埋量为7.85×108 CFU/g。微胶囊在模拟胃液中稳定存在,在模拟肠液中可完全破裂,能释放出微胶囊内95%以上的乳酸乳球菌。海藻酸钠-壳聚糖微胶囊在4 ℃保存3周后,微胶囊中活菌数为1.41×107 CFU/g。对微胶囊的最佳工艺条件验证结果为微胶囊的包埋量为8.08×108 CFU/g;常温保存2周后,活菌数仍可达到3.89×106 CFU/g;ELISA方法检测微胶囊内重组乳酸乳球菌可见表达的牛乳铁蛋白肽,抑菌试验可见微胶囊内重组乳酸乳球菌表达的牛乳铁蛋白肽对沙门氏菌和金黄色葡萄球菌仍具有明显的抑制作用。以上结果表明,表达牛乳铁蛋白肽的重组乳酸乳球菌可制备成为低成本、保存期长、耐胃液的微胶囊,为重组乳酸菌在生产中的进一步应用奠定基础。 相似文献
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试验旨在考察乳酸菌发酵物与中药(TCM)配伍后对预防鸡大肠杆菌病中药药效的影响。试验采用对鸡大肠杆菌病有效的中药组方与乳酸菌发酵物配伍组成中药乳酸菌复合物(CTCML)。以胸肌注射0.2 mL (9×108 CFU/mL)大肠杆菌培养液的方法建立雏鸡大肠杆菌病人工感染模型。将144只8日龄雏鸡平均分为9个组,其中3个组为CTCML高、中、低剂量组,在雏鸡感染前按0.6、0.4、0.2 g/d剂量将药物颗粒混入日粮中给予,在雏鸡感染后按0.3、0.2、0.1 mL/d剂量将药物提取液混入饮水中给予,同时设置3个与CTCML剂量相同的TCM高、中、低剂量组及药物(盐酸环丙沙星)对照组、感染对照组和健康对照组。结果显示,CTCML高、中、低剂量组雏鸡存活率分别为75.00%、75.00%和93.75%,TCM高、中、低剂量组雏鸡存活率分别为68.75%、68.75%和75.00%,药物对照组为75.00%,感染对照组为56.25%,健康对照组为100.00%。CTCML低剂量组与CTCML高、中剂量组及TCM高、中、低剂量组、药物对照组、感染对照组相比均差异显著(P<0.05),CTCML高、中剂量组及TCM高、中、低剂量组、药物对照组彼此间差异均不显著(P>0.05)。所有感染组中,CTCML低剂量组对雏鸡增重影响最小,增重率较健康对照组低29.93%;其次是CTCML中剂量组,增重率较健康对照组低36.95%;其余各感染组较健康对照组降低42.49%~51.07%。结果表明,中药对人工感染大肠杆菌的雏鸡具有保护作用,乳酸菌对中药具有明显的协同作用。 相似文献