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探索鲜白芨(Bletilla striata)外泌体对体外人永生化角质形成细胞(Hacat)的生物活性,为其在护肤品上的开发提供数据。聚乙二醇(PEG)沉淀法提取白芨外泌体,透射电镜鉴定,BCA法测蛋白浓度;细胞计数试剂(Cell Counting Kit-8,CCK8)法检测Hacat细胞存活率,流式双染检测凋亡,蛋白印迹法检测凋亡相关通路蛋白。白芨外泌体呈茶杯状具双层膜,平均粒径69.63 nm,每克鲜白芨含外泌体浓度为5.24E+8 Particles,内含蛋白19.53μg;白芨外泌体(≥5μg/mL)可显著提高体外Hacat细胞存活率(P<0.05);10μg/mL白芨外泌体处理48h,可显著降低H2O2氧化造模引起的Hacat细胞早凋亡、晚凋亡和总凋亡的细胞比例(P<0.01),同时,模型组caspase-9和caspase-3表达显著上升,外泌体处理能显著降低其表达,而Bcl-2表达在组间无差异(P<0.05)。PEG沉淀法分离的白芨外泌体,可促进体外Hacat生长,抑制H2O2引起的细胞凋亡且与蛋白caspa... 相似文献
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为了初步探讨大肠杆菌型奶牛子宫内膜炎发生机制,进而为后续筛选出作用于关键信号通路靶点的药物奠定基础。试验通过组织块培养法和传代培养分离纯化得到奶牛子宫上皮细胞(Bovine endometrial epithelial cell,bEEC)。30μg/mL的脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激bEEC 12 h后,收集细胞用于奶牛子宫内膜上皮细胞体外炎性损伤模型的研究。通过荧光定量RT-PCR检测LPS作用于bEEC 2、6、9、12 h后细胞内IL-1β、IL-8、IL-6、TNF-α mRNA表达,然后通过Western-blot检测LPS诱导bEEC NF-кB和MAPKs相关蛋白的表达。结果表明：30μg/mL的LPS作用b EEC细胞2、6、9、12 h可极显著(P<0.01)诱导IL-1β、IL-8、IL-6、TNF-α mRNA表达。LPS可上调MAPKs相关蛋白P38、ERK、JNK的磷酸化水平(P<0.01),促使NF-κB抑制蛋白IκBα的降解(P<0.05)。说明LPS可激活MAPKs和NF-кB信号通路,诱导大量炎症介质的... 相似文献
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β-谷甾醇对脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤的保护作用研究 总被引：1，自引：0，他引：1
为了探究β-谷甾醇对LPS诱导的急性肺损伤小鼠的保护作用及其可能的机制,利用酶联免疫吸附法(ELISA)测定β-谷甾醇对RAW 264.7细胞产生肿瘤坏死因子(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的影响。给BALB/c小鼠鼻腔滴注LPS(0.5mg/kg)构建小鼠急性肺损伤模型,滴鼻24 h后检测各指标。ELISA检测小鼠肺泡灌洗液中(BALF)的炎性细胞因子含量;称重法检测肺组织湿/干重比和肺含水量;HE染色法观察肺组织病理形态学变化;应用蛋白印迹法(western blot)检测小鼠肺脏中核转录因子-κB (NF-κB)信号转导通路中相关蛋白的含量变化。结果表明,β-谷甾醇能剂量依赖性降低RAW 264.7细胞上清及ALI小鼠BALF中TNF-α和IL-6的表达水平。肺脏称重结果和病理形态学结果显示β-谷甾醇可明显减轻LPS诱导的肺水肿和炎症反应。另外,western blot结果表明β-谷甾醇不仅能够下调NF-κB p65 的活化,还抑制了NF-κB阻断剂IκBα的磷酸化。β-谷甾醇对LPS所致的小鼠急性肺损伤有较好的保护作用,其保护机制可能与阻止炎症因子(TNF-α、IL-6)的释放和下调NF-κB信号转导通路的活化有关。 相似文献
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5.
根据猪α1干扰素(pocine interferon-alpha1,poIFN-α1)的全基因序列(EU364896)设计合成1对特异引物,通过RT-PCR从三元杂交仔猪外周血淋巴细胞扩增出poIFN-α1全基因,将该基因克隆到pGEM-T载体,构建重组质粒pGEM-T-poIFN-α1,进行测序。以pGEM-T-poIFN-α1为模板,经PCR扩增带有酶切位点的poIFN-α1基因,将其定向克隆到原核表达载体pGEX-6P-1中,构建重组表达载体pGEX-6P-poIFNα1,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行蛋白诱导表达和鉴定,并确定蛋白最佳表达条件。序列分析表明,克隆的poIFN-α1基因全长546bp,编码181个氨基酸,前23个氨基酸组成信号肽,无糖基化位点。SDS-PAGE和Western blotting证实重组表达菌经IPTG诱导后,可表达相对分子质量约46ku的融合蛋白(GST-poIFN-α1)。当以1.0mmol/L的IPTG于37℃下诱导表达9h时,蛋白表达量最高。poIFN-α1基因的克隆与表达为进一步研究其抗病毒活性,开发病毒治疗和疫苗免疫增强用生物制剂奠定了基础。 相似文献
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为探究HIF-1α在CoCl2影响奶牛胎盘滋养层细胞迁移及侵袭变化中的作用，揭示奶牛胎盘在缺氧条件下的形成机制，从早期妊娠奶牛胎盘中分离纯化奶牛胎盘滋养层细胞(BTCs),用吉姆萨染色法观察细胞形态，免疫荧光法检测上皮细胞标志蛋白角蛋白7(CK7)、Thy/CD90蛋白表达，后将pCI-neo-hTERT质粒转染至BTCs,用qPCR和Western Blot法检测细胞TERT mRNA及蛋白表达，用CCK8法测定细胞增殖率，用ELISA法检测细胞分泌胎盘催乳素(PL)的能力，进一步利用siRNA沉默细胞缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达，ELISA法检测细胞分泌血管内皮生长因子(VEGFA)能力，通过划痕试验及Transwell检测细胞迁移及侵袭能力。结果显示，分离纯化的BTCs为典型上皮样细胞，存在一定数量的双核细胞，并表达上皮细胞标志蛋白CK7,未见Thy/CD90表达，转染后的细胞可稳定表达端粒酶(TERT)mRNA及蛋白，连续传代50代未见细胞老化现象，且增殖率显著高于原代BTCs(P<0.05),分泌PL能力较原代BTCs无显著差异(P&g... 相似文献
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为了研究坦布苏病毒囊膜蛋白(E蛋白)的免疫原性,利用大肠杆菌表达系统高效表达坦布苏病毒囊膜蛋白(E蛋白)并对其诱导小鼠免疫应答进行了研究。结果表明,E蛋白免疫BALB/c小鼠后,免疫组小鼠血清中抗体效价均可达1∶51 200以上;同时,E蛋白可显著诱导血清中细胞因子IL-2、TNF-α和IFN-γ的表达,免疫组小鼠血清中IL-2、TNF-α的含量均极显著高于对照组(P0.01),IFN-γ含量则显著高于对照组(P0.05);此外,与对照组相比,E蛋白还可极显著刺激小鼠脾脏淋巴细胞的增殖,上述结果表明,E蛋白免疫后,小鼠机体可产生显著的体液免疫和细胞免疫反应。攻毒保护性试验结果显示,攻毒后,经荧光定量RT-PCR检测,E蛋白免疫组小鼠脑、肝脏、脾脏、卵巢、肾脏中坦布苏病毒载量均显著低于对照组,表明免疫E蛋白可有效抑制坦布苏病毒在小鼠各个组织中的增殖。结果表明,大肠杆菌表达的坦布苏病毒E蛋白可作为坦布苏病毒亚单位疫苗的候选抗原,为进一步预防和控制坦布苏病毒病奠定理论基础。 相似文献
8.
探讨水果黄瓜幼苗对铅胁迫的响应机制,为揭示水果黄瓜抗铅性提供理论依据。在200 mg/L硝酸铅胁迫下,研究了不同浓度的(50,100,300,500μmol/L)外源一氧化氮(Nitric oxide,NO)对水果黄瓜种子萌发以及幼苗可溶性蛋白含量、丙二醛(MDA)含量、过氧化物酶(POD)活性、过氧化氢酶(CAT)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性及叶绿素相对含量的影响。结果表明,200 mg/L的硝酸铅对水果黄瓜种子的萌发起到显著的抑制作用,并使可溶性蛋白与丙二醛的含量升高,POD、CAT活性以及叶绿素相对含量显著降低;加入硝普钠(SNP,NO供体)对水果黄瓜种子的发芽率、发芽势及发芽指数有明显的促进作用,同时降低了丙二醛的含量,增加POD、CAT、SOD活性以及叶绿素相对含量和可溶性蛋白质含量。外源NO能显著促进Pb2+胁迫下水果黄瓜种子萌发,增强细胞的渗透调节能力,提高保护酶活性,明显缓解幼苗叶片受到的氧化损伤,其中以100μmol/L SNP处理的效果最好。 相似文献
9.
厚朴(Magnolia officinalis)是一种传统中药,属木兰科木兰属植物,和厚朴酚是从中药厚朴中提取的一种天然酚类活性物质,具有多种药理特性。以前研究结果显示和厚朴酚具有多种心脏保护作用。本研究旨在探讨和厚朴酚对强烈运动小鼠心肌损伤的影响。研究结果表明：与对照组相比,模型组的LVEF [(81.24±5.33)%比(50.31±6.52)%]、SOD [(68.51±8.90) U/mg比(26.71±2.11) U/mg]、GSH-Px [(43.64±3.75) U/mg比(13.42±0.98) U/mg]显著降低,下调Bcl-2 (0.79±0.07比0.23±0.02)蛋白表达;LVESd [(1.37±0.15) mm比(2.94±0.11) mm]、LVIDd [(4.33±0.46) mm比(6.92±0.62) mm]、ROS [(112.31±12.74)μmol/L比(268.74±26.81)μmol/L]、细胞凋亡率[(6.85±0.47)%比(31.24±3.72)%]显著增加,增加TNF-α [(89.78±7.52) pg/mL比(356.95... 相似文献
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《中国农学通报》2010,(21)
研究通过建立猪肠黏膜上皮细胞(Intestinal epithelial cells,IEC)原代培养的方法,研究了赖氨酸对体外培养的猪小肠黏膜上皮细胞碱性氨基酸转运载体mRNA表达的影响。用机械刮取初生仔猪小肠黏膜加胶原酶Ⅱ消化的方法,成功地在体外培养了新生仔猪IEC;分别用浓度为0、2、8mmol/L赖氨酸处理细胞96h,提取细胞总RNA,采用实时荧光定量PCR方法,检测了碱性氨基酸转运载体在不同处理细胞中的表达丰度。结果表明:高浓度的赖氨酸对CAT-1 mRNA的表达有上调作用,差异极显著(P0.01),并且呈剂量依赖效应;不同浓度的赖氨酸对CAT-2 mRNA的表达影响不大,8mmol/L和2mmol/L赖氨酸组CAT-2 mRNA的表达丰度均有低于0mmol/L的趋势,但二者之间差异不显著(P0.05);不同浓度的赖氨酸对y+LAT1 mRNA表达影响差异不显著(P0.05);高浓度的赖氨酸可提高4F2hc mRNA的表达;0mmol/L和2mmol/L赖氨酸组4F2hc mRNA的表达丰度均低于8mmol/L,且差异显著(P0.05);0mmol/L和2mmol/L赖氨酸组之间差异不显著(P0.05)。 相似文献
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旨在研究不同处理方式对青贮稻秸秆发酵的影响和青贮稻秸秆对山羊生长性能和血液生化指标的影响。在稻秸中加入乳酸菌、纤维素酶和糖蜜进行混合青贮,结果发现：在稻秸秆中添加2.5 g/t 乳酸菌、600 g/t 纤维素酶、4%糖蜜和加水200 kg/t 进行混合青贮能够降低pH(P＜0.01)、丁酸和丙酸浓度(P＜0.05);显著提高干物质(P＜0.01)、粗蛋白(P＜0.05)和可溶性碳水化合物(P＜0.01)含量,而粗脂肪、中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维则相反。将青贮稻秸替代30%、60%和100%粗饲料进行饲喂山羊。结果显示：替代100%组羊的末重和平均日增重显著高于其他各组(P＜0.01),料重比最低;各组的平均日采食量无显著差异。替代60%组山羊的血清碱性磷酸酶浓度(P＜0.01)和总胆固醇含量(P＜0.05)均显著降低。综上所述,稻秸秆中添加2.5 g/t 乳酸菌、600 g/t 纤维素酶、4%糖蜜和加水200 kg/t 进行混合青贮的效果较好,且青贮稻秸代替100%粗饲料能够提高山羊的生长性能,降低成本 相似文献
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生长素和赤霉素对刺果瓜幼苗生长发育的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
[目的]刺果瓜(Sicyo angulatus L.)是外来入侵植物,对当地生态破坏严重,幼苗期是刺果瓜生命周期相对薄弱环节,研究其幼苗的生长机理,对遏制刺果瓜的繁殖和扩展有很大的帮助。[方法]本试验以刺果瓜幼苗为研究对象,设置四个不同浓度(3 μmol/L、30 μmol/ L、300 μmol/ L、3000 μmol/ L)的生长素(IAA)、生长素抑制剂三碘苯甲酸(TIBA)、赤霉素(GA3)、赤霉素抑制剂矮壮素(CCC)、IAA+GA和TIBA+CCC对刺果瓜长出第一片真叶的幼苗进行处理,通过测量6个时间点( 1天,2天,3天,5天,7天,9天)刺果瓜幼苗的株高、根长、鲜重、干重等生理特性,探究IAA和GA对刺果瓜幼苗的影响。[结果]结果表明：300 μmol/L的IAA处理植株株高与根长长势超过其他试验组与对照组,而3000 μmol/L的TIBA植株株高与根长得到明显的抑制。3000 μmol/L的GA3处理组株高、干重值、鲜重增长速度最快,为刺果瓜的最适浓度范围；3 μmol/L GA3处理,植株增长速度最慢；300 μmol/L CCC对刺果瓜的矮化作用最好,但干重、鲜重值增加；接近3000 μmol/L的CCC矮化作用较好,对干重、鲜重几乎无促进作用,为控制刺果瓜生长的最适浓度范围。浓度为3000 μmol/ L的TIBA+CCC处理对刺果瓜幼苗的影响极为显著,在喷洒激素6 h后就可以看到刺果瓜幼苗受到抑制出现萎蔫,刺果瓜有极强的抗逆性,所以在12 h后萎蔫状态消失,虽然仍受到抑制,但仍然缓慢生长着。9 d后,浓度为3000 μmol/l的TIBA+CCC处理刺果瓜幼苗仅长高5.53 cm,而对照组长高18.70 cm。浓度为3000 μmol/l IAA+GA处理的刺果瓜幼苗长高34.47 cm。浓度为3000 μmol/l的TIBA+CCC对刺果瓜的抑制作用极其显著。[结论]通过研究刺果瓜的生长机理,使用外源激素对刺果瓜的生长有较好的抑制作用,为抵抗外源入侵植物提供了新方法。 相似文献
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雄激素通过Fas途径诱导小鼠骨髓巨噬细胞凋亡 总被引：2，自引：1，他引：1
通过雄激素诱导小鼠骨髓巨噬细胞凋亡以及对Fas信号传导通路的研究来探讨雄激素对免疫系统抑制作用的机制。采用不同浓度（1～10 nmol／L）的雄激素处理小鼠骨髓巨噬细胞24h后,先用DNA片段电泳法和Annexin—V／PI双染后流式细胞仪检测不同处理组的细胞凋亡的情况;再用RT—PCR半定量法观察雄激素对Fas途径中一些基因表达的影响。发现10nmol／L雄激素处理的巨噬细胞凋亡率31．7％比对照组7．4％显著升高,并伴随Fas途径中相关基因（Fas,FasL,FADD,caspase-8和caspase．3）转录水平的升高。雄激素可能是通过Fas途径来诱导小鼠骨髓巨噬细胞发生凋亡,从而发挥其免疫抑制作用。 相似文献
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[目的]为了筛选出促进甜菜种子萌发的引发剂,研究不同引发剂对甜菜种子萌发的影响,为甜菜丸粒化物料奠定基础, [方法]本研究利用甜菜种子TD305为试验材料,采用蒸馏水、水杨酸、赤霉素作为引发剂对甜菜种子进行处理,设置不同浸泡时间、不同浓度梯度,并对发芽势、发芽率、发芽指数、活力指数进行测定。[结果] 结果显示蒸馏水对于种子萌发时间在30min左右为宜。水杨酸处理甜菜种子的适宜浓度为0.05、0.1、0.2和0.5 mmol/L。赤霉素处理对甜菜种子的适宜浓度为0.05、0.1和0.2 mmol/L。[结论]结果表明在适宜时间和浓度下,蒸馏水、水杨酸、赤霉素这三种引发剂均对甜菜种子萌发有一定促进作用,但时间过长或者浓度过高反而有抑制作用。三种引发剂比对结果表明,发芽势：蒸馏水>水杨酸>赤霉素;发芽率：蒸馏水> 赤霉素>水杨酸;发芽指数：蒸馏水> 赤霉素>水杨酸;活力指数：赤霉素>蒸馏水>水杨酸。 相似文献
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SD大鼠热应激模型的制作及评价 总被引：1，自引：1，他引：0
为了对热应激SD大鼠模型的制作及生理生化指标进行检测。将20只SD大鼠随机分成两组,一组为对照组,二组为模型组,模型组在霉菌培养箱内以40℃高温、50%相对湿度热攻击2 h,使热应激发生,对照组正常饲养,2 h后观察大鼠行为变化、死亡个体剖检、眼底静脉丛采血、检测各种理化指标和肝脏Hsp70表达量。结果表明：与对照组相比,模型组的pH升高,差异不显著(P＞0.05),Na+、K+浓度降低,其中K+达到差异极显著(P＜0.01);血浆蛋白TP、ALB、HB浓度下降,达到差异极显著(P＜0.01);血清酶ALT、GOT、ALP、LDH、CK活性均表现为升高,达到差异显著或极显著（P＜0.05或(P＜0.01);SOD浓度降低,差异极显著(P＜0.01),MDA浓度升高,差异极显著(P＜0.01);肝脏Hsp70相对表达量升高,差异极显著(P＜0.01)。说明模型组符合热应激指征,SD大鼠热应激模型制作成功。 相似文献
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以低温导入法将钙离子荧光探针Fluo-3/AM导入拟南芥叶片细胞中,利用LAS AF（Leica Application Suite-Advanced Fluorescence）软件记录肝素对茉莉酸（JA）诱导的胞内钙离子荧光强度的变化。结果显示,经不同浓度的肝素预处理后,拟南芥叶细胞中胞内钙离子的荧光强度降低,再用100 μmol/L JA处理时,其荧光强度升高,但仅与未经肝素处理的荧光强度相当。实验证明,肝素预处理可抑制JA诱导的胞内钙离子浓度的升高。 相似文献
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为降低镉污染条件下葡萄对镉的积累,促进葡萄生长,采用盆栽试验研究镉污染(5 mg/kg)条件下喷施脱落酸对葡萄幼苗生长及镉积累的影响。结果表明,葡萄幼苗各部位的生物量和叶片的光合色素含量均随着脱落酸浓度的增加(0、1、5、10、20 μmol/L)而先降低后增加。随着脱落酸浓度的增加,葡萄幼苗叶片的POD及CAT活性和土壤pH呈现先增加后降低的趋势,而SOD活性随着脱落酸浓度的增加而增加。另外,喷施脱落酸能使葡萄幼苗各部位镉含量显著低于对照,并随着脱落酸浓度的增加而减少,脱落酸浓度为20 μmol/L时,葡萄幼苗的根系和地上部分分别较对照降低了36.54%和74.36%。综上,喷施脱落酸能够降低葡萄对镉的吸收,以20 μmol/L脱落酸浓度最佳。 相似文献
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为了研究6-BA与全球红葡萄果实中绿原酸含量的关系,采用6-BA处理全球红葡萄并用高效液相色谱（HPLC）法测定其果实发育过程中种子、果皮和果肉中绿原酸含量的变化。结果表明:经6-BA处理后,葡萄果实绿原酸含量与对照有明显差异;当6-BA处理浓度为30mg.L-1 时最为显著;且处理后种子、果皮和果肉中绿原酸含量峰值出现时间有明显不同,三者最大峰值出现时间分别为花后：65d、75d和85d,绿原酸含量分别为：25.85ug?g-1、17.91ug?g-1、5.76ug?g-1。 相似文献
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通过研究转化生长因子β(transforming growth factor-β, TGF-β)的特异性小分子拮抗剂SB-431542对梅花鹿鹿茸软骨层细胞增殖的影响,探讨转化生长因子β在鹿茸快速生长中的调节机制。分离培养生长30天的梅花鹿鹿茸软骨层细胞,将传代培养第2代的细胞经不同浓度的SB-431542 (0,1,3,5,8,10μM)作用,培养48小时后用MTT法测其细胞增殖的变化,并用SPSS软件分析其差异性。结果显示,SB-431542处理组细胞增殖活性都低于对照组(P＜0.05),其中浓度为8μM和10μM的SB-431542处理组与对照组相比差异非常显著(P＜0.01),随着添加SB-431542浓度的升高,对细胞的生长速度抑制更加明显,试验表明,TGF-β对维持梅花鹿鹿茸软骨层细胞的快速增殖有重要作用。 相似文献
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L. rhamnosus 719产酸与抑菌作用的关系研究 总被引：2，自引：0，他引：2
HPLC分析表明,L.rhamnosus719在MRS中发酵时,醋酸含量先升后降,而乳酸在发酵过程中不断增加,发酵过程中,乳酸和醋酸的摩尔浓度比从6h的0.28增加到60h的2.63。L.rhamnosus719在MRS培养48h的上清液抑菌效果最好,抑菌圈直径达36mm,其中乳酸、醋酸含量分别为17.70g/L和4.32g/L。L.rhamnosus719产生较高浓度的乳酸和醋酸是其抑菌作用的主要原因。 相似文献