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用台盼兰—姬姆萨染色检测家畜精子顶导反应的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
本文探讨了用台盼兰—姬姆萨染色检测家畜精子顶体反应的可行性。用肝素或钙离子载体诱发精子顶体反应。根据染色结果将精子分为四类:a)核后帽部不着色或淡青色,顶体不着色或部分紫红色(有顶体反应活精子);b)核后帽部暗青色.顶体部不着色或部分暗红色(有顶体反应死精子);c)核后帽部不着色或淡青色,顶体部紫红色(无顶体反应活精子);d)核后帽部暗青色,顶体部暗紫红色(无顶体反应死精子)。有顶体反应活精子百分率与仓鼠卵穿透率呈强正相关。从而证明台盼兰—姬姆萨染色是检测家畜精子顶体反应的有效手段,并能预测获能处理后精子的受精能力。 相似文献
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家畜精子在受精过控中,顶体起着十分重要的作用。因此,顶体形态、结构变化及功能的研究一直比较活跃。至今仍有许多问题有待揭示。一、结构与功能精子结构的研究始于上个世纪。随着技术的不断改进,方法不断更新,研究亦不断深入。但直到本世纪50年代初,对精子顶体结构的认识仍未能最后统一。Hancock(1952)采用多种染色方法,研究了多种不同处理后精子的顶体,并用电镜照像比较精子顶体的形态、结构。他发现无帽精子数与死精子数呈正比;精子头部的裸露与精子死亡密切相关。而所有的活精子顶体都与头部紧密相连。只有死精子才有松散 相似文献
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为了测定活精子的顶体状况,试验将猪、羊精子用常用的苯胺黑—四溴荧光素(曙红)法(NE)和姬姆萨法(G)相结合,进行染色评定。结果,公猪精子用NE和NEG染色后,其中活精子比例间差异不显著。将经NEG染色评定的活精子比例与羧基双乙酸盐(carboxyfluorescein diacetate CFDA)/propidi- 相似文献
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<正> 1.材料与方法①精液样本:中国荷斯坦牛颗粒冻精(山西省种牛站)。②染色原理:利用活精子对特定染料不着色而死精子着色的特点来区分死精子和活精子,从而得出存活率指标。通过油镜检精查子的形态和顶体,统计出畸形率和顶体完整率指标。③染色试剂:刚果红、苯胺兰、伊红、美兰、10%葡萄糖、柠檬酸钠、姬姆萨染液(姬姆萨原液:磷酸缓冲液:蒸馏水=2:3:5)、甲醇。④制片方法:先将冻精用2.9%的柠檬酸钠解冻,并置于37℃温度下,孵育2小时染片。方法1(常规染色法):(1)存活率:采用伊红法,取精液和5%伊红溶液各一滴,置于清洁载玻片一端,迅速混合均匀,制成抹片,在400～600倍显微镜下观察。 相似文献
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使用荧光染色和流式细胞术检测山羊精子 总被引：1，自引：0，他引：1
分别使用PI(碘化丙碇),FITC-PSA(异硫氰酸荧光素络合豌豆凝集素)和RH123(罗丹明)对山羊冷冻精子进行染色,再使用流式细胞仪进行检测、分析。试验发现,对于山羊的冷冻精子,PI染色阴性的为质膜完整的精子;FITC-PSA染色阴性的可能为顶体完整的精子,染色FITC-PSA+和FITC-PSA++,可能分别为顶体反应中的精子和顶体破损精子;RH123+应为线粒体无活性精子,有绿色荧光可能是因为染料残留在细胞膜上导致,而RH123++可能应为线粒体有活性的活精子。不同个体羊的精子对于低温敏感度不一样。不同个体羊之间的冻精顶体完整率、质膜完整率、线粒体有活性的精子比率之间差异显著,据此应选择合适的山羊个体进行精液冷冻。 相似文献
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为了探讨超低温冷冻对德国牧羊犬透明质酸酶(HYD)、顶体酶(ACE)和酸性磷酸酶(ACP)活性的变化,试验分别对冷冻前后德国牧羊犬精子采用改良明胶底膜法、改良BNPNA法、磷酸苯二钠法对精子HYD、ACE和ACP活性进行研究。结果表明:超低温冷冻前后精子HYD、ACE和ACP活性极显著降低(P0.01);解冻后精子3种顶体酶类活性分别与精子活率和顶体完整率呈正相关,其中ACE活性与顶体完整率呈极显著正相关,相关系数为0.487(P0.01)。3种顶体酶类活性与畸形率均呈显著负相关(P0.05),ACE活性与精子顶体完整率的相关系数为0.487,相关度大于HYD(0.439和0.459)和ACP(0.440);而HYD活性与精子活率的相关系数为(0.404和0.423),相关度大于ACE(0.377)和ACP(0.369)。说明超低温冷冻使德国牧羊犬精子3种顶体酶类活性均显著降低;3种顶体酶类活性分别与精子活率和顶体完整率呈正相关,与畸形率呈负相关。 相似文献
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同种和异种抗精子抗体血清对牛精子活力和顶体完整性的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
8头黑白花成年公牛,每头采集3次精液,利用精子死活染色法和顶体染色法,评定不孕母牛抗精子抗体阳性血清(同种血清组,试验组Ⅰ)和兔抗牛精子抗体免疫血清(异种血清组,试验组Ⅱ)在0.2、4及6小时对精子活力和顶体完整性的影响,研究抗精子抗体引起牛不孕的可能机理。结果表明,在2小时,试验组Ⅰ和Ⅱ的精子活率显著低于处女牛血清组(对照组Ⅲ)和空白对照组(对照组Ⅳ,P<0.05或0.01),但在4、6小时,各组之间的差异不明显(P>0.05)。2、4和6小时对照组Ⅲ、Ⅳ的精子顶体完整率均明显高于试验Ⅰ、Ⅱ组(P<0.01或0.05)。在6小时前,相同时间间隔时,各组精子活率高于顶体完整率,随着作用时间延长,精子顶体完整率的下降幅度大于精子活率。试验表明,抗精子 抗体血清除能影响精子活力外,主要损伤精子顶体的正常形态。 相似文献
9.
将冷冻保存的公牛精子解冻,冲洗,以高浓度悬浮于K-3培养液中。K-3溶液含有NaCl,CaCl_2和NaHCO_3。将此悬液预先孵育在39.5℃密闭玻璃管中,然后以台盼兰-姬姆萨(简称TG)染色,用田鼠试验以确定发生了顶体反应的精子。TG染色的涂片显示出四种类型不同着染的精子。发现仅在顶体后区未着色或淡兰色,以及顶体区未着色或部分浅红—深红着色的这两种精子的百分率与去透明带田鼠卵的穿透率之间有显著的正相关关系(r=0.732,P<0.05,n=12)。这样的精子被认为是发生了顶体反应的。公牛A与B,其精子样品预先分别在K-3培养液中孵育2小时和1～2小时,得到了很高的精子顶体反应的百分率(A 37％,B 43.8％～49.2％)和较高的卵子穿透率(A91.7％,B85.4％～97.7％)。这一结果表明公牛精子培养在只含NaCl_2、CaCl_2、NaHCO_3的培养液中,密封玻璃管中39.5℃孵育,即可发生顶体反应。TG方法可用于鉴定发生了顶体反应的精子。 相似文献
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《广东畜牧兽医科技》1982,(3)
精子活率检查是计算份额精液中死与活精子的百分比例。国内外现实行的是液态精液低于0.6级(60％直线前进活精子,40％死精子)冷冻精液低于0.3级(30％直线前进活精子,70％死精子)者属于废弃的不合格精液。一般而言,受胎率与精子活率呈正相关。为此,计算精子活率是评定精液品质的必要内容之一。国内外评定精液活率主要有三种方法。报导较多的死活比例染色检查法,其次是血 相似文献
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《中国养兔杂志》2018,(5)
本试验的目的是分析在新西兰兔精液冷冻保存稀释液中分别添加不同浓度的海藻糖、透明质酸、维生素E(Ve)、超氧化物歧化酶(SOD)对兔精液冷冻保存效果的影响,以冻后精子活率、质膜完整性、顶体完整率等作为质量评定指标,筛选出效果较好的新西兰兔精液的冷冻保护剂种类及浓度。结果表明,精液冷冻保存稀释液中添加3种浓度的海藻糖均未提高兔精液冷冻后的精子活率、质膜完整率和顶体完整率(P0.05);添加0.5%和1%的透明质酸提高了兔精液冷冻后的精子活率(P0.05),但各组间质膜完整率和顶体完整率无显著差异;添加2 g/L Ve提高了兔精子4℃平衡后的活率、冷冻后精子活率、质膜完整率和顶体完整率(P0.05);添加4 000 IU的SOD提高了兔精子4℃平衡后的活率、冷冻后精子活率、质膜完整率和顶体完整率(P0.05)。结果证实,在新西兰兔精液冷冻保存稀释液中添加适宜浓度的Ve和SOD可提高兔精液冷冻后的精子活率、质膜完整率和顶体完整率。 相似文献
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精液品质检测中，精液的存活率、精子畸形率、顶体完整率是判定精液品质优劣的常用指标。在以往检测过程中，通常采用常规染色法，即每测一个指标时进行一种染色操作，这样操作过程繁琐、耗时、耗力、耗材。本试验旨在对不同染色方法进行比较，从中寻找出一种操作简便、染色效果较佳的染色方法，这样即可省去许多步骤，也可减少多次实验操作造成误差。１材料与方法１．１精液样本：中国荷斯坦牛颗粒冻精（山西省种牛站）。１．２染色原理：利用活精子对特定染料不着色而死精子着色的特点来区分死精子和活精子，从而得出存活率指标。通过油镜… 相似文献
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为研究经过冷冻干燥处理的粉剂稀释液与原稀释液对绵羊精液保存的效果,采集6只盘羊与巴什拜羊杂交公羊的精液,分别用粉剂稀释液(A组)和原稀释液(B组)稀释降温后的冰水混合物长期保存,在第0、1、3、6、9和12天分别对精子活率和顶体完整率进行检测,并统计低温保存第9天的精液进行人工授精的受胎率。结果表明:粉剂稀释液与原稀释液低温长时间保存绵羊精子,在保存第9天的精子活率均能达到0.5,顶体完整率均高于65%,粉剂稀释液与原稀释液对精子活率和顶体完整率的保护能力无明显差异(P0.05);粉剂稀释液与原稀释液在低温保存第9天后进行人工授精,受胎率分别为66.9%和67.8%,两者受胎率差异不显著(P0.05)。说明稀释液冻干粉剂与液体稀释液低温保存绵羊精子具有相同效果。 相似文献
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在猪人工授精技术中,良好的稀释剂是提高猪精子质量的关键因素之一。为探讨羧甲基纤维素钠(CMC)对猪精液常温保存效果的影响,本研究以传统的猪精液保存稀释剂Zorlesco(-BSA)为基础稀释液,通过添加不同浓度的CMC(0、8、16和24μmol/L)对原精液进行稀释和保存。采用计算机辅助精液分析仪(CASA)检测精子活率和活力,低渗肿胀法(HOST)检测精子质膜完整性,考马斯亮蓝染色检测精子顶体完整性。结果显示,在猪精液保存的前3d内,添加不同浓度CMC组的精子活率和活力与对照组相比较高,但差异不显著(P0.05);保存4~7d时,与对照组相比添加16μmol/L CMC组的精子活率和活力明显升高(P0.05)。在保存的前4d内,添加不同浓度CMC组的精子质膜完整率和顶体完整率与对照组相比差异不显著(P0.05),但在保存至5~7d时,添加16μmol/L CMC组的质膜完整率和顶体完整率显著高于对照组(P0.05)。猪精子活力、活率、质膜完整率、顶体完整率之间存在极显著的正相关关系(P0.01),在Zorlesco稀释剂中添加8~24μmol/L的CMC能显著改善和提高猪精子活率、活力、质膜完整性以及顶体完整率,其最佳添加浓度为16μmol/L。CMC可作为精液稀释剂中的悬浮剂,用于减缓精子沉降速率,提高猪精液保存质量。 相似文献
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《黑龙江畜牧兽医》2014,(17)
为了改善猪精液低温保存方法,通过在改进的猪精液低温稀释液中添加不同浓度(0,0.50,1.00,1.50,2.00 mg/mL)的水蛭素,研究在4℃低温保存条件下其对猪精液品质的影响。试验采用PI荧光染色检测精子活率,利用计算机辅助精液分析仪(CASA)检测精子活力,Diff-Quik染色检测精子畸形率,考马斯亮蓝染色检测精子顶体完整率及采用低渗肿胀法(HOST)检测质膜完整率。猪精液保存7 d,每天检测上述指标,试验重复5次。结果表明:稀释液中添加一定浓度的水蛭素在一定时间内有利于维持精子的活率、活力,降低精子的畸形率,提高精子的顶体完整率和质膜完整率,并且水蛭素浓度越高,保存效果越好。因此,在本试验条件下,2.00 mg/mL是水蛭素在猪精液低温保存时的最佳添加浓度。 相似文献
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保存温度和不同种类稀释液对猪精液品质的影响 总被引：2，自引：0，他引：2
猪精液在室温保存时,含庆大霉素的稀释液保存效果优于含青、链霉素的稀释液,两种稀释液在保存72h时,精子活率、顶体完整率、GOT和LDH活性以及存活指数差异极显著(P<0.01).低温保存时,含蜂蜜和卵黄的稀释液对防精子冷刺激、维持精子活率的效果比含葡萄糖、奶粉的稀释液理想.在冷冻保存条件下,以含2%甘油的稀释液保存效果最佳.液态保存(室温、低温)的猪精液,LDH活性随精子活率下降而下降;pH值则都呈先上升后下降的变化趋势.室温保存主要是引起精子顶体脊膨大和保存后期的顶体前端膨大;低温保存主要引起顶体前部膨大和保存后期的少数顶体脱落;冷冻保存主要是造成顶体的膨大程度加大和顶体脱落.3种保存条件都造成精子线粒体透性增强.液态保存和冷冻保存精液的精清GOT活性与顶体完整率无显著相关性(P>0.05). 相似文献
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冷冻保存前平衡温度对猪精子结构的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
研究冷冻保存前平衡温度对精子结构的影响,为提高猪精子冷冻效果提供参考。新鲜猪精液(Ⅰ组)稀释后于17℃过夜保存(Ⅱ组),然后于冷冻Ⅰ液中4℃平衡1.5h(Ⅲ组),再加入预冷的冷冻Ⅱ液于4℃平衡45min(Ⅳ组)。通过精子形态正常率及活力检测,吖啶橙(AO)染色检测精子DNA完整性,碘化丙啶(PI)染色检测精子头部质膜完整性,低渗肿胀试验(HOS)检测精子尾部质膜完整性,异硫氰荧光素标记的花生凝集素(FITC-PNA)染色检测精子顶体完整性,并用扫描电镜(SEM)观察精子结构,评价冷冻保存前平衡温度对猪精子结构的影响。结果表明,与新鲜精液相比,Ⅱ组精液的精子DNA完整性、质膜完整性、顶体完整性等精子结构检测指标所受影响无统计学意义(P0.05);Ⅲ组和Ⅳ组的精子结构检测指标明显受到影响(P0.05),但Ⅲ组和Ⅳ组间无显著差异(P0.05)。扫描电镜检测结果表明,17℃过夜保存精子未见异常,头、颈、尾结构完整,顶体完整、光滑;Ⅲ组精子头部质膜及头颈结合部有轻微损伤;Ⅳ组精子尾部和头颈结合部有不同程度的断裂。冷冻前从17℃降低至4℃及4℃平衡对猪精子结构有一定程度的损伤。 相似文献
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《青海畜牧兽医杂志》2017,(1)
本实验研究了不同保护剂对藏羊细管冷冻精液的品质影响。结果表明:含T ris的柠檬酸盐缓冲液可以提高冷冻-解冻后的精子活率(0.41±3.23)和精子顶体完整率(74.45±1.45),以等体积乙二醇替代甘油作防冻剂制作的细管冷冻精液,解冻后的精子活率(0.41±2.87)和顶体完整率(81.23±1.45)。稀释液中添加维生素B12对提高冷冻后精子活率(0.44±3.26)与保护顶体完整率(83.33±1.93)具有良好的作用。 相似文献