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1.
以5％绵羊血改良Minca琼脂筛选和克隆表达良好的K88^＋菌株，改良Minca琼脂培养获得K88菌液。用加热法及高速匀浆法使K88纤毛从菌体上脱下。饱和硫酸铵沉淀粗提，用Sepharose CL-4B凝胶过滤纯化K88抗原。提纯的抗原经SDS—PAGE电泳测定其分子量约为25000，且仅此一条蛋白带；与K88抗血清进行琼脂扩散试验只出现一条沉淀线。用提纯的抗原经多次免疫家兔制备了K88抗血清。抗血清在玻板凝集试验中只凝集K88菌株，不凝集K99，987P或F41菌株；在琼扩试验中，只与K88粗提抗原出现一条沉淀线，且效价为1：64，而不与K99，987P抗原出现沉淀线；在免疫电泳试验中，与无细胞K88纤毛液只出现一条沉淀线。鉴定结果表明，所制备的K88血清特异性强、效价高，可作为单因子血清用于凝集试验、琼扩试验等血清学试验，对K88菌株进行鉴定，对K88纤毛抗原进行定性和定量检测。 相似文献
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采用加热法和盐析法对大肠杆菌K88、K99、987P纤毛抗原进行了提取、纯化,并通过SDS—PAGE凝胶电泳对提纯效果进行了检验。将纯化的纤毛抗原免疫家兔,制备了K88、K99、987P纤毛抗原抗血清,用琼脂扩散试验检测了抗血清的效价。结果表明,纯化的K88、K99、987P纤毛为高纯度的纤毛抗原,其分子量分别约为26、18、20kD。K88、K99、987P抗血清的琼扩效价依次为1：32、1：32、1：128,且特异性高。本研究为K88、K99、987P纤毛抗原定量检测及产纤毛大肠杆菌菌株的鉴定奠定了基础。 相似文献
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用参考菌株建立了大肠杆菌K88、K99和987P三种纤毛(3P)抗原的ELISA改良双夹心检测法。通过对分离菌株、仔猪粪便样品中三种抗原的检测,对已知阳、阴性菌株和部分腹泻病原、正常肠道菌的试验以及对抗原的定量测定,证明本方法具有较高的特异性和敏感性。 相似文献
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对FC株猪源性肠毒素型大肠杆菌致病因子的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
FC菌株是一株从腹泻仔猪粪便中分离的肠毒素型大肠杆菌(Enterotoxigenic E.coli,ETEC)。在MRHA反应中,本菌能凝集人O型、豚鼠、马、绵羊、牛、鸡和兔的红细胞,对人O型和豚鼠红细胞有很高的血凝性,血抗K88和K99血清不能抑制其对豚鼠和绵羊红细胞的血凝。在体外小肠上皮细胞吸附试验中,本菌对仔猪小肠上皮细胞具有强烈的吸附作用;透射电镜和扫描电镜观察证实了FC株菌除表面具有一种纤毛样结构外,还能定居在仔猪小肠段。血清学试验结果表明,本菌的O抗原属于O101。K88和987P两种抗血清均不能凝集本菌,而K99和F41抗血清均可凝集。对纯化的FC株菌粘着素抗原作等电聚焦和聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,结果表明,该菌的粘着素是由等电点分别为4.61和9.78,分子量分别为29500和17500的两种蛋白质抗原所组成。此外,用乳鼠胃内投服试验和兔肠结扎试验证明,该菌只产生热稳定肠毒素。总之,本菌是一株能产生ST的K99,F41的肠毒素型大肠杆菌。 相似文献
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团头鲂对3种致病菌外膜蛋白(OMP)的免疫应答 总被引：1，自引：0，他引：1
利用从柱状黄杆菌(Flavobacterium columnare)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)和温和气单胞菌(Aeromonas sobria)中提取的外膜蛋白(outer membrane protein,OMP)作为免疫原,注射接种团头鲂(Megalobrama amblycephala)后,通过测定受免鱼的交叉凝集抗体效价、肾脏和血液中吞噬细胞的吞噬活性和采用A.hydrophila活菌攻毒方法,比较了3种致病菌OMP对团头鲂的免疫原性。试验结果表明,从3种致病菌中提取的OMP对团头鲂均具有较强的免疫原性,受免鱼的血清中存在对3种致病菌的交叉凝集抗体,与对照鱼相比,肾脏和血液中吞噬细胞对吞噬原的吞噬活性和对A.hy-drophila活菌攻毒的相对免疫保护率(relative percent survival,RPS)明显上升。说明在3种致病菌的OMP上不同程度地存在共同保护性抗原。 相似文献
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大肠杆菌987P抗原的提纯及部分特性鉴定 总被引：3，自引：0，他引：3
用高速匀浆法使987P纤毛从987P菌体上脱开,等电点沉淀粗提无细胞液中的987P抗原,用Sepharose CL-4B凝胶柱进一步纯化该抗原。提纯抗原的分子量为19500;电子显微镜负染观察可见匀质、僵直、长短不一的毛发状结构,直径约7nm,与抗原来源菌株OK抗血清进行的免疫电泳,只出现一条沉淀线;用纯化抗原制备的兔、豚鼠抗血清,能凝集不同血清型的987P~+参考和分离菌株。提纯的987P抗原达到了免疫纯和电泳纯,并用此抗原制备了高特异、高效价的抗血清。 相似文献
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《黑龙江畜牧兽医》2016,(10)
为了研究丝瓜提取物对衰老模型小鼠学习记忆能力和脑组织中氧自由基代谢及脑细胞膜离子转运的影响,试验将60只昆明种小鼠随机分为空白组、衰老模型组和丝瓜提取物高、中、低剂量组,通过皮下注射D-半乳糖制备衰老模型,8周后对各组小鼠行八臂迷宫行为学测试,测定小鼠脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性及丙二醛(MDA)的含量,脑组织Na+,K+-ATP酶和Ca2+,mg2+-ATP酶的活性及脑指数。结果表明:丝瓜提取物高、中剂量组衰老小鼠的短期记忆和长期记忆均有所改善;丝瓜提取物可提高衰老小鼠脑组织中抗氧化酶SOD、GSHPX活性,并明显降低MDA含量,提高脑组织中Na+,K+-ATP酶和Ca2+,mg2+-ATP酶活性。说明丝瓜提取物可改善衰老小鼠学习记忆能力,同时可通过增强机体清除氧自由基能力提高抗氧化酶活性及细胞膜蛋白活性而发挥抗衰老作用。 相似文献
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用 PCR从腐蹄病 C型节瘤拟杆菌扩增出具有免疫保护性抗原 0 .85 kb纤毛蛋白基因 (pili基因 ) ,并构建了该基因的表达载体。转化宿主细胞 PAK/2 pfs,在营养肉汤中进行 pili基因的表达。培养 18～ 2 4h后 ,收集培养液上清 ,加入 0 .1mol/L Mg Cl2 ,离心提取重组纤毛蛋白。用羊抗兔 C型节瘤拟杆菌抗血清与提取的纤毛蛋白进行对流免疫电泳试验 ,结果表达的重组纤毛蛋白有特异性 ;用 SDS- PAGE和 Western- blot证明表达的蛋白是 C型节瘤拟杆菌纤毛蛋白。 相似文献
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用0.1M、pH3.0甘氨酸缓冲盐水去除体内培养染虫红细胞表面粘着抗体,用不同途径确保染虫红细胞不被白细胞污染,并严格控制超声处理红细胞的过程,使快速卡片凝集抗原达到较完美的质量,并大幅度减少抗原在制备过程中的损失。进一步优化试验条件,保证了这种试验的特异,敏感,快速和准确。 相似文献
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大肠艾希氏杆菌987p菌株的初步探讨 总被引：2，自引：1，他引：1
一、前言肠病原性E.Colj的987p纤毛抗原是促使细菌在仔猪肠道中定居的纤毛群之一,它与K_(88)、K_(99)抗原一样,是一种不耐热的表面抗原,并证明是一种粘着因子,能使E.Coli菌在仔猪粘膜表面上粘着定居,随之细菌产生肠毒素而引起仔猪腹泻发病。Nagy等于1976年报告了缺乏K_(88)抗原的肠病 相似文献
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丹毒丝菌spaA基因免疫保护区的克隆与功能研究 总被引：1，自引：0，他引：1
本研究以丹毒丝菌XJ1249基因组DNA为模板,根据GenBank已发表的丹毒丝菌表面保护性抗原A (SpaA)的序列设计引物进行PCR扩增,得到大小约1 029 bp的spaA基因N端免疫保护片段(spaA-N)。将spaA-N连接到载体pGEX-4T-1上构建重组原核表达质粒pGEX-spaA-N,对重组质粒进行序列验证后,在IPTG的诱导下,表达和纯化重组蛋白r-SpaA-N,并研究其对小鼠的免疫保护作用。结果显示:分离纯化的重组蛋白具有免疫原性,并对小鼠具有免疫保护性,能够有效防止丹毒丝菌对小鼠的侵染。研究结果为进一步研究丹毒丝菌致病机理,开发新的猪丹毒诊断试剂盒和亚单位疫苗奠定了基础。 相似文献
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5种大肠杆菌O抗原定型血清的制备 总被引：1，自引：0，他引：1
《中国兽医杂志》2019,(5)
本研究以大肠杆菌参考菌株CVCC1369(O26)、CVCC3800(O153)、CVCC1489(O157)、CVCC3739(O159)、CVCC3807(O163)为菌种制备免疫抗原并免疫家兔,获得5种大肠杆菌O抗原定型原血清,而后制备多种吸收抗原以消除5种原血清的非特异性凝集素。通过微量凝集试验的方法,确定各血清的凝集价。最终确定了5种大肠杆菌O抗原定型血清的制备方法,为进一步改进大肠杆菌O抗原定型血清的制备工艺提供了思路和依据。 相似文献
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对人工感染黄痢发病仔猪的小肠作组织切片检查发现,在国内流行的仔猪黄痢病原性大肠杆菌中除了 K_(88)~ 菌株外,还有二类 K_(88)~-大肠杆菌也能粘着于仔猪小肠绒毛上皮。它们对不同动物红细胞的凝集性及它们的表面 K 抗原都互不相同.表明它们各自具有不同类型的表面粘着素。其中一个菌株的血凝持性与国外报导的 K_(99)~ 大肠杆菌很相似,另一类菌株则有待进一步详细鉴定。本文讨论了病理组织切片技术对于发现细菌的未知粘着素的诊断意义。 相似文献
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大肠杆菌菌体O抗原单因子定型血清的制备 总被引：1，自引：0，他引：1
为研制大肠杆菌菌体O抗原单因子定型血清,以大肠杆菌参考菌株CVCC1345(O2)、CVCC1350(O7)、CVCC1414(O74)为菌种制备抗原免疫家兔,获得了定型原血清,并通过比较不同免疫程序及剂量优化了定型原血清的制备工艺。进而按照优化后的定型原血清制备工艺,以大肠杆菌参考菌株CVCC1343(O1)、CVCC1345(O2)、CVCC1350(O7)、CVCC1405(O64)、CVCC1414(O74)、CVCC1439(O100)、CVCC1442(O103)、CVCC1455(O116)、CVCC1466(O128)、CVCC3801(O154)为菌种制备抗原免疫家兔,获得了10种O抗原型定型原血清。将定型原血清分别与180种微量凝集试验抗原逐一反应,明确各原血清与非特异性抗原的交叉凝集价,通过用吸收抗原对原血清进行吸收及稀释的方法消除非特异性凝集,最终制备成大肠杆菌菌体O抗原单因子定型血清。血清质量评价结果表明,新制备的单因子定型血清性状为无色、淡黄色或黄色澄明液体,个别有少量絮状物;无菌生长;特异性良好;凝集效价为1︰2。研究结果显示,制备的大肠杆菌O抗原单因子定型血清具有较好的特异性,可以用于对临床分离大肠杆菌进行O抗原血清型鉴定。 相似文献
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利用基因工程技术构建的带有K_(99)和F_(41)两种纤毛抗原基因的重组质粒与K_(88)抗原工程菌C_(84)的质粒转化同一受体菌,得到双质粒。同时表达K_(88)、K_(99)、F_(41)三种纤毛抗原的菌株。用小白鼠试验初步证实。该菌株生物学性质稳定,对动物安全,对K_(88)、K_(99)和F_(41)强毒菌的攻击具有较强的保护作用。 相似文献
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粘附于小肠上皮细胞的能力,是产肠毒素大肠埃希氏杆菌(ETEC)的重要毒力因素。ETEC的表面抗原(又称粘附素,如K88抗原)可促进其粘附于仔猪肠上皮。K88~+菌株是新生腹泻的重要病原,而K88~-菌株在断奶后腹泻中占优势。业已发现,K88~+大肠杆菌并不能粘附于所有猪的小肠,有些猪的肠道中缺乏K88抗原的受体,它们对K88~+ETEC的实验和自然感染均有抵抗力。肠道受体通过单一位点上的两个等位基因(Adh~s 相似文献
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经碱变性酸酚法分离纯化的pMV99重组质粒,用SmaⅠ和BamⅢ消化,琼脂糖凝胶电泳分离,冻融法回收,得到4.2Kb的K99基因片段。该片通过DNA缺口翻译技术标记上α-32p,以此为探针,用菌落原位杂交对K99~+毒素源性大肠杆菌(ETEC)进行鉴定。探针与标准的K99~+ETEC杂交为阳性。从腹泻仔猪和犊牛离到ETEC。玻片凝集和反向间接血凝试验检测为K99抗原阳性。与探针杂交物均为阳性。K99基因探针与携带K88、987P,CFA/Ⅰ、CFA/Ⅱ菌毛的大肠杆菌杂交都呈阴性。以上试验表明,以DNA杂交技术测定K99菌毛抗原,结果可靠,特异性强,适于ETEC菌毛的鉴定。 相似文献