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[目的]探讨魔芋愈伤组织培养基、不同转化条件(菌液浓度、侵染时间、预培养时间及共培养时间)及转化植株的筛选条件(抗生素浓度和乙酰丁香酮(AS)浓度)等因素对转化效率的影响。[方法]采用卡那霉素抗性基因为选择标记,对农杆菌介导的花魔芋遗传转化体系进行优化。[结果]在预培养2 d,用OD600为0.6的菌液侵染30 min、共培养3 d,卡那霉素100 mg/L,羧苄青霉素250 mg/L,AS浓度100μmol/L的条件下能有效提高转化效率。再生花魔芋植株经GUS染色及PCR检测,结果表明外源目的基因已经整合到花魔芋基因组中。[结论]为魔芋抗病品种的转基因培育,丰富其种质资源,寻找抗病新途径提供理论依据和试验基础。 相似文献
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影响农杆菌介导朝仓花椒遗传转化因素研究 总被引：2，自引：0，他引：2
为建立农杆菌介导的朝仓花椒遗传转化体系,以朝仓花椒叶柄及茎段为转化受体,研究了预培养时间、侵染菌液浓度、侵染时间、共培养时间等因素对转化效率的影响。获得转化体系如下：外植体预培养3d,在OD600为0.5～0.8菌液侵染10min,共培养3d,延迟7d筛选,以30和50mg/L卡那霉素（Kan）进行梯度筛选。结果表明：... 相似文献
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为获得抗软化的转基因柿果,初步建立了次郎柿转基因工艺。预培养时间为4 d;菌液OD600值为0.5,侵染时间10 min;共培养时间3 d;壮观霉素适宜浓度为30 mg/L。在此条件下,获得了次郎柿ACC合成酶的RNA干扰基因转基因苗。经PCR检测,得到8个转基因植株。 相似文献
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影响农杆菌介导的河北杨遗传转化的因素 总被引：4，自引：0，他引：4
从预培养时间、侵染菌液浓度、侵染时间、共培养时间及添加AS（乙酰丁香酮）5个方面,以卡那霉素抗性芽频率作为衡量指标,研究了各因素对河北杨遗传转化率的影响。优化筛选的最适转化系统为预培养2 d,农杆菌活化菌液1/2MS稀释10倍,侵染5 min,共培养4 d。按此方法河北杨叶盘转化率可达35%。西北林学院学报21卷第5期贾小明等影响农杆菌介导的河北杨遗传转化的因素 相似文献
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以甘蓝型油菜湘油15号为试验材料,对农杆菌转化体系中外植体预培养时间、培养基中AgNO_3浓度、农杆菌侵染时的菌液浓度、共培养基pH值等进行了优化研究,确立了优化的遗传转化条件。结果表明,外植体在农杆菌侵染和共培养前预培养3 d,可明显提高子叶外植体和下胚轴外植体出愈率和抗性芽苗分化率,有利于获得较高的转化效率;在基因转化中,AgNO_3的最佳使用浓度为30μmol/L,最佳的农杆菌侵染菌液OD_(600)为0.4,共培养基pH值5.4是油菜农杆菌介导转化中优化的转化条件。 相似文献
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影响西瓜农杆菌介导的高效遗传转化效率的主要因子 总被引：4，自引：0，他引：4
以西瓜子叶为外植体材料,利用GUS染色瞬时表达方法研究农杆菌浓度,预培养、共培养时间,预培养条件以及添加乙酰丁酸酮(AS)对西瓜转化效率的影响,优化西瓜遗传转化参数,初步建立以MS BAP 2.0mg/L IAA 0.2 mg/L Hyg 10 mg/L Cef 300 mg/L为分化培养基,黑暗条件下预培养2 d,使用OD为0.3的菌液侵染10 min后,黑暗条件下共培养3 d,然后在25℃,光周期为16 h的条件下筛选抗性芽的遗传转化体系。 相似文献
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影响草莓遗传转化率的因子及转CBF1基因植株的获得 总被引：2，自引：0，他引：2
以草莓试管苗的叶片为外植体,经农杆菌介导将抗逆相关转录因子CBF1基因转入草莓基因组.探讨酚类物质、农杆菌菌液浓度、侵染时间、预培养时间、共培养时间及选择方式等对草莓转化效率的影响,建立草莓遗传转化体系.在黑暗条件下预培养2～4 d,再用浓度OD6000.3～0.5的菌液侵染3～5 min后共培养2 d,将外植体先接到含有500 mg/L Cef的诱导培养基上进行培养,14 d后再转接到含有选择压20 mg/L Kan和500 mg/L Cef的诱导培养基上进行选择培养,得到卡那霉素抗性草莓植株.经PCR检测证实CBF1基因已整合到草莓基因组中. 相似文献
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以菊花愈伤组织为转化受体,通过农杆菌介导法,利用番茄红素β-环化酶基因(LycB)对菊花进行转化,以抗性愈伤率为指标,探讨了侵染时间、共培养时间、农杆菌菌液浓度、乙酰丁香酮(AS)浓度等因素对转化的影响,建立了LcyB基因转化菊花的遗传转化体系。结果表明：农杆菌侵染菊花愈伤组织的最佳时间为5min;农杆菌菌液浓度OD600值0．55;愈伤组织与农杆菌共培养的时间以3d效果最好;添加AS可提高抗性愈伤率,适宜的AS浓度为100μmol／L;采用Hyg浓度由低到高的筛选方式可有效提高抗性愈伤率;PCR分子检测初步证明目的基因LycB已转入菊花愈伤组织中。 相似文献
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为了研究农杆菌介导的莴笋遗传转化的影响因素,建立莴笋高效遗传转化体系,通过设置不同预培养、共培养时间,探讨其对外植体芽分化率的影响;设置不同农杆菌菌液浸染浓度及浸染时间,探讨其对外植体致死率的影响。试验结果表明,对莴笋外植体预培养2d,外植体芽分化率最高;共培养0、1、2d,外植体芽分化率差别不大;当农杆菌菌液OD600值为0.3、0.5,分别侵染1、3、5min,外植体致死率相差不大。因此,在莴笋遗传转化中,采用外植体预培养2d、共培养2d,农杆菌菌液OD600值为0.5、侵染时间5min的遗传转化体系能提高莴笋的遗传转化率。 相似文献
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In this paper, several factors that affect the efficiency of in vitro adventitious bud regeneration and Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation of F. vesca were studied. The results showed that F. vesca seeds germination rate was the highest while seeds were cultured in water, and the germination rate was the lowest while seeds were cultured on MS medium supplemented with hormone; the germination rates that seeds cultured on two and three layers filter paper were higher than that seeds cultured on four and five layers filter paper. In vitro adventitious regeneration efficiency was affected by different explants types. The significant difference was existed between petioles and leaves. When using the same type explants, in vitro adventitious buds regeneration rate and the average number of buds per explant between Ruegen(RE) and Yellow Wonder(YW) had no significant difference. RE to Agrobacterium tumefaciens was more sensitive than YW. Using seedling leaves of RE and YW as materials, an efficient Agrobacterium-mediated transformation system was developed. In this system, the concentration of bacteria was OD_(600)=0.5, the explants were immersed in bacteria broth for 9 min, the co-cultured time was 2 days, and had no pre-cultured time. The percentage of explants with resistant buds of RE and YW was compared. The putative transformed plants were confirmed by PCR. 相似文献
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以白粉桃茎段为材料,通过根癌农杆菌介导用反义多聚半乳糖醛酸酶(PG)基因对桃进行了遗传转化.将预培养3d的受体材料经根癌农杆菌菌液(D600=0.4)浸染10min后共培养60h,转移至分化培养基MS+1.0mg·L-16-BA+0.5mg·L-1NAA+50mg·L-1卡那霉素+250mg·L-1头孢氨苄青霉素上诱导产生不定芽,将抗卡那霉素的不定芽先后在含有50mg·L-1卡那霉素的生长、增殖和生根培养基上继续选择,获得了完整植株,经PCR检测初步证明反义PG基因已导入桃中. 相似文献
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limy@swau.cq.cn 《勤云标准版测试》2006,(5)
为了得到马铃薯抗病材料,本研究利用根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)LBA4404转化马铃薯栽培品种“台湾红”,建立了优良的遗传转化系统:根癌农杆菌浓度以D600nm=0.5￣0.8为宜,感染时间以5min为宜;茎段和叶盘的预培养时间分别以4d和8d为宜,共培养时间皆以3d为宜。通过PCR和Sourhernblotting检测证明抗菌肽基因SPCEMA已成功导入其中。其茎段和叶片为的转化频率分别为10%和5.79%。 相似文献
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农杆菌介导的百合ACO反义基因遗传转化的研究 总被引：3，自引：0，他引：3
以东方百合‘索邦’(Liliumoriental‘Sorbonne’)无菌苗鳞茎、鳞片叶及愈伤组织为外植体,通过EHA105和GV3101两种根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)菌株介导,将ACO反义基因导入东方百合"索邦"。结果表明,愈伤组织预培养7 d,侵染30 min,EHA105菌液浓度OD=0.8,共培养5 d,可获得7.14%的转化率。经GUS、PCR、PCR-Southern及基于梯状胶回收的PCR法检测证明ACO反义基因已转入转化植株基因组中。 相似文献
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植物的耐盐性是一个多基因控制的复杂性状,将多个耐盐相关基因导入同一植物更有助于提高植物的耐盐能力.以玉米自交系H99、丹988的胚性愈伤组织为受体材料,通过愈伤组织对NaCl的敏感性试验,确定转化愈伤组织的适宜选择压,适宜愈伤组织转化的盐浓度为225 mmol/L.并对农杆菌遗传转化系统的条件进行了初步研究,用带有pCAMBIA-1301-CMO-BADH质粒的根癌农杆菌转化玉米愈伤组织,结果表明:采用EHA105的菌株振荡20h后,菌液OD值为0.5～0.6时侵染25 min为农杆菌转化的适宜条件.对移栽成活的36棵抗盐植株经PCR检测有2株呈阳性,阳性株率最高达到5.6％,初步证明目的基因已整合到玉米基因组中. 相似文献
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通过农杆菌介导的方法将Bar-Bt基因（抗除草剂基因和抗虫基因构建在同一载体上的双基因）整合到北方优质粳稻龙稻6号、松粳9号等品种中;分别以供试品种的幼胚和成熟胚为外植体诱导愈伤组织,携带有Bar-Bt基因双元载体PCAMBIA1301号的根癌农杆菌EHA105为载体,GUS基因的瞬时表达率为衡量指标,对影响农杆菌介导的龙稻6号、松粳9号等品种的转化效率的主要因素进行了研究。结果表明：农杆菌侵染愈伤组织的菌液浓度以D（600nm）=0.8～1.0较为适宜,最佳共培养时间为2～3 d,预培养时间为5 d,共培养培养基中添加100μmol·L^-1乙酰丁香酮的转化效率有明显提高。 相似文献