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1.
魏良民 《新疆农业大学学报》1996,(1)
以海岛棉无菌苗下胚轴为外植体诱导产生愈伤组织，挑选胚性愈伤组织建立悬浮培养胚性细胞系。用含有纤维素酶、半纤维素酶和离析酶的混合酶液从新海３号、新海７号和２８２这３个品种的胚性细胞悬浮培养物中游离出原生质体。原生质体用液体浅层法培养仅见再生细胞的１次分裂；用含有低融点琼脂糖的ＫＭ８Ｐ培养基进行琼脂糖珠悬浮法培养，原生质体再生细胞经几次分裂后产生再生细胞团 相似文献
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[目的]优化橡胶树热研8-79原生质体分离和培养条件,建立橡胶树原生质体培养植株高效再生体系,为橡胶树体细胞杂交育种奠定基础.[方法]以橡胶树热研8-79花药愈伤组织建立的胚性细胞悬浮系为试验材料,设计不同酶组合、酶解时间和悬浮细胞继代时间进行原生质体分离,采用不同培养基、看护细胞浓度和接种密度进行原生质体培养,对原生质体分裂发育的小愈伤组织进行体细胞胚诱导及植株再生培养,统计原生质体的产量、分裂频率、体胚数及体胚萌发率.[结果]酶组合为纤维素酶1.50%+果胶酶0.15%+离析酶0.50%、酶解时间为12h时,继代培养第5d的胚性悬浮细胞达最高产量(3.6 ×107个/mL PCV);用酶解细胞和看护细胞继代培养基分别作为原生质体液体培养基和看护培养基,比使用KPR培养基更有利于原生质体的分裂,当看护细胞浓度为5%、接种密度为5×105个/mL时原生质体的分裂频率最高,达54%.原生质体持续分裂形成肉眼可见的小愈伤组织增殖后经体胚发生途径发育成完整的小植株.[结论]通过优化橡胶树热研8-79胚性悬浮细胞原生质体分离的酶组合、酶解时间、继代培养时间及看护培养过程中培养基组成、看护细胞浓度和接种密度等影响因素,可以建立橡胶树原生质体培养植株高效再生体系. 相似文献
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橡胶树热研8—79原生质体培养再生植株 总被引：1，自引：0，他引：1
【目的】优化橡胶树热研8-79原生质体分离和培养条件,建立橡胶树原生质体培养植株高效再生体系,为橡胶树体细胞杂交育种奠定基础。【方法】以橡胶树热研8-79花药愈伤组织建立的胚性细胞悬浮系为试验材料,设计不同酶组合、酶解时间和悬浮细胞继代时间进行原生质体分离,采用不同培养基、看护细胞浓度和接种密度进行原生质体培养,对原生质体分裂发育的小愈伤组织进行体细胞胚诱导及植株再生培养,统计原生质体的产量、分裂频率、体胚数及体胚萌发率。【结果】酶组合为纤维素酶1.50%＋果胶酶0.15%＋离析酶0.50%、酶解时间为12 h时,继代培养第5 d的胚性悬浮细胞达最高产量（3.6 ×107个/mL PCV）;用酶解细胞和看护细胞继代培养基分别作为原生质体液体培养基和看护培养基,比使用KPR培养基更有利于原生质体的分裂,当看护细胞浓度为5%、接种密度为5 ×105个/mL时原生质体的分裂频率最高,达54%。原生质体持续分裂形成肉眼可见的小愈伤组织增殖后经体胚发生途径发育成完整的小植株。【结论】通过优化橡胶树热研8-79胚性悬浮细胞原生质体分离的酶组合、酶解时间、继代培养时间及看护培养过程中培养基组成、看护细胞浓度和接种密度等影响因素,可以建立橡胶树原生质体培养植株高效再生体系。 相似文献
4.
包心菜无菌苗子叶及叶片原生质体高频分裂和高频植株再生 总被引：1，自引：0，他引：1
以包心菜子叶和叶片原生质体为材料，经不同液体培养基（Ｂｐ１，Ｂｐ２，Ｂ１）浅层培养，再生细胞高频分裂并形成愈伤组织，愈伤组织经扩增后转移至分化培养基上诱导植株分化，从这两种原生质体获得了再生植株。在原生持培养过程中，原生质体及细胞团的褐化程度与培养基中的有要分的多少有关。原生质体的分化频率与培养基中植物激素种类关系基大。在植株分化时，谷氨酰胺和腺嘌呤对植株分化有很促进作用。另外，原生质体的来源... 相似文献
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采用继代培养4～5 d 后的胡萝卜悬浮细胞,经酶解获得大量原生质体,并在不同的培养基上经培养,细胞进行分裂,形成愈伤组织,获得了完整的再生植株。探讨了影响原生质体培养及植株再生的多种因素,实验表明:①原生质体的培养密度在5×10~4/mL～5×10~5/mL 范围内均可,以2.5×10~5/mL 为佳。②对于细胞的分裂、细胞团的生长以及愈伤组织的形成,以改良的 B_5培养基最好,N_5培养基其次,MS 较差。③适当降低原生质体培养基中的甘露醇浓度,有利于细胞的分裂和生长。④在本实验所涉及的培养方法中,以液体浅层培养为优。⑤诱导愈伤组织分化,以 1mg/L KT 为佳。⑥不同培养基对愈伤组织的生长速度和分化频率产生一定影响,以 MS 培养基提高分化频率效果较好。 相似文献
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影响植物原生质体分裂的生理生化因素 总被引：3，自引：2，他引：1
以烟草试管苗幼叶,美味猕猴桃、毛花猕猴桃子叶愈伤组织和玉米幼叶为材料,进行了原生质体培养和一些生理生化指标的测定,结果表明,美味猕猴桃及毛花猕猴桃子叶愈伤组织原生质体在培养２０ｄ后,原生质体再生细胞分裂率为１７．８％和２０．５％,前者可继续分裂形成小细胞团,而后者仅分裂１～２次。对照材料烟草叶肉原生质体培养２周后,再生细胞分裂率高达７０．１％。玉米幼叶原生质体极难分裂。烟草叶中ＰＯＸ、ＳＯＤ活性以及可溶性蛋白质和氨基酸含量均高于其它３种材料。因此较低水平的ＰＯＸ、ＳＯＤ活性以及可溶性蛋白质和氨基酸含量是两种猕猴桃子叶愈伤组织原生质体分裂率低和玉米幼叶难以培养成功的影响因子。 相似文献
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以包心菜子叶和叶片原生质体为材料。经不同液体培养基(Bp1,Bp2,B1)浅层培养,再生细胞高频分裂并形成愈伤组织。愈伤组织经扩增后转移到分化培养基上诱导植株分化,从这两种原生质体中获得了再生植株。在原生质体培养过程中,原生质体及细胞团的褐化程度与培养基中的有机成分的多少有关。原生质体的分化频率与培养基中植物激素种类关系甚大。在植株分化时,谷氨酰胺和腺嘌呤对植株分化有很大促进作用。另外,原生质体的来源及原生质体培养基对原生质体植株分化能力均有不同的影响。 相似文献
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成雄鹰 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》1991,(1)
在改良MS培养基上从5个大豆品种成熟种子来源的幼苗未展开叶片上诱导出愈伤组织,利用2个月月龄的这些愈伤组织在摇床上建立了细胞悬浮培养系,细胞悬浮培养系每1至2周转培1次,并用于原生质体分离,转培后3到5天的细胞经酶解后原生质体的产量最高,纯化后的原生质体用3种方法进行培养,即液体培养法、琼脂包埋法和琼脂底层法,在琼脂底层法中,培养皿底层先浇上无甘露醇的琼脂培养基,而原生质体则悬浮在2到4毫升含0.45 mol甘露醇的培养基中,3种方法以琼脂底层法最佳,原生质体在培养后2到3天内能见到第1次细胞分裂,在适当的条件下1周内高达80％的原生质体发生分裂,置板频率一般在40％到60％之间,5个供试品种中4个的原生质体愈伤组织在固体和液体培养中出现体细胞胚胎发生,在液体培养条件下得到了大量子叶和胚根发育良好的体细胞胚,但由于这些胚未进一步萌发,故未能得到完整的再生植株。 相似文献
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本实验以菜豆无菌苗叶片为材料,成功地游离了原生质体,并在改良 BSB 液体培养基上获得了大量具有连续分裂能力的愈伤组织。本实验发现,在原生质体培养初期,更换新鲜培养液并不是必须的;但在培养15天左右,形成了细胞团时,更换培养液却非常必要。这样可增强细胞分裂能力,防止细胞贴壁死亡。在培养液组成中,氮源的变化对原生质体分裂有重要影响。较大量的无机氮对原生质体分裂有 相似文献
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无臌胀病苜蓿品种的育种计划的可能突破口,是利用生物技术把单宁基因导入到紫花苜蓿(Medicago sativa L.)中去。本文首次报道了紫花苜蓿与红豆草(Onobrychis viciifolia Scop.)原生质体融合的可能性和条件,进而将红豆草的单宁基因导入到苜蓿中去。本实验结果证明苜蓿与红豆草的原生质体融合是可能的,通过基因型选择,选择同步分裂的苜蓿和红豆草细胞系,从其悬浮培养细胞系中分离原生质体,将两者混合悬浮在0.1mMCaCl_2 0.6M 甘露醇溶液中(pH5.6),原生质体总密度为3.6×10~5/ml(苜蓿占2.3×10~5/ml,红豆草占1.3×10~5/ml),在1.00～1.25 KV/cm 电场强度下,脉冲次数1～3次,其异核融合细胞频率可提高到26.7～40.9%,并且其异核体仍能较好地分裂,可以分裂2～3次,个别分裂4次,形成小细胞团,但植板率很低,未能持续分裂形成愈伤组织。建议为了提高异核体的植板率,电场强度应低于1.25KV/cm,甚至低于1.00KV/cm,脉冲次数1～2次为宜,以减少电场对细胞的损害。同时提高原生质体培养密度,改良培养条件和方法。如何保证异核体持续分裂和高的植板率是今后研究的关键问题。 相似文献
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普通野生稻胚性细胞悬浮系的建立及原生质体再生植株 总被引：3，自引：0，他引：3
广西普通野生稻(Oryza rufipogon)2个品种的成熟种子经54±1℃温度处理5d打破休眠后,诱导产生出愈伤组织。挑选胚性愈伤组织置于液体培养基中振荡培养。经6个月继代培养,建立起胚性细胞悬浮系。其中1个品种(No.40)的悬浮细胞经酶解游离获得大量原生质体,用琼脂糖包埋培养,2周内分裂频率达21.4％。形成的小愈伤组织经增殖后在分化培养基上再生出绿色小植株。 相似文献
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山梨醇对枇杷原生质体分离和培养的效应 总被引：1，自引：0，他引：1
以山梨醇作为游离枇杷原生质体的渗透压稳定剂，效果较同质量分数的甘露醇差，但随着山梨醇质量分数的提高，原生质体得率递次升高，至１６％时，可达１．３×１０６ｇ－１．原生质体经液体培养在附加一定浓度糖类的培养基上，可出现第１次细胞分裂并持续分裂，１０％蔗糖加５％山梨醇是原生质体早期培养最合适的稳压剂兼Ｃ源，效果比单用蔗糖或山梨醇好．原生质体起源的愈伤组织，只有转入以３％或５％的山梨醇为Ｃ源的培养基中，才能分化茎原基并进而再生植株；转入含蔗糖的培养基，不能分化，继代数次，愈伤组织褐化．分化茎原基的愈伤组织与一般愈伤组织和褐化愈伤组织相比，其山梨醇含量和山梨醇脱氢酶的比活力，均显著升高．且愈伤组织内出现了一些结构变化的区域，这些区域的细胞没有中央液泡，只有小液泡，细胞器非常丰富．这种愈伤组织的显微结构特点与上述山梨醇代谢活跃相平行，共同构成茎原基分化的基础． 相似文献
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应用均匀设计法探讨了电场刺激及培养因素对甘蓝叶原生质体分裂频率的影响。结果表明 ,电场方向和强度强烈地影响细胞分裂频率。培养成分对细胞分裂频率均有不同程度的影响。均匀设计能筛选最优的植物原生质体培养条件或培养基。结合“回归 -通径”分析 ,有效地综合评判和研究了各培养成分对原生质体分裂频率的作用 相似文献
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应用均匀设计法探讨了电场刺激及培养因素对甘蓝叶原生质体分裂频率的影响，结果表明，电场方向和强度强烈影响细胞分裂频率，培养成分对细胞分裂频率均有不同程度的影响，均匀设计筛选最优的植物原生质体培养条件或培养基，结合“回归一通径”分析，有效地综合评判和研究了各培养成分对原生质体分裂频率的作用。 相似文献
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西瓜子叶原生质体再生愈伤组织的获得 总被引：5，自引：0，他引：5
从西瓜(Citrullus vulgaric)无菌苗子叶游离原生质体,用改良的DPD培养基和琼脂糖珠包埋方法培养,可以得到再生细胞的高频率分裂,继而得到原生质体再生愈伤组织。 相似文献
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葡萄原生质体培养中若干因素的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
试验结果表明,处于对数生长期、再生能力强的培养细胞有利于原生质体分离和培养。原生质体分离和初期培养的适宜渗透浓度为0.5M;固体包埋法的效果明显优于液体培养,前者分裂率为后者的3.8倍,达13.8%;外源激素浓度以 B_5基本培养基添加 NAA 2.0mg/L,BA 2.0mg/L,原生质体分裂率最高;葡萄糖取代常规稳压剂甘露醇,效果显著,细胞分裂率是后者的2.6倍。 相似文献
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从陆地棉的下胚轴愈伤组织中分离出原生质体.在培养期间,原生质体再生出细胞壁,接着又分裂、形成了多细胞群落.原生质体的存活和分离,需要25℃以上的温度条件,培养基中要有硝酸铵和氯化钙. 相似文献
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《江苏农业科学》2016,(4)
为了探讨中国境内红毛菜的物种关系及亲缘关系,对红毛菜核糖体基因的28S rDNA、IGS序列进行了研究。28S rDNA序列分析结果显示:江苏(LYG、NT)、福建(NRD1、NRD2)、广东(NA1、NA2、NA3)的7个海水红毛菜遗传距离为0~0.004;而威海(WH)的海水红毛菜与其他海水红毛菜的遗传距离为0.144~0.147;山西娘子关(NZG)、甘肃兴隆山(XLS)的2个淡水红毛菜之间的关系极近,遗传距离为0.001;淡水红毛菜与威海的海水红毛菜的遗传距离(0.125)小于淡水红毛菜与其他7个海水红毛菜的遗传距离(0.210~0.213)。对江苏、福建、广东的7个海水红毛菜的IGS序列进行分析显示,7个海水红毛菜亲缘关系极近。基于28S rDNA序列的系统进化树显示,中国境内采集到的红毛菜分为3个进化分支:2个淡水红毛菜形成独立1支,而海水红毛菜则分为2个进化分支,其中威海的海水红毛菜单独为1个分支,其他7个海水红毛菜归为另1个分支。由此推测,目前为止中国境内至少存在3种红毛菜。 相似文献
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由甘蓝(Brassica oleracea)和芜菁(Brassica rapa)黄化小苗子叶和下胚轴分离出大量有活力的原生质体,并成功地进行了培养。30小时后发生第一次分裂。下胚轴原生质体分裂频率明显高于子叶原生质体。除芜菁子叶原生质体外,其余材料的原生质体均能持续分裂,20天后形成肉眼可见的愈伤组织。在 MS 培养基上,来源于甘蓝子叶原生质体的愈伤组织分化出根,其余的未见分化现象。 相似文献
20.
烟草花叶病毒影响烟草细胞活力的初步研究 总被引：2，自引：0，他引：2
以普通烟草原生质体为材料,初步研究了烟草花叶病毒(TMV)对寄主细胞活力的影响。结果表明,在接种20 d内,TMV对寄主叶肉细胞的分裂有抑制作用,且对不同细胞的生活力有不同的影响,并通过原生质体的培养做了验证。 相似文献