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1.
利用SSH技术分离甘蓝抗黑腐病相关基因的研究 总被引：2，自引：0，他引：2
采用抑制差减杂交(SSH)技术,构建甘蓝抗病品种A21经黑腐病菌诱导6、8、12、24h后的混合SSH文库。经反向Northern筛选,共获得87条高质量ESTs。通过NCBI中BLAST数据库比对分析发现,83个ESTs与已知蛋白或基因具有不同程度的同源性。 相似文献
2.
重庆市梁平县是全国三大名柚乡之一 ,其梁平柚生产栽培已逾 2 0 0多年历史。目前全县规模种植的主要有梁平柚和虎城柚 ,到 1 998年 ,柚已发展到 72 0 0ｈｍ2 、5 40万株 ,年产果 4.5万ｔ,产植 70 0 0万元 ,创利税 5 6 0万元。建成柚类生产基地镇乡 2 0个、专业村 1 0 5个、科技生产示范户 1 0 0 0户。 梁平虎城柚属沙田柚品系 ,单果重 80 0～1 40 0 ｇ左右 ,色橙黄、果皮光滑、酸甜爽口 ,耐贮藏。在长期的栽培选育中 ,梁平虎城柚出现了许多优秀的变异单株 ,其品系达十余个。在近 1 5年实施的以梁平柚、虎城柚为重点的“提纯选优”和“名… 相似文献
3.
辣椒Me3基因介导抗根结线虫相关基因的SSH分析 总被引：4，自引：3，他引：1
以辣椒（Capsicum annuum L.）双单倍体HDA149为试验材料,接种南方根结线虫（Meloidogyne incognita）12、24、36 h的根尖材料作为测验方(Tester),相应的未接种根尖材料作为驱动方(Driver),构建一个南方根结线虫诱导Me3 基因表达早期的抑制消减杂交cDNA文库,通过高密度点阵膜杂交差异筛选,获得了309条表达序列标签(EST)。通过测序,除去重复序列共得到259条EST序列,在GenBank上进行BLAST分析,30个EST片段未发现同源性基因,229个为具有同源性的已知基因,其中71个为功能未知的基因。在显微观察和抗性相关EST表达谱分析的基础上,推测在Me3基因介导的不亲和互作中,编码NBS-LRR结构的抗病基因参与了寄主对根结线虫的识别,激发了过敏性坏死反应的信号基因, 同时多种抗性相关的转录因子基因表达, 使以代谢为基础的防御反应和保护机制发挥抗线虫作用。 相似文献
4.
为分析柑橘果实贮藏过程中枯水相关特异基因的表达情况,以纽荷尔脐橙（Citrus Sinensis Osbeck）采摘后贮藏至略见枯水果实的果肉为测验方（Tester）,以刚采摘果实的果肉为驱动方（Driver）,采用抑制性差减杂交（Suppression Subtractive Hybridization,SSH）技术成功构建了贮藏果实差减cDNA文库,共获得656个阳性克隆。随机挑取克隆进行菌液PCR分析,插入片段长度主要集中在100 ~ 1 000 bp。成功对213个克隆进行测序,获得有效序列143条,经序列分析,共得到53条uniESTs序列。在NCBI基因库中对这53个uniESTs进行BLAST分析,比对结果参照MIPS的分类标准,按功能分为14类,其中参与代谢、能量及蛋白合成的ESTs最多,分别占到了全部ESTs的17%、11%和13%。 相似文献
5.
‘岩溪晚芦’椪柑果皮与果肉差减cDNA文库的构建及初步分析 总被引：4，自引：0，他引：4
以‘岩溪晚芦’(Citrus reticulata Blanco)成熟果皮和果肉为材料,采用抑制性差减杂交技术,成功构建了果皮（tester）与果肉（driver）的差减cDNA文库。结果显示：cDNA克隆外源插入片段大小介于100～500 bp之间。成功对411个克隆进行了测序,测序结果经与NCBI基因库中序列进行比较,377个EST 找到了同源序列,它们分属于126个基因,涉及到与色素合成、能量代谢、初级代谢、次生代谢、抗逆防御、蛋白代谢、信号转导、香味形成、果皮软化（衰老）、精油合成、抗氧化代谢等代谢途径和生理生化过程。还有一些基因涉及到三价铁螯合物、反转录转座子gag蛋白、查尔酮合成、硼离子转运、儿茶酚氧位甲基转移酶等功能。功能已知且没有重复的EST共有63个,占总数的49.2%。有5个基因共62个克隆虽在Blast搜索时找到了较高的同源性序列,但功能目前尚未明确,有待进一步深入分析。另有34个基因未搜索到同源序列,可能为新发现的基因。 相似文献
6.
利用抑制差减杂交技术分离茄子单性结实相关ESTs 总被引：1，自引：0，他引：1
以茄子（Solanum melongena）单性结实品系D-10和非单性结实品系03-2的子房cDNA分别为试验组（Tester）和驱动组（Driver）,利用抑制差减杂交（SSH）技术构建了正反两个SSH-cDNA文库,分别包含472和124个克隆。通过测序、序列拼接后,共获得384个Unique ESTs。将其与非冗余蛋白数据库进行BLASTx比对,在E值小于等于1e-10条件下,有257个ESTs能找到相匹配的蛋白质,其中121个ESTs与非冗余蛋白质数据库中已知功能的蛋白质具有高度的相似性。功能注释结果表明,具生物过程、分子功能和细胞组分的EST分别为107、102和119条。推测与单性结实相关的EST有5条：2条ESTs属于MADS-box转录因子家族,1条与生长素增长蛋白同源,1条属于P450还原酶系,1条属于MAPKK家族;另外136个ESTs代表了未知功能基因。 相似文献
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辣椒细胞质雄性不育系和保持系SSH-cDNA文库的构建 总被引：1，自引：0，他引：1
以辣椒细胞质雄性不育系A1、A5为驱动方(driver),以其相应的保持系B1、B5为测验方(tester),利用抑制差减杂交技术构建了1个辣椒细胞质雄性不育保持系表达基因的正向差减cDNA文库。从差减文库中筛选到189个阳性单克隆,经高密度点阵膜杂交筛选和测序分析,共获得了42条表达序列标签(ESTs)。BLAST比对分析后,得到了35条有比对结果的序列,其中包括26条已知功能基因序列和9条未知功能基因序列,已知基因功能多与基础物质代谢、胁迫应答、信号转导等方面有关;有7条ESTs没有比对结果,可能代表一些新基因。 相似文献
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砧木影响梁平柚树体生长的生理生化特性研究 总被引：1，自引：0，他引：1
砧木影响梁平柚树体生长的生理生化特性研究肖慈木，王丹，范昭鸣，李秀（四川省绵阳经济技术高等专科学校农艺系６２１０００）１材料与方法１．１材料试验在本校园艺场进行，供试品种为梁平柚，供试砧木为香橙、宜昌橙、枳和酒，以酸柚作对照。１９８３年育苗，１９８４... 相似文献
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以‘度尾文旦柚’正常果和果顶部开裂（3个等级）果实为材料,取果顶部的果皮进行转录组测序,筛选到与裂果具有潜在联系的基因。裂果果皮中半乳糖醛酸转移酶（催化聚半乳糖醛酸合成）和阿拉伯半乳聚糖蛋白（维持细胞壁结构）基因表达量显著降低,果胶降解酶类（聚半乳糖醛酸酶、果胶裂解酶）基因表达量显著提高,这些基因表达量的变化可能引起细胞壁机械力度降低,从而导致裂果。3–酮脂酰–CoA合成酶（催化蜡质成分中长链脂肪酸合成的酶）基因在正常果果皮中的表达量是裂果的5倍～6倍,裂果果皮中该基因表达量的降低可能引起果皮抗蒸腾能力减弱,导致果皮部位水分亏缺,甚至细胞凋亡及裂隙形成。高温和水分亏缺逆境响应基因（编码脱水响应元件结合蛋白、类钙调磷酸酶酶B亚基互作蛋白激酶、WRKY30、WRKY33和WRKY40）在裂果果皮中表达量均显著降低,表明高温和水分亏缺与裂果相关。 相似文献
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黄龙病诱导下椪柑SSH文库的构建与分析 总被引：1，自引：0，他引：1
以实生苗和平椪柑(Citrus reticulate Blanco)为材料,采用抑制性差减杂交技术,分别以感染黄龙病与未感染黄龙病的椪柑叶片为检测方(tester)和驱动方(driver),成功构建了黄龙病诱导的差减cDNA文库。挑选了100个阳性克隆并成功测序得到71条EST,经NCBI基因库同源性比对,有41条非冗余高质量EST序列找到了同源序列,另有10条非冗余未搜索到同源序列。同源序列的基因涉及抗逆防御、运输、能量代谢、光合作用、蛋白代谢、信号转导、抗氧化等代谢途径和生理生化过程。值得注意的是文库中有由病原引起的韧皮部相关的凝集素蛋白的前体积累。挑选了2条进行Q-PCR定量分析,结果表明感病1周表达量增强不大,2周后tester的表达量明显高于driver,说明材料感病早期这些基因表达增强。 相似文献
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为了验证百合鳞茎休眠解除过程中基因表达的差异性，以细叶百合休眠鳞茎和休眠解除鳞
茎为材料，利用抑制消减杂交技术构建了百合鳞茎休眠及解除正、反向抑制消减文库。文库富集了差异
基因，消减效率符合要求，插入片段集中于250 ~ 1 000 bp 之间。对正、反向文库随机挑选阳性克隆测序，
各获得100 个表达序列标签（EST），在NCBI 上进行BLASTx 分析，并用KOBAS 系统将获得的unigene
定位到Pathways 中。分析结果表明，休眠文库ESTs 功能主要涉及胁迫响应方面，如苯丙氨酸代谢途径、
促分裂素原活化蛋白激酶途径等与休眠有关。休眠解除文库在糖代谢、激素响应及信号转导方面表达量
较高，如亚油酸代谢途径、淀粉及蔗糖代谢途径等参与了休眠解除过程。 相似文献
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Xie Jirong Xiong Yunhai Liang Guolu Cheng Zaiquan Tang Kaixue Huang Xingqi 《Scientia Horticulturae》2008
To investigate the floral fragrance new genes, scent mutant of rose was used here. The suppressive subtraction hybridization (SSH) technique and micoarray analysis of the clones were used to isolate the cDNA fragments, which showed differential expression between the rose scent mutant ‘Wangriqinghuai’ and wild type ‘Jinyindao’ (Rosa × hybrida), and RT-PCR was used to identify up-regulated expressed genes. 16 positive contigs of JSSH were obtained. Some ESTs such as RcOMT1, RcOMT2, RhMYB92 and RhGP1 were known to regulate scent metabolism, and 5 ESTs with no homology in NCBI may represent new genes involved in rose flower fragrance metabolism. SSH technique combined with cDNA micoarray would be useful for analysis and isolation of the genes related to rose floral scent. 相似文献
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为了研究柑橘衰退病晚期应答的分子机理,利用经典的抑制差减杂交技术,以感染柑橘衰退病3年后的‘不知火’杂柑实生苗叶片组织的c DNA为测试方,以脱毒的‘不知火’实生苗叶片组织的c DNA为驱动方进行差减杂交,构建了柑橘衰退病诱导的正向抑制差减c DNA文库。随机挑取此文库中210个阳性克隆进行测序,获得了192条有效序列。将这些EST序列聚类拼接后,共获得77条非重复序列。对这些EST进行GO和KEGG分析,发现这些EST的功能主要与胁迫及防御、代谢、转录、转运、蛋白命运等途径相关。用实时定量RT-PCR验证了其中4个基因:几丁质酶基因、茉莉酸响应基因的转录抑制因子1基因(JAZ1)、钙调素结合蛋白基因、咖啡酸—氧甲基转移酶基因,结果表明在衰退病的诱导下,‘不知火’杂柑叶片中这4个基因的表达量均有明显提高,说明这些基因可能参与了‘不知火’杂柑叶片晚期衰退病应答。JAZ1基因的上调表达表明可能宿主衰退病晚期应答过程中的诱导系统抗性受到了抑制。 相似文献
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利用实时荧光定量PCR技术,研究茄子单性结实SSH-c DNA文库中的96条EST序列在单性结实自交系和非单性结实自交系果实发育过程中的表达模式。分析表明,在低温条件下,相对表达量有显著差异的EST序列有31条,总体上调表达的EST序列有17条,总体下调表达的EST序列有14条。通过NCBI对EST序列进行Blastx比对,得到与其同源性高的序列信息。其中5条EST与抵御低温相关,6条EST与植物激素代谢相关,多条EST与植物代谢过程中的蛋白质和碳水化合物合成相关,1条EST无比对结果,可能为新基因。差异表达序列可作为研究茄子单性结实和耐低温的候选基因。 相似文献
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利用SSH分离TDZ诱导金钗石斛成花相关基因 总被引：1，自引：0，他引：1
以金钗石斛（Dendrobium nobile Lindl.）腋芽为材料,利用抑制消减杂交（SSH）技术构建了TDZ处理后金钗石斛腋芽的正向和反向SSH文库。通过PCR和反向Northern杂交验证后,得到的正向文库的314个阳性克隆和反向文库的59个克隆测序后经过聚类,最终得到39条受TDZ正向调控的EST序列,以及21条受其反向调控的EST序列。对其中某些差异基因进行半定量RT-PCR,结果显示这些基因的表达受TDZ的影响。利用Blastn和Blastx进行比对分析,其中20个没有同源序列,属于未知功能基因。其余序列的同源基因编码的产物参与包括光合作用、合成代谢、转录调控等多种生物学过程。在反向文库中分离到1个MADS-box基因的同源序列和1个Sos同源基因,而正向文库中存在多个反转录转座子,这些结果表明TDZ可以影响开花过程中的某些转录因子和信号基因的表达,进而促进金钗石斛开花。 相似文献