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1.
采用响应面分析方法,对肠毒素大肠杆菌(EnterotoxigenicEscherichiacoli)K88黏附素亚单位重组蛋白FaeG诱导表达的主要影响因素进行了优化研究。响应面分析结果表明:不同的诱导时机、IPTG浓度及诱导时间对目的蛋白表达量均有显著影响(P<0.01),三因素之间的交互作用对目的蛋白表达量也有极显著的影响(P<0.01)。通过进一步的模拟优化,得到了最佳诱导表达条件为培养BL21(K88ac)重组菌株2.5h后,加入IPTG至终浓度0.8mmol/L,37℃诱导培养5h。采用以上参数进行验证实验,得到目的蛋白在全菌蛋白中的表达含量为35.4%;与单次单因子法得到的最佳表达条件下的表达量(27.5%)相比,提高了28.7%。采用响应面分析法可以确定IPTG的诱导时机、诱导浓度及诱导时间等多个因素对重组蛋白在大肠杆菌中表达的最佳作用条件,有利于提高目的蛋白的表达量。 相似文献
2.
从广西6个代表性鸡场分离出132株大肠杆菌,分离率平均为37.82％,其中81.82％的菌株分离自2～8周龄的鸡;经血清学鉴定,流行的血清型主要有11种,其中O_(50)、O_(133)、O_(15)、O_(90)、O_(146)、O_(92)及O_(84)等7种属首次报道;分离物经10项生化指标试验,有99.24％的菌株在醋酸铅琼脂上有轻度的H _2S产生,其余9项反应均符合典型大肠杆菌的特征;经电镜观察,发现O_1、O_(50)、O_(78)、O_(84)、O_(88)、O_(90)和O_(92)等7种血清型有菌毛,在培养72小时后,菌毛的数量及长度均比培养24小时者有所增加;主要血清型分别对鸡进行皮下和气管内两种途径的致病性试验,结果有10种是致病性的,而且还证实菌毛与呼吸道感染的致病性有直接的关系。 相似文献
3.
用电镜检查广西分离的鸡致病性大肠杆菌 O_(60),O_(7)和 O_(8)菌株,在37℃和43℃培养均可见到菌毛,低于28℃不产生菌毛。用营养肉汤,Minca 培养液或最低限量培养液培养,冰浴高速磁力搅拌和MgCl_2反复沉淀提取,可得到较纯的菌毛。经测定,O_(60),O_(7)和 O_(8)菌毛蛋白分子量分别是15500,17500和17800。1日龄雏鸡用 O_(60)菌毛亚单位油乳苗皮下注射和菌毛悬浮液气雾免疫,均可保护鸡免受大肠杆菌对气囊的攻击。O_(60),O_(7)和 O_(8)菌株菌毛之间缺乏显著的交互保护。雏鸡在1日龄和10日龄用 O_(60),O_(7)和 O_(8)多价菌毛油乳苗免疫,21日攻毒时,可抵抗3种菌株侵袭气囊造成的急性呼吸道感染。 相似文献
4.
参考GenBank上发表的猪圆环病毒Ⅱ型(porcine circovirus2,PCV2)全基因组序列,设计一对引物,通过反向PCR技术扩增出9株PCV2流行株的全基因,并进行了序列测定与分析,结果表明:9株PCV2的基因组全长为1768bp或1767bp,同源性比较发现,本研究的9株PCV2之间的核苷酸同源性为95.6%~100%,与GenBank上已发表的PCV2分离株之间的同源性为95.1%~99.8%,与法国和新西兰代表株的亲缘关系较近,与美国、加拿大和澳大利亚代表株的亲缘关系较远。所得9株PCV2的ORF2核苷酸及其所推导的氨基酸序列同源性分别为93.1%~100%和91.8%~99.6%,存在较大的变异。 相似文献
5.
从10kGy60Coγ射线辐照处理的新疆戈壁土壤中分离到一株耐辐射微生物I-7R,该菌菌落为橙红色革兰氏阳性球菌。最适生长温度为30℃,(G+C)mol%含量为67.5%,不具有氨苄青霉素、氯霉素、四环素、卡那霉素、潮霉素、利福平及壮观霉素等抗性。UV辐射生存曲线显示,I-7R菌株与大肠杆菌K-12相比,具有较强的紫外辐射抗性。16S rDNA序列比较分析表明I-7R菌株与Kocuria rosea、K.erythromyxa以及K.polaris同源性达到99%。结合I-7R菌株生理生化试验结果,该株菌归属于考克氏菌属(Kocuria),并与Kocuria rosea最为相近,暂命名为K.rosea I-7R。 相似文献
6.
一株信鸽新城疫强毒的分离鉴定和分子特性分析 总被引：9，自引：0，他引：9
从发病鸽的体内分离到一株新城疫病毒（Newcastle Disease Virus，NDV）PB9601，经病毒蚀斑克隆纯化后动物回归试验可产生典型的NDV病变，其MDT、ICPI、IVPI分别为50.5、1.65和2.36，表明为NDV强毒。对其F和HN蛋白分别进行基因克隆测序，发现F蛋白多肽裂解位点的序列为111 KRQKRF 117，符合鸽源NDV强毒氨基酸基序。F基因分型及同源性比较显示：PB9601与YN-03、TW-98等鸽源毒株属于VI型，其F基因与基因Ⅱ型疫苗株LaSota氨基酸同源性为88.6%，与基因Ⅰ型疫苗株V4的氨基酸同源性为91.0%，与基因Ⅸ型传统强毒F48E9等的氨基酸同源性为90.6%；与国内鸽分离株GX-05、YN-03、TW-98的氨基酸同源性分别为92.1%、95.5、98.6%、与国外鸽分离株Capital3-97、Tigre6-99、1166-00、IT-227-82、2736-00的同源性分别为93.3%、91.9%、94.6%、95.1%、93.6%。HN基因氨基酸同源比较显示：PB9601与LaSota、F48E9、V4等的氨基酸同源性分别为87.2%、89.2%、87.6%；与国外鸽分离株1166-00、IT-227-82、2736-00的同源性为93.7%、95.5%、92.3%。由此看出PB9601与国内外分离株、LaSota、F48E9、V4等相比，具有明显的地域性和种属性。 相似文献
7.
具矿物风化效应伯克霍尔德氏菌的筛选与生物学特性研究 总被引：1，自引：1，他引：0
从钾质粗面岩表面和野青茅根、根际和非根际土壤中分离筛选到10株具矿物风化效应的伯克霍尔德氏菌,通过菌株16S r DNA序列分析,10株伯克霍尔德氏菌分别属于6个种群,同时研究了伯克霍尔德氏菌对钾长石和黑云母的溶解效应与菌株的生物学特性。结果表明,分离自不同生境伯克霍尔德氏菌对硅酸盐矿物的风化能力不同,供试伯克霍尔德氏菌从钾长石中释放出的Si、K、Ca分别比对照增加了23.7%~119%、12.6%~40.3%和18.7%~57.9%,从黑云母中释放出的Si、K、Ca分别比对照增加了86.4%~876%、5.6~14.6倍和70%~147%;其中菌株g6从钾长石中释放Si、K、Ca的能力最强,菌株G31从黑云母中释放K、Ca的能力最强,而菌株R22从黑云母中释放Si的能力最强。在钾长石和黑云母存在条件下接种伯克霍尔德氏菌处理的发酵液pH分别为3.05~4.67和7.03~7.43。不同伯克霍尔德氏菌产铁载体能力不同,而且对温度、pH和盐浓度具有一定的耐受性。 相似文献
8.
以伪狂犬病病毒GB株细胞培养物为模板，用PCR方法扩增蛋白激酶(PK)基因，对其进行了克隆、序列测定，并与PRV NIA-3株、Ka株和其他α-疱疹病毒进行了同源性比较。结果显示：所扩增的PK基因片段长1396bp，该片段包含一个开放阅读框(ORF)，长1005bp，编码由334个氨基酸组成的蛋白质。与NIA-3株及Ka株的核苷酸同源性为98．4％和97．5％，基因编码区氨基酸序列的同源性为98．2%和96．4％。具有真核细胞丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶氨基酸亚结构域特征序列，而且α-疱疹病毒PK基因具有一些特征性的、共有的氨基酸序列。为今后研究PK基因的功能和构建PK缺失株奠定了基础。 相似文献
9.
为明确口蹄疫病毒(Foot-and-mouthdisease virus,FMDV)持续感染与病毒基因变异潜在关系,研究FMDV持续感染分离株结构蛋白VP1和非结构蛋白3ABC基因在牛体内的动态变化.实验用O/Akesu/58毒株以104ID50/mL剂量舌面穿刺接种5头黄牛,出现临床或亚临床症状后痊愈动物会成为可能的FMDV带毒牛.用探杯定期采集实验牛咽喉部黏性液体(O/P液),接种BHK-21细胞增殖病毒后共分离到12株毒株.RT-PCR扩增持续感染分离毒株VP1和3ABC基因,克隆测序发现,所有持续感染分离毒株的VP1基因核苷酸和氨基酸同源性都在98%以上,且没有碱基缺失或插入现象;但与O/Akesu/58的核苷酸同源性仅为85%左右,氨基酸同源性也仅为90%.持续感染分离株VP1基因有多处位点发生突变,其中有16个核苷酸位点发生一致突变,但只有两个位点造成氨基酸突变(I56→T、A210→E);在所有FMDV持续感染分离毒株之间有4个核苷酸位点和3个氨基酸位点发生了颠换.非结构蛋白3ABC基因较为稳定,仅有13个核苷酸位点和5个氨基酸位点的颠换,与宿主嗜性相关的3A基因也没有缺失.推测FMDV持续感染的形成与主要结构抗原基因VP1和宿主嗜性相关基因3ABC变异的关系不显著. 相似文献
10.
耐铜苏丹草根内生细菌的分离筛选及其生物学特性研究 总被引：1，自引：1，他引：1
从生长在铜矿废弃地土壤中的Cu耐性苏丹草根中分离筛选到二株产1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC)脱氨酶内生细菌K1-6和K3-9菌株,并对菌株生物学特性进行了研究。菌株K1-6和K3-9具有较强的Cu抗性和多种抗生素抗性,菌株K1-6和K3-9能够溶磷和分泌吲哚乙酸(IAA),另外,菌株K3-9还能够产生铁载体和精氨酸脱羧酶,菌株K1-6和K3-9对温度、p H和盐浓度具有一定的耐受性,经16S r DNA序列分析,菌株K1-6和K3-9分别被鉴定为根瘤菌属(Rhizobium sp.K1-6)和肠杆菌属(Enterobacter aerogenes K3-9)。采用平皿培养试验研究了菌株K1-6和K3-9对生长在不同浓度Cu(0、4 mg/L)环境中的苏丹草的生长和吸收Cu的影响。结果表明,接菌处理苏丹草根部和地上部干重分别比对照增加了10.6%~45.5%和13%~40%,差异达显著水平(P0.05);接菌株K1-6处理苏丹草根部和地上部Cu含量比对照增加了46%和85%(P0.05),而接菌株K3-9处理苏丹草根部和地上部Cu含量与对照相比没有显著差异。另外,接菌株K1-6处理苏丹草根部和地上部总Cu吸收量比对照增加了88%和114%(P0.05),接菌株K3-9处理苏丹草根部总Cu吸收量比对照增加了44%(P0.05)。另外,接菌株K1-6和K3-9处理的苏丹草根部吸收的Cu是地上部吸收Cu的16~23倍。研究表明,分离自耐铜苏丹草根部的内生细菌具有多种植物促生特性,能够显著促进苏丹草的生长、提高苏丹草对Cu的耐受性,并强化苏丹草根部对Cu的富集能力。另外,不同的内生细菌对苏丹草的生长、富集和耐受Cu的影响不同。 相似文献
11.
奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌临床分离株生化特性与菌体蛋白免疫原性分析 总被引：1，自引：0，他引：1
摘要：病原学调查发现金黄色葡萄球菌是奶牛乳腺炎的最主要致病菌之一。从53株金黄色葡萄球菌乳样分离株中挑选了培养和形态典型的六株进行生化试验和传代稳定性试验，进一步研究这六株菌的凝固酶、溶血素等致病性因子和耐药性。对菌体裂解产物进行蛋白电泳图谱分析发现菌体蛋白条带具有很高的相似性,TQ-1株电泳蛋白条带密度较其它几株高。用其中四株生化典型、传代稳定、致病因子较多的菌株免疫兔，制备高免血清，分析全菌抗原的蛋白转印图谱，发现XG-2株在52KD处有特殊保护性抗原条带。综合本文各试验结果，确定以TQ-1和XG-2株为疫苗候选株。 相似文献
12.
烟草根际土壤中解钾细菌的分离与多样性分析 总被引：1，自引：0，他引：1
土壤中含有丰富的钾元素,但主要以缓效态形式存在于钾长石或云母等硅酸盐矿物中,不能被作物直接吸收利用。解钾微生物能溶解硅酸盐矿物中的钾,提高土壤中作物可利用钾的含量,有望缓解我国钾肥短缺的现状。本研究利用选择性培养基,从烟草根际筛选钾细菌,基于16S rDNA序列分析烟草根际土壤解钾细菌的多样性,通过测定解钾细菌的解钾效能及对烟草的促生作用,筛选有应用潜力的优良解钾细菌菌株。结果表明,从四川、湖北和山东烟区烟草根际土壤分离获得的27株解钾细菌,在解钾固体培养上溶钾圈直径为0.11~0.30 cm。16S rDNA序列分析表明,烟草根际土壤解钾细菌主要包括变形菌门γ亚群(Gammaproteobacteria,85.18%)、变形菌门α亚群(Alphaproteobacteria,3.70%)、变形菌门β亚群(Betaproteobacteria,3.70%)、放线菌门(Actinobacteria,3.70%)和拟杆菌门(Bacteroidetes,3.70%),其中克雷伯菌属(Klebsiella)为优势菌属(66.67%)。27个菌株均有一定的解钾能力,解钾活性为0.59~4.40 mg.L–1。参试菌株均对烟草有一定的促生作用,利用解钾细菌菌液处理烟株20 d后,与对照相比,株高增加0.97%~38.64%,最大叶长增加4.40%~31.02%。本研究筛选出的菌株XF11、GM2、JM19和GL7具有较高的解钾活性和促进植物生长的能力,展现了良好的应用潜力。 相似文献
13.
传染性法氏囊病病毒YL051、YL052的分离及其VP2基因高变区序列的比较分析 总被引：10，自引：0，他引：10
应用鸡胚绒毛尿囊膜接种的方法,从一个疑患传染性法氏囊病的鸡群中分离到2株传染性法氏囊病病毒(IBDV)(分别命名为YL 051和YL 052);利用反转录-聚合酶链式反应技术扩增分离株VP 2基因的高变区序列,并采用限制性内切酶分析技术和核苷酸序列测定技术,对分离株进行致病型鉴定及其基因差异的分析。结果表明:分离株YL 051属IBDV的超强毒株(vvIBDV),而YL 052株既具有强毒株的特征即七肽区(SW SA SG S)和279D,但同时也具有284T的弱毒株特征,可能属于介于强毒株与弱毒株之间的一个中间型。与国内外参考毒株的序列比较分析发现:YL 051与其他vvIBDV的核苷酸同源性达94%~97%;YL 052则与经典毒株STC、疫苗株B 87的核苷酸同源性均为94.3%。 相似文献
14.
J L Tardió K O'Brien T Latt 《Journal of the Association of Official Analytical Chemists》1988,71(3):582-584
A total of 463 fecal coliform positive isolates obtained from shellfish and related samples gave typical Escherichia coli IMViC reactions. E. coli identifications for 458 (99%) of these isolates were confirmed using a combination of the Automicrobic System (AMS) and the API 20E system (reference system). The AMS (test system) identified 433 isolates as E. coli; the remaining 25 (5%) isolates were identified as E. hermanii by the test system and as E. coli by the reference system. Additional tests performed on the isolates identified as E. hermanii confirmed those AMS identifications to be incorrect. 相似文献
15.
本研究应用RT-PCR方法扩增出分离自广西的26株鸡传染性支气管炎病毒（IBV）以及参考株M41和疫苗株H120、Ma5和4/91的3＇端非编码区（3＇UTR）的cDNA,并对其进行了克隆、序列测定、比较及其系统进化分析。序列分析结果表明,与Beaudette株的3＇UTR序列相比较,26株分离的IBV中有1株和3株的分离株3＇UTR序列分别插入了23个和2个碱基,另外有12株、6株、1株、2株和1株的分离株3＇UTR序列分别缺失了1个、2个、22个、29个和84个碱基,不同毒株之间碱基数量最大相差达107个碱基。系统进化分析结果表明,26株分离株可分为4群,其中21株属于第Ⅰ群,与经典疫苗株H120的核苷酸同源性均较低（54.4%～75.5%）;3株与4/91同属于第Ⅱ群;1株与H120同属于第Ⅲ群;另外1株单独属于Ⅴ群。综上所述,广西流行IBV的绝大部分毒株在3＇UTR序列上与目前常用的疫苗株相比都发生了很大的变异,而且存在多种形式的碱基缺失和插入现象。由此,我们认为流行株的变异可能是疫苗不能提供有效保护的主要原因。 相似文献
16.
Two hypotheses that antibiotic-resistant nodule isolates from uninoculated soybeans grown in a strongly acidic soil were naturally occurring rhizobia which had acquired resistance to spectinomycin and streptomycin or were contaminants from adjacent, inoculated treatments, were tested in laboratory experiments. Soybean nodule isolates (166) as well as 48 cowpea and 89 Rhizobium japonicum strains were used in tests of resistance to six concentrations (0–500 μg ml?1) of kanamycin, spectinomycin and streptomycin, tolerance of stresses of pH 4.6, with or without 50 μm Al, and serological cross-reactivity.More strains from the strongly acidic soil were resistant to the antibiotics than from slightly acidic soils, but resistance to antibiotics did not necessarily entail resistance to pH 4.6 or to 50 μm Al. Twenty-three nodule isolates which were resistant to spectinomycin or streptomycin cross-reacted with antisera of the inoculum strains, indicating that they were contaminants. None of 59 antibiotic-sensitive nodule isolates from uninoculated plants and none of 31 from inoculated plants cross-reacted with the antisera. All 53 antibiotic-resistant isolates from nodules of plants in inoculated plots cross-reacted with test antisera, indicating stability of the antibiotic markers.Cowpea rhizobia were generally more resistant to the antibiotics and more tolerant of pH 4.6 and 50 μm Al than were R. japonicum. Among strains of R. japonicum, slow growers were more resistant to antibiotics than moderately fast growers. 相似文献
17.
Ledesma-Osuna AI Ramos-Clamont G Guzman-Partida AM Vazquez-Moreno L 《Journal of agricultural and food chemistry》2010,58(22):12000-12005
Chitin neoglycoconjugates (BSA-CO) were obtained by the conjugation of bovine serum albumin (BSA) with chitin oligosaccharides (CO) through the Maillard reaction (nonenzymatic glycation). CO produced by acid hydrolysis of chitin were fractionated using an ultrafiltration membrane system (1-3 kDa cutoff). The Maillard reaction was carried out by heating a freeze-dried mixture containing BSA and CO at 60 °C (under 43% relative humidity for 6 and 12 h). BSA-CO were characterized by available amino groups content, intrinsic tryptophan emission spectra, gel electrophoresis, and mass spectrometry. Biological assays included interaction with wheat germ agglutinin (WGA) and with bacterial adhesins of Escherichia coli K88+ and Salmonella choleraesuis. Glycation of BSA was revealed by reduction of available amino groups and fluorescence intensity and also retarded migration through SDS-PAGE. Conjugation of BSA with chitin oligomers appeared to be time dependent and was confirmed by mass spectrometry, by which molecular mass increase for monomers and dimers was observed. Monomers were estimated to contain either one or two glycation sites (at 6 and 12 h of treatment, respectively), with one or two tetrasaccharide units attached. Consequently, dimers showed two or four glycation sites. BSA-CO presented biological recognition by WGA and E. coli K88+ and S. cholerasuis adhesins. The strategy used in this work represents a simple method to obtain glycoconjugates to study applications involving protein-carbohydrate recognition. 相似文献
18.
李建强 《农业生物技术学报》2007,15(4)
摘要:对猪源冠状病毒PEDV DX株纤突蛋白基因进行了克隆与测序。结果表明该基因核苷酸序列长为4152 nt, 推导氨基酸序列为1383aa，与比较毒株氨基酸同源性都在90%以上。系统发生树分析结果表明，比较毒株可分为3个基因群，而且每个群的毒株均来自同一个国家。利用生物软件分析结果表明PEDV发生着微小的变异，尤其在韩国变异明显，而DX株与中国JS-2004-2株亲缘关系很近。 相似文献
19.
为揭示丛枝菌根真菌（Arbuscular mycorrhizal fungi，AMF）对芦竹耐镉（Cd）胁迫的作用及其机理，采用大棚盆栽试验，利用丛枝菌根真菌（AMF）摩西管柄囊霉（Funneliformis mosseae，FM）、根内根孢囊霉（Rhizophagus intraradices，RI）、地表球囊霉（Glomus versiforme，GV）进行接种试验，研究了在Cd胁迫下接种AMF对芦竹生长、光合、矿质营养的影响。结果表明：AMF能够显著改善Cd胁迫下芦竹的生长状况，与对照相比，接种处理芦竹的株高增加19.09%~27.98%，叶长增加12.18%~31.06%，叶绿素相对含量SPAD值增加8.55%~9.36%，地上和根系生物量分别增加20.08%~31.41%、12.24%~24.12%，最大净光合速率增加7.08%~32.12%，芦竹根系全P含量增加30.26%~46.05%。接种处理后芦竹地上Cd含量介于68~105.97 mg/kg之间，显著高于对照处理（42.20 mg/kg），根系Cd含量介于113.07~221.47 mg/kg之间，显著高于对照处理（46.47 mg/kg），且根系Cd含量显著高于地上部。Cd胁迫下不同AMF菌种对芦竹产生的效应有差异，其中，RI处理对芦竹株高、叶长促进效应最好，经GV处理的芦竹全N、全P、全K含量以及Cd含量最高。Cd胁迫下接种AMF能促进芦竹的生长，增强其光合作用，提高全N、全P、全K吸收量，同时增强了芦竹对Cd的吸收。该研究表明芦竹丛枝菌根共生体对重金属Cd具有较强的固持作用，在Cd污染土壤修复中具有潜在应用价值。 相似文献