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为建立新城疫病毒在BHK-21细胞的无血清全悬浮培养工艺以获得高滴度和高纯度的新城疫悬浮培养抗原,通过悬浮培养驯化和筛选获得了形态良好、稳定传代的BHK-21-sc悬浮细胞株;该细胞以初始密度0.5×10~6 cells/mL接种,培养72 h可增殖到6×10~6cells/mL,细胞活率达95%。以5 L生物反应器悬浮培养BHK-21-sc细胞,对鸡新城疫病毒La Sota株的接毒剂量、TPCK胰酶添加浓度、病毒培养温度、收获时间等工艺参数进行了摸索和优化;并在5L-16L-50L生物反应器中进行逐级放大,以优化后的鸡新城疫悬浮培养工艺进行3个批次病毒悬浮培养。最终确定鸡新城疫病毒La Sota株接种BHK-21-sc悬浮细胞株的悬浮培养工艺:BHK-21-sc细胞悬浮培养的第3天按照感染复数(multiplicity of infection,MOI)为0.005接种病毒,并添加终浓度为5μg/mL的TPCK胰酶,于33℃培养72 h后收获病毒液。应用该悬浮培养工艺在5、16、50 L反应器上悬浮培养BHK-21-sc悬浮细胞株生产鸡新城疫病毒HA滴度不低于9log2,病毒含量不低于10~(6.0)TCID_(50)/0.1mL。表明BHK-21-sc细胞无血清全悬浮生产鸡新城疫病毒工艺稳定,可以实现逐级放大和规模化生产。 相似文献
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《中国兽医学报》2018,(12)
关于卵母细胞成熟过程中糖代谢的研究主要集中在糖酵解和PPP途径上,而对丙酮酸和乳酸代谢的报道较少。本研究据此探讨猪卵母细胞体外核成熟过程中丙酮酸和乳酸的代谢途径及对卵母细胞核成熟的影响。以不含能量物质的NCSU-23为基础培养基,添加不同浓度的丙酮酸钠或乳酸钠及单羧酸转运蛋白(MCT)抑制剂4-CIN、线粒体呼吸链抑制剂鱼藤酮或乳酸脱氢酶抑制剂草氨酸钠,培养猪卵丘-卵母细胞复合体(COCs)或裸卵(DOs),观察核成熟率。结果表明,添加15mmol/L丙酮酸钠时,COCs和DOs核成熟率最高,分别为(69.5±3.1)%和(54.7±2.6)%;同时添加4-CIN或鱼藤酮显著(P0.05)降低COCs和DOs核成熟率;添加3mmol/L乳酸钠时COCs和添加10mmol/L乳酸钠时DOs的核成熟率达到最高,分别为(72.1±1.7)%和(41.1±2.3)%;同时添加草氨酸钠显著(P0.05)降低COCs和DOs的核成熟率。以上结果说明:(1)猪COCs和DOs均能代谢丙酮酸和乳酸支持其核成熟;(2)丙酮酸通过MCT跨膜转运进入线粒体并经线粒体呼吸链代谢支持卵母细胞核成熟;(3)乳酸通过LDH催化生成丙酮酸和NADH来维持卵母细胞核成熟;(4)猪COCs比DOs对丙酮酸和乳酸的利用能力强,说明卵丘细胞对卵母细胞成熟至关重要。 相似文献
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旨在筛选伪狂犬病病毒（PRV）敏感的BHK-21细胞并分析其生长和病毒增殖特性,优化反应器中BHK-21悬浮细胞的培养和病毒增殖条件,建立生物反应器培养BHK-21悬浮细胞增殖PRV工艺。本研究利用响应面和单因素优化法,以细胞生长动力学特性、TCID50病毒滴度等参数为指标,优化1.2 L生物反应器中BHK-21悬浮细胞的最佳培养和增殖病毒条件,在5 L生物反应器中进一步批培养验证。结果显示,筛选获得PRV高敏感的BHK-21-02贴壁细胞和BHK-21-XF02悬浮细胞各1株,BHK-21-XF02悬浮细胞在含3%血清的SLM-BHK低血清培养基和SFM-BHK无血清培养基中均能实现良好的生长和病毒增殖。利用响应面法优化得到1.2 L反应器最佳培养条件为接种密度1.20×106cells·mL-1、搅拌转速120 r·min-1、DO值40%,5 L反应器批培养72 h细胞密度可达（7.61±0.18）×106 cells·mL-1、细胞活率为（96.93±1.18）%。利用单因素法优化得到1.2 L反应器最佳病毒增殖条件为MOI 0.001、培养温度37℃、细胞密度2.0×106cells·mL-1、搅拌转速80 r·min-1,5 L反应器批培养接毒后48 h病毒滴度达到最大值（7.13±0.11） lgTCID50·mL-1。本研究可为PRV疫苗相关研究和规模化生产提供参考。 相似文献
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为了筛选出适应于口蹄疫疫苗生产的最佳细胞株,用自制的GMEM培养基,以30mL/L血清浓度,在同等条件下比较了3种不同来源的BHK-21悬浮细胞培养特性。结果显示,这3种细胞在形态上无明显的差异,在显微镜下不易区分;在培养过程中,BHK-21-L细胞株在最短时间内可达到最大培养密度,细胞生长速度快,细胞活性较高,DNA合成旺盛;BHK-21C13-2P细胞株最大密度较低,在72h~96h被完全阻止在G0/G1,放大比例较小,为1∶1.5~1∶2;BHK-21-B细胞在72h~96h停止增殖,可放大较大比例,但易出现细胞结团、易贴壁的现象,影响细胞的增殖。可见,BHK-21-L细胞是生产口蹄疫疫苗可供选择的最佳细胞株。 相似文献
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取体外培养生长良好脂肪细胞,培养介质中分别添加0、10、20、40、80、160mg/L地塞米松,0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mmol/L油酸,0、10、20、30、40、50mg/L乳酸,培养24h后提取总RNA,每个处理3个重复,分别采用荧光定量PCR法检测地塞米松、油酸、乳酸对脂肪细胞HSL mRNA丰度的影响。结果表明油酸、乳酸抑制脂肪细胞内HSL mRNA表达,抑制作用随浓度增加而增强;地塞米松促进脂肪细胞内HSL mRNA表达,是剂量依赖性。 相似文献
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为了实现鸡新城疫病毒HN2018株(基因Ⅶ型)在乳仓鼠肾(BHK-21)细胞上的无血清规模化培养，本试验采用悬浮培养技术驯化和筛选了1株能够稳定传代的BHK-21-xh悬浮细胞株；使用该细胞以初始密度为100×104个/mL接种摇瓶进行培养，并对摇瓶培养鸡新城疫病毒HN2018株的接毒细胞密度、培养温度、接毒量、收毒时间等工艺参数进行摸索和优化；利用摇瓶优化的病毒培养工艺，在10和100 L生物反应器中逐级放大培养BHK-21-xh悬浮细胞，接种鸡新城疫病毒；采用生物反应器悬浮培养的鸡新城疫病毒HN2018株细胞毒与鸡胚毒分别制备成灭活疫苗，免疫SPF鸡进行免疫效力的比较。结果显示，在摇瓶中培养72 h细胞密度均不低于800×104个/mL,细胞活率均不低于96%;按照BHK-21-xh细胞密度不低于800×104个/mL,病毒感染复数(MOI)为0.216进行接毒，同时添加终浓度为20μg/mL的胰蛋白酶，于35℃温度条件下培养64～72 h收获病毒液，鸡新城疫悬浮培养细胞毒红细胞凝集(HA)效价最高能够达到10log... 相似文献
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在1/2浓度Hoagland营养液中添加终浓度至0、1mmol/L、5mmol/L、10mmol/L、20mmol/L和40mmol/L的SrCl_2处理2叶1心期苜蓿,待其生长至3叶1心期分析6个处理对苜蓿生长、抗氧化酶(POD、SOD和CAT)活性和同工酶谱的影响。结果表明:SrCl_2处理在低浓度对苜蓿生长有一定促进作用,浓度超过5mmol/L后,苜蓿生长受到抑制。当SrCl_2处理浓度在0~40mmol/L范围内,苜蓿POD、SOD和CAT活性表现为先升高后降低,其中POD和CAT在10mmol/L、SOD在20mmol/L浓度时活性最高。SOD/POD、SOD/CAT和SOD/(POD+CAT)比值先降低后升高,10mmol/L SrCl_2处理比值最小,说明POD和CAT活性在锶胁迫时降低更快,限制了锶胁迫的缓解。锶处理导致POD同工酶谱带减少,20mmol/L SrCl_2可诱导产生2条新的SOD谱带,同时导致SOD-3不表达,10mmol/L SrCl_2诱导1条新的CAT谱带;但随浓度增加,新产生的酶不表达,没有相应谱带。 相似文献
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试验旨在通过体外模拟瘤胃发酵，评价添加草氨酸钠对瘤胃发酵产气量、常规化学参数、乳酸产量及相关乳酸菌相对丰度的影响。以MRS培养基为体外营养来源，添加不同浓度的草氨酸钠（0、2、5、10 mmol/L和15 mmol/L）进行体外模拟瘤胃发酵，记录72 h内的气体产量，测定发酵24、48 h和72 h气体成分含量，并测定发酵72 h发酵液pH、氨态氮、挥发性脂肪酸（VFA）以及乳酸含量，埃氏巨型球菌、牛链球菌、反刍兽新月单胞菌的相对丰度。结果表明：与对照组相比，草氨酸钠添加量为2 mmol/L和5 mmol/L时，对各指标无显著影响（P>0.05）。添加10 mmol/L的草氨酸钠降低了发酵48、72 h的产气量和乳酸含量（P<0.05），但添加10 mmol/L和15 mmol/L的草氨酸钠显著降低埃氏巨型球菌相对丰度（P<0.05），对牛链球菌和反刍兽新月单胞菌相对丰度无显著影响（P>0.05）。添加15 mmol/L的草氨酸钠后显著降低了发酵72 h的产气量和二氧化碳比例、pH、氨态氮和乳酸浓度，以及丙酸、丁酸和戊酸的含量（P<0.05），提高了乙酸含... 相似文献
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为了解猪睾丸细胞(ST)在体外培养过程中的代谢特点,对方瓶、转瓶和生物反应器培养环境中ST细胞的葡萄糖、乳酸及氨的代谢进行了考察。结果表明3种培养方式的ST细胞生长过程中的葡萄糖消耗、乳酸和氨的生成均主要发生在延滞期和对数生长期这2个阶段,与方瓶和转瓶培养比较,生物反应器系统培养ST细胞的葡萄糖利用率高,乳酸及氨的生成低,优于方瓶和转瓶的培养方式。反应器中前3天的葡萄糖比消耗速率约为5.67mmol(109cell.day)-1,乳酸比生成速率约为2.9mmol(109cell.day)-1,YLac/Gluc约为0.51mmol/mmol,所消耗葡萄糖的26%转化为乳酸。 相似文献
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为探究乳酸菌作为青贮添加剂对苜蓿青贮发酵品质和细菌菌群的影响,试验选取萎焉苜蓿为原料分为三个处理组,分别为无添加剂对照组(CK组)和分别添加1×106cfu/g乳酸菌YX(LPI组)、乳酸菌ZZU A341(LPA组)。结果表明:LPI或LPA组乳酸积累量显著高于CK组(P<0.05),pH和氨态氮含量显著低于CK组(P<0.05),且pH均降至5.00以下;CK组或LPI组的优势菌属为Pediococcus属(56.40%、98.63%),LPA组为Lactobacillus属(98.88%)。综上所述,乳酸菌作为青贮添加剂可通过调控青贮环境中细菌菌群的组成或相对丰度,从而提高青贮苜蓿的发酵品质。 相似文献
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对Sf9昆虫细胞在不同培养基、培养基中是否添加血清及不同生物反应器中的培养工艺进行了研究,发现Sf9细胞在Sf900Ⅱ无血清培养基中生长比在添加10％小牛血清的Grace培养基中更好,在Sf900Ⅱ无血清培养基14 L搅拌式生物反应器分批培养细胞密度可达1.4×107/mL.过程生化特性分析表明,总氨基酸的消耗及主要代谢副产物特别是乳酸及游离氨的积累是培养后期细胞密度降低及活性下降的重要原因.本研究为Sf9细胞生物反应器培养工艺优化及利用昆虫杆状病毒蛋白表达系统高效表达重组蛋白生产亚单位疫苗奠定了良好基础. 相似文献
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为探讨西藏地区燕麦（Avena sativa L.）秸秆和多年生黑麦草（Lolium perenne L.）混合青贮使用添加剂改善发酵品质的措施,进一步提高燕麦秸秆利用效率,将收获籽粒后的燕麦秸秆和抽穗期刈割的多年生黑麦草以4∶6混合青贮,分别添加1×106 cfu·g-1 FW的乳酸菌制剂、4% FW糖蜜和乳酸菌+糖蜜,青贮60 d后取样分析青贮饲料发酵品质。结果表明：单独或组合添加糖蜜和乳酸菌均不同程度的改善了混合青贮发酵品质,显著降低了pH值、氨态氮/总氮、丙酸和丁酸含量（P<0.05）,显著提高了乳酸含量和乳酸/乙酸（P<0.05）。添加糖蜜组发酵品质优于添加乳酸菌组,显示较高的乳酸和水溶性碳水化合物含量（P<0.05）,且单独添加糖蜜与组合添加组各发酵指标无显著差异。综合考虑,在燕麦秸秆和多年生黑麦草（4∶6）混合青贮时添加4%糖蜜较为适宜。 相似文献
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试验以籽粒苋为材料,在青贮中分别添加乳酸菌制剂、葡萄糖和甲酸3种添加剂,研究不同的处理方式对籽粒苋青贮动态发酵品质以及营养成分的影响,以明确青贮添加剂对粒苋青贮的作用,为籽粒苋青贮饲料的合理利用提供研究途径。试验设5个处理组:对照组,不加任何添加剂;乳酸菌制剂组,按1kg乳酸菌制剂调制3~4t籽粒苋鲜草装罐;葡萄糖组,添加量为30g/kg;乳酸菌制剂和葡萄糖组,添加量与单独添加时一致;甲酸组,添加量为5g/kg。在发酵第1,3,9,30和57天分别开罐取样,检测样品中pH、乳酸、氨态氮、干物质、粗蛋白和中性洗涤纤维等指标。结果表明,在籽粒苋青贮同时加入乳酸菌制剂和葡萄糖可以快速发酵,产生大量乳酸,迅速降低青贮pH值,显著降低乙酸、中性洗涤纤维含量和氨态氮/总氮(P0.05),并能显著提高干物质和粗蛋白含量(P0.05);加入甲酸可以显著降低乙酸含量(P0.05),对干物质含量没有明显影响(P0.05)。综上所述,籽粒苋通过制作青贮饲料可以保存营养成分,与籽粒苋自然青贮相比,籽粒苋青贮时加入上述青贮添加剂均可不同程度的改善青贮品质,同时加入乳酸菌和葡萄糖对青贮改善效果最佳。 相似文献
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含水量及添加剂对高冰草青贮饲料品质的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
本试验旨在研究含水量以及添加蔗糖、甲酸对高冰草青贮饲料品质的影响,探究优质高冰草青贮饲料的调制方式。试验选用结实期间的高冰草为原料,原料含水量分为鲜贮与晾晒2个处理,添加剂设置对照、添加甲酸、添加蔗糖3个处理。不使用任何添加剂为对照,甲酸添加量为6 mL/kg,蔗糖添加量为2%,袋装青贮360 d。结果表明,高冰草青贮时,原料进行晾晒,青贮饲料的pH显著增加(P<0.05)。晾晒处理减少乳酸(P<0.05)和氨态氮(P<0.01)的生成,增加乙酸的生成(P<0.05)。添加甲酸能够极显著降低高冰草青贮饲料的pH(P<0.01),提高乳酸的生成量(P<0.01),减少乙酸的生成(P<0.05)。添加蔗糖能够显著降低高冰草青贮饲料的pH(P<0.05)和乙酸的含量(P<0.01),提高乳酸生成(P<0.01)。添加甲酸或蔗糖都能够极显著降低高冰草青贮饲料的氨态氮含量(P<0.01)。晾晒、添加甲酸或蔗糖对高冰草青贮饲料的CP、NDF、ADF、Ash、EE等养分含量和干物质保存率没有显著的影响,并且对硝酸盐和亚硝酸盐含量也没有显著影响。与原料相比,硝酸盐含量下降48%～53%,亚硝酸盐含量有所增加。 相似文献
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N D Tolson K M Charlton K F Lawson J B Campbell R B Stewart 《Canadian journal of veterinary research》1988,52(1):58-62
ERA rabies vaccine virus grown in BHK-21 13S cells (ERA/BHK-21) and street rabies virus were titrated in mice by intracerebral, intranasal and intramuscular inoculation. Mice were also given undiluted ERA/BHK-21 in baits. Skunks were given undiluted ERA/BHK-21 in baits and by intramuscular, intranasal and intestinal inoculation. Virus neutralizing antibody titers against rabies virus were measured over a three month observation period. The surviving skunks were challenged by intramuscular inoculation with rabies street virus from a skunk salivary gland suspension. When titrated in mice, ERA/BHK-21 had titers of 10(7.0), 10(5.2) and 10(3.9) median lethal doses per mL by the intracerebral, intranasal and intramuscular routes, respectively. All skunks (8/8) inoculated intranasally developed paralytic rabies by 12 days after exposure to ERA/BHK-21 virus. None of the skunks that developed vaccine-induced rabies had infectious virus in the submandibular salivary glands. Vaccine-induced rabies also occurred in 1/8 skunks in the intramuscularly inoculated group and in 1/8 in the intestinally inoculated group. The survival rates of challenged skunks in the various groups were as follows: intramuscular, 7/7; intestinal, 2/7; bait, 0/8; and control, 0/8. These results indicate that ERA/BHK-21 virus has a significant residual pathogenicity in mice and in skunks by some routes of inoculation. Skunks given vaccine intramuscularly were protected against challenge, while those skunks given the vaccine in baits were not. 相似文献
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为研究玉米秸秆和废弃白菜混合青贮可行性,考查二者在不同质量比时的混贮品质,设计了6个不同的混贮比例,分别为29∶19,27∶21,25∶23,23∶25,21∶27和19∶29。混合青贮30 d后对其化学组分和发酵品质进行分析,筛选品质最佳的混贮比例,并进一步研究了品质最佳混贮组的乳酸菌多样性。结果表明,质量比为21∶27的混贮5(ME5)组的pH和氨态氮/总氮显著低于其余混贮组(P<0.05),乳酸含量显著高于其余混贮组(P<0.05)。ME5组的干物质和能源组分综纤维素含量较高,而酸性洗涤木质素含量较低,综合判定该组的混贮品质优于其他5组。乳酸菌多样性结果显示,从ME5组中共分离出10株乳酸菌,分属于3个属,4个种。3个属分别是乳杆菌属、肠球菌属和明串珠菌属。4个种分别是2株短乳杆菌、1株屎肠球菌、5株肠膜明串珠菌肠膜亚种和2株植物乳杆菌,其中同型发酵乳酸菌乳杆菌属和肠球菌属为该青贮体系的关键乳酸菌。 相似文献
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含水量和乳酸菌制剂对狗尾草发酵品质的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
研究含水量(30%、35%和40%)和乳酸菌制剂添加量(3%、6%、9%和12%)对成熟期狗尾草(Setariaviridis(L.)Beauv.干草发酵品质的影响。结果表明,在含水量30%条件下添加乳酸菌制剂显著降低粗蛋白质含量(P<0.05);含水量35%和40%条件下添加乳酸菌制剂显著降低粗纤维和中性洗涤纤维含量(P<0.05);随着含水量的升高pH值趋于降低,乳酸、丁酸产量趋于增加;含水量和乳酸菌制剂对pH值、乳酸产量以及乳酸菌数量具有显著的互作效应(P<0.05);在含水量30%-40%条件下,添加乳酸菌制剂3%-12%,各处理组的发酵品质均为优或良。 相似文献