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鸡传染性法氏囊病双抗体夹心Dot—ELISA诊断法的建立及应用 总被引：4，自引：1，他引：3
以醋酸纤维素膜作为固相载体，辣根过氧化物酶标记鸡抗传染性法氏囊病病毒抗体，饱和二氨基联苯胺为底物显色，建立了鸡传染性法氏囊病双抗体夹心Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ诊断法，经方阵实验确定最佳反应条件为：ＩｇＧ的包被液为０．０５ｍｏｌ／Ｌ（ＰＨ９．６）碳酸盐缓冲液，包被浓度为１、５０；酶标抗体的工作浓度为１；１００；洗涤液为含０．０５％吐温－８０的０．０２ｍｏｌ／Ｌ（ＰＨ７．４）磷酸盐缓冲液；封闭液为含０．２％ 相似文献
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Dot—ELISA检测猪生殖和呼吸综合征抗体的研究 总被引：10，自引：3，他引：7
用差速离心法提纯ＰＲＲＳ病毒，利用ＮＣ膜作为载体，在国内外首次成功建立了检测ＰＲＲＳ血清抗体的斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）。抗原包被浓度为１００μｇ／ｍｌ，被检血清工作浓度为１：１０，酶标兔抗猪ＩｇＧ工作浓度为１：６００。对７２份北京地区猪血清分别用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和ＩＦ检测，Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测阳性率为３３．３％，ＩＦ检测阳履率为３０．６％，与ＩＦ符合率较高，对部分待检血清检测 相似文献
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应用ＳｅｐｈａｄｃｘＧ－２００层析法纯化鸡减蛋综合症病毒，利用ＮＣ膜作为载体，成功建立了检测ＥＤＳ－７６血请抗体的斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）。抗原包被浓度为２μｇ／ｍｌ，被检血清浓度为１：２０，酶标兔抗鸡１ｇＧ浓度为１：２００．底物溶液最适ｐＨ值为７．２。对Ａ－Ｆ６个养禽场随机抽检血清１６０份，分别用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ、ＨＩ和ＡＧＰ检测，Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检出阳性率为５１．９％，ＨＩ检出阳性率为４６．９％，ＡＧＰ检出阳性率为３１．９％。对１４０日龄鸡人工感染试验，测定抗体消长规律。本方法不需特殊仪器。适用于基层兽医部门和养鸡场对ＥＤＳ－７６的血清学诊断和流行病学调查。 相似文献
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用差速离心法提纯ＰＲＲＳ病毒，利用ＮＣ膜作为载体，在国内外首次成功建立了检测ＰＲＲＳ血清抗体的斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）。抗原包被浓度为１００μｇ／ｍｌ，被检血清工作浓度为１∶１０，酶标兔抗猪ＩｇＧ工作浓度为１∶６００。对７２份北京地区猪血清分别用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和ＩＦ检测，Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测阳性率为３３．３％，ＩＦ检测阳性率为３０．６％，与ＩＦ符合率较高，对部分待检血清检测结果表明：６１份１９９１年进口美国猪血清阳性率为０％，１８２份１９９５年进口加拿大猪血清阳性率为４．９４％。本法不需特殊仪器，适用于基层兽医部门和猪场对该病的血清学诊断和流行病学普查 相似文献
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分泌抗鸡Ig单抗杂交瘤细胞系的建立与单抗生物学特性的鉴定 总被引：7，自引：0，他引：7
从传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞系１Ｄ１０、１Ｇ１中得到了３株能稳定分泌抗鸡免疫球蛋白（Ｉｇ）ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞系１Ｂ７、１Ｄ７、３Ｇ６。其抗体类和亚类均属ＩｇＧ２ｂ，腹水的ＥＬＩＳＡ效价≥１∶２５６００，琼扩效价为１∶８～１∶１６。３株ＭｃＡｂ能与鸡血清中的Ｉｇ出现沉淀反应，琼扩在２４ｈ以内出现清晰的沉淀线，而不能和鸭、鸽、鹌鹑等禽类及异种动物血清出现沉淀线。纯化的鸡ＩｇＧ、ＩｇＭ经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ后，分别用纯化并经辣根过氧化物酶（ＨＰＲ）标记的１Ｂ７、１Ｄ７、３Ｇ６单抗酶结合物进行免疫印迹试验证明，３株单抗识别的均为ＩｇＧ、ＩｇＭ分子的轻链 相似文献
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麻雀自然感染鸡传染性法氏病病毒的调查 总被引：2，自引：0，他引：2
从鸡传染性法氏囊病流行的鸡场捕杀麻雀５４只，用鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体夹心阻断ＥＬＩＳＡ检测抗体，阳性检出率为７．４％；以逆转录－聚合酶链反应检测病毒核酸，阳性检出率为１１．１％；ＲＴ－ＰＣＲ阳性样本病毒分离亦为阳性。结果表明；ＩＢＤ流行的鸡场里的麻雀能够发生ＩＢＤＶ自然感染，麻雀可能是ＩＢＤＶ的贮存宿主或二次传染源之一。 相似文献
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斑点酶联免疫吸附试验检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体方法的建立 总被引：6，自引：0，他引：6
首次建立了斑点－酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）检测猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ，美洲株）抗体的方法。特异性鉴定表明，ＰＲＲＳＶ不与猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒阳性血清反应；与美国进口的ＰＲＲＳＶ抗体ＥＬＩＳＡ诊断试验盒检测结果比较，３５份猪血清的阴、阳性检出总符合率为８２．９％（２９／３５），其中Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ的阳性检出率略高于进口试剂盒的检出率。 相似文献
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斑点酶联免疫吸附试验检测牛羊捻转血矛线虫病的研究 总被引：2，自引：0，他引：2
应用斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）检测牛羊捻转血矛线虫病抗体，经对３９头剖检羊血纸检测，结果表明该法与剖检法的阳性符合率达１００％（２７／２７），阴性符合率也达１００％（１２／１２）。Ｄｏｔ＝ＥＬＩＳＡ能检出第四胃寄生１＝３３８条捻转血矛线虫羊的血清或血纸抗体；应用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ对５９９份牛、羊血纸的测定结果，与粪检地的阳性符合率达９５．５８％，阴性符合率达９１．４３％。初步认为Ｄ 相似文献
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鸡传染性法氏囊病的快速诊断 总被引：5，自引：1，他引：4
应用鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体及其荧光标记物，对接种ＩＢＤ疫苗、强毒感染和自然病例鸡组织进行直接荧光抗体试验、斑点酶联免疫吸附试验和琼脂扩散试验三种检测方法的比较，结果表明，鸡接种疫苗后１０天内ＤＦＡ和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ均呈阳性反应，而ＡＧＰ只在接种后６－８天的样品中检出抗原。２２例人工感当鸡和４０例自然发病鸡组织的检测结果表明，ＤＦＡ和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ的敏感性基本一致，且高于ＡＧＰ，它们的 相似文献
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现地马传贫琼扩阴性 酶联免疫法阳性病马血清的特异性试验 总被引：1，自引：0，他引：1
在内蒙古牙克石市图里河镇非马传贫注苗区，用琼脂扩散试验（ＩＤ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）两种方法对６４匹马进行了对比检查，检出ＩＤ、ＥＬＩＳＡ双阳性４匹、ＤＬＩＳＡ单阳性马３匹。对３匹ＩＤ阴性，ＥＬＩＳＡ阳性马血清用不同浓度琼扩抗原重复检测结果为阴性，而用不同批次的ＥＬＩＳＡ抗原包被板及酶标抗体检测结果均为陧阳性，用马传盆病毒抗原对３匹单阳性马血清中和后，再进行ＥＬＩＳＡ测定，ＯＤ值均降低５ 相似文献
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Dot-ELISA检测H9亚型禽流感病毒的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
本研究采用兔抗H9亚型禽流感病毒（AIV）IgG包被于硝酸纤维素膜,酶标羊抗兔IgG作二抗,建立检测H9亚型AIV的Dot-ELISA法。经方阵试验确定兔抗AIV IgG工作浓度为1∶400,酶标羊抗兔IgG的工作浓度为1∶400。作者建立的Dot-ELISA对AIV的最小检测量为3.35×10-9g。Dot-ELISA与HA和HI、AGP及病毒分离法相比,检测63份临床疑似H9亚型AIV病料,Dot-ELISA检出32份(57.14%),HA和HI检出15份(23.81%),AGP检出11份(17.46%),病毒分离检出38份(60.30%)。用抗H9亚型AIV阳性血清可以阻断Dot-ELISA阳性反应,诊断膜片与鸡新城疫病毒、鸡传染性法氏囊病病毒、鸡传染性支气管炎病毒、产蛋下降综合征病毒不出现阳性反应,证明Dot-ELISA特异性好。分别置室温(25 ℃左右)、4 ℃和-20 ℃下保存1个月后,膜片诊断效果不变,对照反应均成立,该方法重复性好（重复符合率为93.9%）,操作简便（3 h内可完成）,不需要特殊检测仪器,结果客观,肉眼易于判断,是微生物和传染病及寄生虫病诊断标准化的新技术之一。 相似文献
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Dot-ELISA检测猪胴体中沙门氏菌的研究 总被引：10，自引：0，他引：10
应用Dot-ELISA法对西宁某猪屠宰点 85份猪胴体进行了沙门氏菌的检测 ,同时采用常规分离培养鉴定技术作对照实验。结果在 85份肉样中 ,Dot-ELISA检出沙门氏菌阳性 6 5份 ,阳性率为 76 .4 7% (6 5 /85 ) ;而常规分离培养鉴定技术检出沙门氏菌阳性 6 7份 ,阳性率为 78.82 % (6 7/85 ) ,此两种方法的阳性符合率为 86 .5 7%。经统计分析 ,两种方法差异不显著 (P >0 .0 5 )。 相似文献
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Nie YC Lu CP 《Zentralblatt für Veterin?rmedizin. Reihe B. Journal of veterinary medicine. Series B》1999,46(10):731-734
Seventy-six serum samples of Chinese soft-shelled turtles (Trionyx sinensis) were collected at Jiangsu Province, China. The neutralization test (NT) was performed with the sera, Testudo herpesvirus (THV) and turtle heart cells (THC). Neutralizing antibodies were detected in five of 76 samples and the titres were 1:10-1:20. Having optimized the conditions, the dot-enzyme-linked immunosorbent assay (Dot-ELISA) was developed and eight serum samples exhibited positive results. Five samples were positive by both NT and Dot-ELISA. The percentage of positive samples was only 6.6% (NT) and 11% (ELISA). It is suggested that THV infection is not a serious problem for the Chinese soft-shelled turtle culture in this region. 相似文献
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To assess whether alpha‐1‐acid glycoprotein (AGP) can be detected on the membrane of feline circulating leucocytes. Design The presence of AGP on circulating leucocytes was investigated in both clinically healthy cats and cats with different diseases. A group of feline coronavirus (FCoV)‐positive cats, comprising cats with feline infectious peritonitis (FIP) and cats not affected by FIP but seropositive for FCoV, were included in this study because the serum concentration of AGP increases during FCoV infection. Procedure Flow cytometry (using an anti‐feline AGP antibody), serum protein electrophoresis, routine haematology and measurement of the serum AGP concentration were performed using blood samples from 32 healthy cats (19 FCoV‐seropositive), 13 cats with FIP and 12 with other diseases (6 FCoV‐seropositive). The proportion of cats with AGP‐positive leucocytes in the different groups (e.g. controls vs sick; FIP vs other diseases, etc.) or in cats with different intensities of inflammatory response was compared using a Chi‐square test. Results AGP‐positive leucocytes were found in 23% of cats. Compared with controls, the proportion of patients with positive granulocytes and monocytes was higher among sick cats (especially cats with diseases other than FIP) and cats with high serum AGP concentration, but not in cats with leucocytosis or that were FCoV‐seropositive. Conclusion AGP‐positive leucocytes can be found in feline blood, especially during inflammation. Conversely, no association between AGP‐positive leucocytes and FIP was found. Further studies are needed to elucidate the mechanism responsible for this finding and its diagnostic role in cats with inflammation. 相似文献
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以硝酸纤维膜为固相载体,利用沙门氏菌多价血清和辣根过氧化物酶(HRP)标记制备的羊抗兔IgG,成功地建立对香肠的Dot-ELISA检查法,同时,采用常规分离培养鉴定技术作对照试验。结果显示,在86份香肠中,用Dot-ELISA检出沙门氏菌阳性为36份,阳性率为41.86%;而常规分离培养鉴定技术检出沙门氏菌阳性为34份,阳性率为39.53%,两种方法的阳性符合率为86.17%,经统计分析,t=0.311 1,p>0.05,两种方法差异不显著。 相似文献
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Gürtürk K Ekin IH Aksakal A Solmaz H 《Journal of veterinary medicine. B, Infectious diseases and veterinary public health》2002,49(3):146-151
In this study, a dot-enzyme-linked immunosorbent assay (Dot-ELISA) was evaluated in comparison with a complement fixation test (CFT) for the detection of Campylobacter antibodies in sheep sera. Acid glycine extracts (AGE) of both Campylobacter fetus ssp. fetus and Campylobacter jejuni strains that had been isolated from the gall-bladder of slaughtered sheep was used as antigen in both tests. A total of 153 sheep sera from aborted (74) and slaughtered (79) sheep were examined by both Dot-ELISA and CFT. Twenty-two sera showed anti-complementary activity were not suitable for CFT. Of the 22 sera showing anti-complementary activity, two sera were found to be positive in Dot-ELISA. Eighty-eight (67.2%) of the remaining 131 sera were negative by both Dot-ELISA and CFT using AGE of both Campylobacter strains whereas 43 sera (32.8%) gave different reaction patterns in Dot-ELISA and CFT with the extracts of both Campylobacter strains. Twelve sera were positive by both tests using AGE of C. fetus ssp. fetus but CFT failed to detect antibodies in nine of these sera when AGE of C. jejuni was used. Twelve sera were positive by both tests only when AGE of C. fetus ssp. fetus was used. Eleven sera were positive only by CFT. Seven of these reacted only with the AGE of C. fetus ssp. fetus and four sera were positive by using AGE of both Campylobacter strains. The remaining eight sera were found to be positive only by dot-immunobinding assay either with the AGE of both Campylobacter strains or with the AGE of one of the Campylobacter strains. It is concluded that Dot-ELISA using AGE from C. fetus ssp. fetus could be employed for the detection of Campylobacter antibodies in sheep sera and the additional use of AGE from C. jejuni as antigen appeared not to be profitable for this purpose. 相似文献
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检测禽流感病毒抗体的重组核蛋白间接ELISA方法的建立 总被引：9，自引：3，他引：9
以大肠杆菌系统表达的H9N2亚型禽流感病毒（AIV）核蛋白（NP）为抗原，建立了禽流感间接酶联免疫吸附试验抗体检测技术（NP—ELISA）。对263份待检血清（包括临床收集的243份血清和20份H9N2亚型AIV免疫鸡阳性血清）进行检测，NP—ELISA与琼脂免疫扩散试验（AGP）的总符合率为83．3％，与血凝抑制试验（HI）的总符合率为92％。特异性试验表明，NP—ELISA方法可以检测H5、H7和H9亚型AIV特异性抗体，检测为阳性的血清样品能够被阳性鸡胚尿囊液阻断。敏感性试验证实，NP—ELISA最早可以检测鸡感染后7d的血清样品，并于感染后10d确定100％血清阳性，而AGP检测直到首免后21～28d才出现部分血清阳性，HI检测直到10～14d才出现部分血清阳性，并且NP-ELISA要比HI敏感4～40倍。试验证明，NP—ELISA是检测AIV血清型特异性抗体的一种特异、敏感、快速、经济的血清学检测技术。 相似文献
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以硝酸纤维膜为固相载体 ,利用沙门氏菌多价血清和辣根过氧化物酶 (HRP)标记制备的羊抗兔IgG ,成功地建立对火腿肠中沙门氏菌的Dot ELISA检测法 ,同时 ,采用常规分离培养鉴定技术作为对照试验 ,对 80份火腿肠进行了沙门氏菌的检测。结果显示 ,在 80份火腿肠中 ,用Dot ELISA检出沙门氏菌阳性为 2 2份 ,阳性率为 2 7 3 % (2 2 80 ) ;而常规分离培养鉴定技术检出沙门氏菌阳性为 2 0份 ,阳性率 2 5 0 0 % (2 0 80 ) ,两种方法的阳性符合率为 86 3 6% (P >0 0 5 )。 相似文献