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两种方法纯化免抗绵羊肺炎支原体IgG的比较 总被引：2，自引：0，他引：2
目的:比较两种方法纯化兔抗绵羊肺炎支原体IgG的效果。方法:采用饱和硫酸铵和辛酸-硫酸铵两种方法分离纯化兔抗绵羊肺炎支原体抗体,并用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、分光光度计和琼脂扩散(AGP)试验对纯化产物进行相对分子质量、蛋白质含量及免疫活性进行鉴定。结果:纯化后抗体的蛋白含量基本相同;产物纯度和效价以辛酸-硫酸铵法较高。结论:辛酸硫酸铵法是一种简便、快速、高效的抗体纯化方法。 相似文献
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本试验分别用蛋白G亲和层析法、饱和硫酸铵法和辛酸-硫酸铵法纯化兔抗H9N2亚型禽流感病毒血清,发现蛋白G亲和层析法纯化得到的抗体纯度最高,回收率较低,抗体活性未变,操作简便,但成本较高,适合实验室研究及小量样品的纯化;饱和硫酸铵法纯化得到的抗体纯度较蛋白G亲和层析法低一些,抗体活性不变,可通过多次盐析来提高抗体纯度,多作为蛋白G亲和层析法纯化前的初步纯化;辛酸-硫酸铵法纯化得到的抗体纯度不及前两种方法,回收率较高,抗体活性亦无改变,纯化时对pH的精确性和辛酸的浓度要求较高,多用于样品的粗提和单抗的纯化。 相似文献
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小鼠腹水IgG类单克隆抗体纯化方法的研究 总被引：9，自引：0，他引：9
分别采用辛酸硫酸铵法(CA AS)、硫酸铵沉淀法(AS)和DEAE离子交换层析法对小鼠IgG腹水进行了纯化效果的比较。结果表明:CA AS法提取IgG的纯度为67.5%,高于AS法(43.2%),低于DEAE法(100%);CA AS法提取IgG的回收率为51.2%,远高于DEAE(8.9%),略低于AS法(63.8%)。将不同纯化方法获得的IgG定容至相同浓度。ELISA试验结果表明:DEAE法的OD值明显降低,表明DEAE纯化方法降低了IgG的免疫学活性。说明CA AS法是一种操作简单、成本低、纯化效果和回收效果较佳的提取小鼠腹水IgG的首选方法。 相似文献
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本试验采用辛酸去脂、饱和硫酸铵溶液盐析法提纯鹅卵黄抗体IgY,采用SDS-PAGE方法分析其纯度;用纯化后的IgY免疫试验兔,收集血清,测定血清抗体效价;采用辛酸-硫酸铵法结合Protein G树脂亲和层析法纯化免血清IgG,用改良的高碘酸钠法进行辣根过氧化物酶标记,直接ELISA法测定标记物效价.结果表明,提纯的鹅卵黄IgY浓度为11.5 mg/mL,纯度约为92％;血清琼脂扩散抗体效价为1∶32;Western Blotting试验证明,兔血清中含有抗鹅卵黄抗体IgY重链及轻链的特异性抗体;直接ELISA法测得标记物效价为1:1 100. 相似文献
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分别采用饱和硫酸铵法和辛酸—硫酸铵法纯化兔抗酸性红73(acid red 73,AR73)免疫球蛋白G(IgG)。通过二喹啉甲酸(BCA)法、十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)试验、间接ELISA法分别测定IgG的浓度、纯度及效价。结果显示,饱和硫酸铵法所提IgG浓度为36.44 mg/mL,最高效价达1.6×105;辛酸—硫酸铵法所提IgG浓度为15.79 mg/mL,最高效价达3.2×105。提示,辛酸—硫酸铵法IgG纯度优于饱和硫酸铵法。 相似文献
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兔抗O型口蹄疫VLPs酶标抗体的制备及初步应用 总被引：1，自引：0，他引：1
为制备兔抗O型口蹄疫病毒样颗粒(VLPs)的酶标抗体,进一步建立O型口蹄疫病毒的ELISA检测方法,通过原核表达、体外纯化和组装O型口蹄疫VLPs,免疫家兔制备兔抗O型口蹄疫VLPs高免血清,并采用亲和层析法纯化IgG,改良过碘酸钠法制备兔抗O型口蹄疫VLPs的酶标抗体(rabbit anti-type O foot-and-mouth disease IgG-HRP)。结果显示,兔抗O型口蹄疫VLPs高免血清效价达1∶4 096,纯化后的IgG纯度达90%,效价达1∶512 000。表明获得了高纯度的兔抗O型口蹄疫VLP的酶标抗体,可用于O型口蹄疫的ELISA检测。 相似文献
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采用不同的方法纯化相思子毒素单抗,寻求一种效果好、操作简便的纯化方法。采用硫酸铵沉淀法、辛酸-硫酸铵法和硫酸铵-蛋白A亲和层析法三种方法分离纯化相思子毒素单抗,并采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、BCA蛋白检测试剂盒(BCA Protein Assay Kit)和双抗夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)对纯化产物进行相对分子质量、浓度、纯度、回收率及免疫活性的鉴定。结果表明,纯化后单抗的回收率以硫酸铵沉淀法及辛酸-硫酸铵法较高,硫酸铵-蛋白A亲和层析法较低;产物纯度以硫酸铵-蛋白A亲和层析法和辛酸-硫酸铵法较高,硫酸铵沉淀法较差;不同方法纯化后的单抗活性未见降低。 相似文献
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为了研究兔抗鹅IgG酶标抗体的制备,试验采用水稀释-辛酸-硫酸铵法粗提,透析除盐,DEAEA-50纤维素层析相结合的方法提取鹅卵黄IgG,经核酸蛋白检测仪和SDS-PAGE测定IgG浓度;制备兔抗鹅IgG酶标抗体;利用酶标抗体检测小鹅瘟病毒(GPV)VP3基因疫苗的免疫效果。结果表明,粗提的IgG浓度为10 mg/mL,抗体纯度可达到94.5%;免疫扩散得出兔抗鹅 IgG抗血清效价约 1∶32,抗体酶标后效价为1∶3000;酶标抗体可以作为检测疫苗效果一种很好的工具。 相似文献
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人血清中分离纯化鸡IgG、IgM的实用方法 总被引：4，自引：0，他引：4
本试验用绵羊红细胞免疫鸡,免疫后5天采血,制备富集IgM血清。应用硫酸铵粗提、Sepharose-4B分子筛层析方法,从富集IgM的鸡血清一次性分离提取高纯度的IgM及纯度较高的IgG,DEAE－52纤维素离子交换层析进一步纯化,获得电泳纯的IgG。经鉴定该方法制备的IgG,IgM完全可以满足免疫学实验要求,从一份血清样品中同时纯化IgG、IgM两种免疫球蛋白,既省时又节省原料。 相似文献
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鸡IgG快速分离纯化和纯度鉴定 总被引：5，自引：0，他引：5
随着免疫学实验技术的普及和发展,从鸡高免血清中提纯IgG已成为常用的免疫化学技术. 在提纯鸡IgG过程中,不但要保证除去绝大多数杂蛋白和白蛋白,保留大多数免疫球蛋白,包括各种IgG亚类,而且又不影响IgG生物活性.这就需要一种好的提纯方法,既要保证IgG纯度,又要保证其生物活性. IgG的经典提纯法是先用硫酸铵盐析,得到粗制的Ig(Immoun-globulin)然后再经分子筛层析,离子交换层析,亲和层析等方法进一步分离纯化IgG.这些纯化方法需要一定的仪器、设备,操作复杂,工艺流程较长,且试剂昂贵,在一般实验室难以推广使用.而且辛酸-硫酸铵两步法提纯的IgG同样能得到高纯度、高生物活性的IgG. 相似文献
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1酶联免疫吸附试验抗原采用猪囊尾蚴的囊液,经亲和层析纯化、浓缩、分装后,于-20℃保存,使用前,用0.1M pH值9.6醋酸盐缓冲液稀释,使蛋白含量为30毫克/分升.酶结合物用兔抗猪IgG免疫血清,经硫酸铵盐析沉淀,再经DEAE-纤维素纯化提取免疫抗猪IgG抗体,用辣根过氧化物酶标记兔抗猪IgG,经酶活力测定,应用时最适稀释浓度为1∶1000。操作方法为,以40孔聚苯乙烯微量反应为固相 相似文献
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<正> 为了加强冻兔肉的卫生检测,保证出口产品不带兔出血症病毒(RHDV),我们建立了双夹心ELISA技术,并与常规的HA—HI试验进行了对比,取得了满意的结果,特报告如下: 1 材料和方法1.1 兔抗RHDV IgG的提纯取琼扩效价1:64的RHDV阳性血清(南京农业大学兽医微生物组提供),按常规用饱和硫酸铵盐析进行粗提,然后经DEAE纤维素DE—52层析柱进一步纯化,并测定蛋白含量和琼扩效价。均按《酶标技术》一书介绍的方法进行。 相似文献
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本文对鸭血清分别采用了硫酸钠法、辛酸-硫酸铵法、硫酸铵法进行了鸭IgG的提取。提取后的鸭IgG样品用纯度和蛋白含量两个指标来衡量。用辛酸-硫酸铵法提取的鸭IgG样品蛋白含量为9.45mg/ml,纯度能达到用于免疫标记技术的要求,而且操作简单、价格低廉,适于从大批量样品中提纯鸭IgG;用硫酸钠法提取的鸭IgG样品蛋白含量为9.14mg/ml,相对较高,但纯度较低;用硫酸铵法提取的鸭IgG样品蛋白含量、浓度都较低。 相似文献
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鸭IgG提取方法的比较试验 总被引：7，自引：0，他引：7
用辛酸－硫酸铵法提取鸭IgG并与传统提取方法硫酸钠、硫酸铵法进行比较，结果表明，3种方法回收的IgG依次为12．35、8．36和10．14mg/mL，而且辛酸－硫酸铵法回收IgG纯度高，可用于免疫标记，比色谱层析快速、操作简单、价格低廉。用该法以鸭卵黄提取IgG，回收的IgG为13．58mg/mL，氯仿法为8．55mg/mL，PEG不能回收；辛酸－硫酸铵法从鸭卵黄得到的IgG活性最高。 相似文献