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以"热研3号"苦瓜为试材,根据苦瓜谷氨酰胺合成酶基因(McGS1)全长序列信息设计引物,提取"热研3号"苦瓜总RNA并反转录成cDNA作为模板,通过PCR扩增、产物测序、酶切等方法与pET-30a(+)原核表达载体相连,构建苦瓜McGS1基因原核表达载体,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达分析,研究不同IPTG浓度及诱导时间对苦瓜McGS1基因蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中表达的影响。结果表明:该研究成功构建了苦瓜McGS1基因的原核表达载体,37℃、0.2μmol/L IPTG诱导4h苦瓜McGS1基因蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中可高效表达,表达的蛋白质分子量约为35kDa。 相似文献
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桃叶片β- 半乳糖苷酶基因全长cDNA克隆及原核表达 总被引：2，自引：0，他引：2
利用RT-PCR和RACE技术, 从蟠桃(Amygdalus persica var. compressa Bean) 中克隆出3 285 bp的β - 半乳糖苷酶基因cDNA全长, GenBank登录号为AY874412。该cDNA 2 559 bp, 编码853个氨基酸。将其插入到大肠杆菌表达载体pET-32a ( + ) 中, 转化BL21 trxB (DE3) , 筛选重组菌株。经IPTG诱导表达后, SDS-PAGE呈现约115 kDa特异表达条带。并通过体外酶促反应分析表达的融合蛋白的生物活性。 相似文献
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以先前克隆到的黄瓜脂氧合酶基因CsLOX2 全长的cDNA 为模板,用含有特异性酶切位点
的Yh1、Yh2 为引物,通过PCR 方法将黄瓜脂氧合酶基因CsLOX2 的ORF 区构建到大肠杆菌表达载体
pGEX-4T-1 上获得原核表达载体p4t-LOX2,将该表达载体p4t-LOX2 转化到大肠杆菌菌株BL21（DE3）
中,获得相应的重组工程菌。在IPTG 诱导下,通过SDS-PAGE 电泳,得到一条约115 kD 的融合蛋白条带,
除去pGEX-4T-1 自身诱导的约26 kD 大小的GST 标签蛋白后,CsLOX2 编码一个约89 kD 的蛋白。 经过
融合蛋白表达体系的优化分析,表明该融合蛋白在 37℃,0.80 mmol·L-1 IPTG 诱导表达 10.5 h,可获得
融合蛋白的最大表达量。 相似文献
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刺激植物响应蛋白基因TatEpl1的克隆及原核表达载体构建 总被引：1，自引：0，他引：1
以深绿木霉(Trichoderma atroviride)ACCC30153为试材,采用PCR技术克隆到刺激植物响应蛋白基因TatEpl1,并构建TatEpl1的原核表达载体。结果表明:经测序得到的cDNA和DNA序列长度分别为417bp和487bp,接受号分别为JN695780和JN695781。以cDNA为模板进行PCR获得TatEpl1基因片段,并将目的片段插入原核表达载体pGEX-4T-2的相应位置,获得重组表达载体pGEX-TatEpl1,并将其转入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21中获得重组菌株BL21-TatEpl1,经检测均呈阳性。 相似文献
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《果树学报》2017,(2)
【目的】分离沙梨DELLA蛋白编码基因PpGAI3,探究其蛋白在花芽休眠中的表达情况。【方法】从不同需冷量沙梨品种‘蜜雪梨’和‘黄花梨’中分离PpGAI3基因,重组到p EASY-Blunt E1表达载体中,转化BL21(DE3)宿主菌后经IPTG诱导表达,并对表达菌株进行SDS-PAGE和Western blotting检测。【结果】获得2种沙梨的PpGAI3基因,分别命名为PpGAI3mx和PpGAI3hh,Gen Bank登录号为KU954535和KX078215,其开放阅读框(ORF)为1 641 bp,编码546个氨基酸,预测其为亲水性不稳定蛋白。进化树分析表明PpGAI3mx和PpGAI3hh与白梨的亲缘关系最近;成功构建了p EASY-Blunt E1-PpGAI3原核表达载体,得到蛋白分子质量约60 ku的诱导表达产物。【结论】所得沙梨DELLA蛋白编码基因PpGAI3为植物DELLA蛋白家族中的成员,在梨花芽休眠过程中具有特异表达,且表达产物大部分以不溶性包涵体形式存在。 相似文献
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成功获得了桦褐孔菌(Inonotus obliquus)JL 01菌株的内切葡聚糖酶(IO-EG)和β-葡萄糖苷酶(IO-BGL)的cDNA全长序列.eg2基因cDNA序列全长(ORF)为1149 bp,编码382个氨基酸,bgl2基因cDNA序列全长(ORF)为2583 bp,编码860个氨基酸;成功构建了30a-eg2和30a-bgl2大肠杆菌表达菌株,诱导培养后,SDS-PAGE电泳分析表明两个菌株均表达蛋白,且蛋白以包涵体形式存在,为桦褐孔菌高效外源基因表达系统的建立提供了基础. 相似文献
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鸭梨多酚氧化酶基因CDS区的克隆及表达 总被引：3，自引：0，他引：3
以鸭梨(Pyrus bretschneideri Rehd.)果皮基因组DNA为模板,根据已经发表的多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)基因保守序列设计引物,利用PCR技术,克隆得到鸭梨多酚氧化酶编码区序列,将此核酸序列克隆到载体pGEM-T,酶切鉴定后测序,结果表明该段序列含有1782个核苷酸,编码593个氨基酸。对鸭梨多酚氧化酶基因片段的一致性分析和进化树分析表明,该片段与沙梨(Pyrus pyrifolia,AB056680)、苹果(Malus domestica,L29450)、李(Prunuss alicina,AY866432)以及杏(Prunus armeniaca,AF020786)的一致性分别为99%、96.3%、82%和51.4%,绘制的进化树和形态学分类地位相一致。将该片段连接到表达载体pET39b上,获得的重组子命名为pET39b-PPO,热激法转化表达受体大肠杆菌BL21(DE3)菌株,用IPTG进行诱导。SDS-PAGE分析表明,PPO基因在大肠杆菌中被诱导表达蛋白质相对分子质量约66ku,检测表明具有多酚氧化酶的活性。 相似文献
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PTEN is a candidate tumor suppressor which has sequence homology withdual-specifici-ty phosphatase. PTEN is a multifunctional protein endowed with a phosphatase activity capable of dephosphory-lating both tyrosine phosphate, serine/threonine phosphate residues on proteins and phospholipids of the phosphati dylinositol pathway. PTEN appears to be mutated at considerable frequency in several types of humantumors, including those frombrain, breast, endometrium, and prostate. PTEN play an important role in pathogenesis of tumor, tumor cell invasion and metastasis. In this review, we will discuss the chemical structure of PTEN, its phosphatase activity, the ability of affecting signal transduction, and its mutational status in cancer. 相似文献
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阐述了现代园林的基础知识,并通过对园林绿化生态效益的分析,概括了现代园林绿化的新概念及在城镇规划中的作用,并浅析如何在城镇中进行现代生态园林绿化的应用。 相似文献
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1、贮藏期病害及发生规律 1.1真菌病害已有的研究表明,贮藏期危害葡萄的病菌全部为真菌.细菌的生长因葡萄浆果的pH值在2.9-4.0的范围内而被限制.低温贮运过程中危害葡萄的病原菌包括：灰霉（Bolty cinera Pers）、青霉（Penicillia spp.）、交链孢霉（Allernaria spp.）、芽枝霉（Clad ospriumSp.）和匐梗霉（Stemphy lium Sp.）等.葡萄常温贮运过程中致病菌主要有根霉（Rhizopusstolorifer（Ehrenb.：Fr.）Vuill）. 相似文献
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时下,在蔬菜生产上,人们为了追求高产,大量施用氮、磷、钾化肥,而忽视了微量元素的应用,特别是保护地土壤中大量元素与中微量元素不平衡的矛盾日益突出.2005年9月,笔者对招远市二十个蔬菜生产重点村的三十二个日光温室（每个660m2）及十个露地菜田进行了土壤检测,结果表明：菜田土壤均属强酸性,pH平均为4.8.土壤水溶性硼含量平均为0.23mg/kg,比中等肥力菜田土壤硼的最低界限值0.5mg/kg,尚差0.27mg/kg,呈极缺状态;土壤有效锌含量平均为1.5mg/kg,与高产田有效锌要求3mg/kg,尚差一半;土壤中钼的含量仅有0.10mg/kg,比要求的最低临界值0.15mg/kg,尚差0.05mg/kg.由于微量元素的缺乏,导致蔬菜生理病害日益严重,如：缺锌引起的小叶病;缺硼引起的果实木栓化;缺钙引起的番茄、辣椒脐腐病等大量发生.据2004年招远市郭家埠菜田调查,青椒脐腐病病株率达到30%以上,高的地块达到50%,给生产造成了很大损失.因此,蔬菜缺素症应当引起专业技术人员及广大菜农的重视.笔者根据多年来的试验研究,总结出了一套蔬菜缺素症的综合防治技术,现介绍如下. 相似文献
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国家蔬菜工程技术研究中心共收集苋菜及部分野生蔬菜资源1070份。按食用器官分类，共分为七大类数十个种类，显示出我国蔬菜遗传资源的多样性。分析测定了703份野生蔬菜的营养成分。针对目前我国在野生蔬菜资源的基础研究和开发利用中存在的问题，提出了相应的对策。 相似文献
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在乙醇：龙眼果皮＝ １００∶４（ｖ／ｗ ）、７０ ℃、１００ ｍ ｉｎ 的最佳条件下,ｐＨ ４．５２,λＲｍａｘ＝ ３７０ ｎｍ ,呈鲜黄色。龙眼黄色素（Ｒ）乙醇提取液的ｐＨ、光、热、离子、共存物对Ｒ的稳定性有不同的影响。综合考虑各种影响因素,用Ａ、Ｂ、Ｃ保鲜剂、浸果３ ｍ ｉｎ 后,分别于室温、１５、－ １０ ℃下贮藏１０、３０、６０ｄ,龙眼的好果率为８７ ％ 、９５ ％ 、１００ ％ ,损耗率为１４ ％ ～０,基本保持果壳原色和果肉的色泽、风味、品质,取得了护色保鲜的效果 相似文献
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早实核桃的生长发育特点与整形修剪 总被引：3，自引：0，他引：3
目前我国栽培的核桃可分为两大类,一类为结果晚的品种如礼品1号、礼品2号、晋龙1号、秦优1号等;另一类为早实核桃品种(栽后2年结果)如辽宁1号、辽宁3号、辽宁5号、中林1号、鲁光、陕核1号、绿波等。这两类核桃在生长发育上既有相同之处,也有着不同的生理生态特征,因此,在栽培管理上就有所不同。据我们的多年观察研究,就早实核桃的整形修剪谈几点意见。1生长特点早实核桃为乔木,树高可达10m以上,干径粗度可达60cm以上,寿命多为50～80年。早实核桃侧芽萌发力强,易抽生二次枝。树体在幼树阶段管理不当,极易造成树形紊乱,结果部位快速外移,产量… 相似文献
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以鲜菌草(巨菌草、象草、五节芒)及其相对应的干菌草为试材,采用单因素试验方法,研究鲜菌草与干菌草灭菌前与灭菌后的碳氮含量及碳氮比的变化。结果表明:灭菌前,鲜菌草的碳含量低于相应干菌草的碳含量,鲜菌草的氮含量高于相应干菌草的氮含量,鲜菌草的碳氮比均低于相应干菌草的碳氮比;灭菌后,鲜菌草与干菌草的碳含量和氮含量均有所降低,除了干巨菌草以外,鲜菌草与干菌草的碳氮比均降低,鲜菌草的碳氮比也低于相应干菌草的碳氮比。因此,灭菌对鲜菌草和干菌草的碳含量、氮含量和碳氮比均有影响,鲜菌草更适合用于栽培较低碳氮比的食药用菌。 相似文献
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The early-1990s’ war in former Yugoslavia led to severe damage to the urban and peri-urban forests of Sarajevo, capital of Bosnia and Herzegovina. During the Siege of Sarajevo (April 1992–March 1996), after the energy supplies to the city had been cut off, over three-quarters of all urban trees and nearly all peri-urban trees within the siege line were cut down for firewood by the desperate residents. After the war, the city trees were quickly and effectively replanted, and Sarajevo provides a useful case study of urban forest recovery. This study presents the observations and measurements, of trees that survived the war and the trees planted after the war, made in Sarajevo in May 2008. We summarize the lessons learned from the Sarajevo experience, regarding both damage and replanting, which include the close relationship between the urban tree damage and the specifics of military operations, the importance of the initial planting stock, and the advantages of collaboration between academic researchers and urban forest managers. 相似文献