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通过除菌抗生素的筛选试验、叶片对头孢唑啉钠的敏感试验、叶片对卡那霉素的敏感度试验、茎段对卡那霉素的生根敏感试验，成功建立了欧美杨108号转蜘蛛杀虫肽与Bt毒蛋白嵌合基因的转化系统。转化时所选的除菌抗生素为注射用头孢唑啉钠；除菌时，头孢唑啉钠的质量浓度为1000mg／L；在筛选转化体时，卡那霉素的临界质量浓度确定为30mg／L；确定了生根培养基中卡那霉素的临界质量浓度为20mg／L。欧美杨108号转蜘蛛杀虫肽与Bt毒蛋白嵌合基因转化系统的成功建立为该杨树品种的基因工程提供了前提条件。 相似文献
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3.
[目的]研究大豆子叶节对卡那霉素的敏感性,以期为大豆的遗传转化和抗性筛选提供试验依据。[方法]选用3个不同基因型大豆为试验材料,以黄化率和分化率为指标,研究了不同浓度的卡那霉素对大豆子叶节分化和丛生芽生根的影响。[结果]不同基因型大豆对卡那霉素的敏感性不同,子叶节分化的卡那霉素临界筛选浓度为:垦农18为40 mg/L、绥农14和垦农4为60 mg/L;丛生芽生根的卡那霉素临界筛选浓度为:垦农18为15 mg/L、绥农14和垦农4为20 mg/L。[结论]该研究结果为大豆的遗传转化和抗性筛选奠定了基础。 相似文献
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以84K杨为研究对象,通过建立叶片再生系统及卡那霉素敏感性试验,确立了稳定高效的基因转化受体系统。结果表明,以MS培养基为基本培养基,0.5～1.0mg/L6-BA+0.01～0.1mg/LNAA组合时,叶片出芽率不到50%,每叶平均生芽数5～6个;1.0～1.5mg/L6-BA+0.02mg/L2,4-D组合时,叶片出芽率达90%～100%,每叶平均生芽数约20个。用后者附加不同质量浓度梯度卡那霉素,确定叶片外植体芽诱导卡那霉素临界筛选质量浓度为20mg/L。利用对84K杨芽生根效果较好的培养基GMS+0.01mg/LNAA+0.25mg/LIBA,附加不同质量浓度梯度卡那霉素,筛选出芽生根卡那霉素临界质量浓度亦为20mg/L。 相似文献
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颠茄高频再生体系的建立及卡那霉素抗性筛选（摘要） 总被引：1，自引：0，他引：1
[目的]建立颠茄高频再生体系及筛选卡那霉素（Kan）抗性。[方法]以颠茄叶片及腋芽为外植体,研究了培养基中6-BA和NAA不同配比对其不定芽分化的影响以及叶片不定芽对Kan的敏感性。[结果]MS＋4.5mg/L6-BA＋0.2mg/LNAA为叶片不定芽分化的最佳培养基,不定芽分化率达100%,在1.0cm×1.0cm叶块上的不定芽分化数平均达5.85;MS＋3.0mg/L6-BA＋0.1mg/LNAA为腋芽不定芽分化的最适培养基,不定芽分化率达100%,每个腋芽不定芽分化平均数为4～8个;400.0mg/LKan为颠茄叶片遗传转化的最佳筛选浓度。[结论]为颠茄无菌苗的快速繁殖以及基于叶盘法的遗传转化奠定了基础。 相似文献
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几种抗生素对山新杨离体叶片不定芽再生的影响 总被引：3，自引：0，他引：3
以山新杨无菌苗幼叶为试材,分别研究了3种选择剂卡那霉素、新霉素、G418和4种押菌剂头孢噻肟钠、头孢唑林钠、头孢曲松钠及羧苄青霉素对山新杨离体叶片不定芽再生的影响。结果表明:浓度为20 mg/L的卡那霉素和浓度为50mg／L的新霉素作为山新杨叶片转化的选择压是合适的,而G418不是山新杨叶片转化的最佳选择剂。在4种押菌抗生素中,头孢唑林钠对不定芽的再生没有影响,但褐化率高,羧苄青霉素抑制不定芽的再生,故二者均不适合作为山新杨遗传转化的抑菌剂;头孢噻肟钠和头孢曲松钠对不定芽的再生影响不大,是山新杨遗传转化的最佳抑菌剂。 相似文献
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探讨了卡那霉素对小黑杨花粉植株叶片分化及试管苗生根的影响。确立了由农杆菌介导的的小黑杨花粉植株遗传转化研究中转化体的筛选浓度,其中叶片转化筛选阶段卡那霉素的浓度为:20 mg.L-1～40mg.L-1;抗性芽生根培养阶段卡那霉素的浓度为20 mg.L-1。 相似文献
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银白杨遗传转化中抗生素浓度优化的研究 总被引：8，自引：0，他引：8
该文探讨了卡那霉素、G418、羧苄青霉素和头孢霉素4种抗生素对银白杨不同培养阶段外植体生长、分化或生根的影响,确立了由农杆菌介导的银白杨遗传转化研究中抗生素种类和转化体的筛选浓度.结果表明:在叶片转化筛选阶段,卡那霉素和G418的适宜浓度分别为15和10 mg/L,羧苄青霉素和头孢霉素的适宜浓度为200～600 mg/L和200～400 mg/L;在抗性芽生根培养时,卡那霉素和G418浓度分别为20～25 mg/L和15～20 mg/L,羧苄青霉素和头孢霉素浓度为200～800 mg/L和200～600 mg/L.头孢霉素或羧苄青霉素的抑菌效果因农杆菌菌株的不同而存在差异,羧苄青霉素对农杆菌LBA4404抑制效果好,头孢霉素对农杆菌C58抑制效果理想. 相似文献
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黄瓜高效遗传转化体系的建立及银杏抗菌肽转化 总被引：2，自引：0，他引：2
建立黄瓜的高效再生和遗传转化体系,并进行银杏抗菌肽GK-2的遗传转化。研究结果表明,MS6(MS+0.005 mg/L TDZ+0.20 mg/L IAA)培养基适于黄瓜愈伤组织的形成和不定芽分化,7 d即可分化出不定芽,出愈率和分化率分别高达100%和86.67%。进一步用带有银杏抗菌肽GK-2目的基因的农杆菌转化黄瓜,筛选出了侵染时间20 min、共培养时间3 d以及卡那霉素抗性筛选质量浓度为100 mg/L的最佳转化体系。利用该体系转化黄瓜,获得的转化植株阳性率高达17.9%,并对黄瓜枯萎病表现出明显的抗性。 相似文献
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洋桔梗Double Mariachi Rink高效遗传转化体系的建立 总被引：1，自引：0，他引：1
以洋桔梗品种Double Mariachi Pink为供试材料,探讨影响根癌农杆菌介导法遗传转化的一些因素,包括Cb(羧苄青霉素)脱菌浓度、Km(卡那霉素)筛选浓度、农杆菌的侵染浓度和预培养时间等.研究结果表明:脱菌培养基中Cb的浓度为200mg/L时,抑制农杆菌生长但不显著影响叶片不定芽分化;不定芽分化阶段和生根阶段的适宜Km筛选浓度分别为30mg/L和15mg/L;外植体预培养3d,在D600nm≈0.5的农杆菌菌液中侵染10 min后,Km筛选得到的抗性植株GUS染色蓝斑率最高,达到86.7%. 相似文献
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黄梁木遗传转化受体系统对筛选物敏感性研究 总被引：1，自引：0，他引：1
【目的】明确农杆菌介导的黄梁木遗传转化体系对筛选物的敏感浓度,为黄梁木遗传转化研究奠定基础。【方法】以黄梁木子叶、胚轴和无菌苗为材料,探讨筛选物卡那霉素、潮霉素、头孢霉素对试验材料生长的影响,以及对农杆菌LBA4404的抑菌效果。【结果】在不定芽分化、生根阶段,卡那霉素的临界浓度分别为20、10 mg/L,潮霉素的临界浓度均为10 mg/L;当头孢霉素的浓度为100 mg/L时,完全抑制农杆菌生长,而且该浓度对黄梁木不定芽分化、生根影响较小。【结论】在黄梁木子叶和胚轴为试验材料的遗传转化体系中,20和10 mg/L的卡那霉素可作为不定芽分化、生根阶段的筛选选择压,10 mg/L的潮霉素可作为两个阶段的筛选选择压;而100～200 mg/L的头孢霉素可作为农杆菌LBA4404的抑菌浓度。 相似文献
12.
抗生素对油葵不定芽产生率的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
研究了卡那霉素和羧苄青霉素对油葵不定芽的诱导及生长的影响.在以卡那霉素为抗性选择标记时,对油葵不定芽起完全抑制作用的Km临界浓度在75～100 mg/L;在以羧苄青霉素为抑菌剂用于油葵遗传转化试验时,其浓度为300 mg/L时即可有效抑制农杆菌的生长,同时又不会对不定芽的诱导及生长产生明显的伤害作用.试验结果表明,卡那霉素及羧苄青霉素均可作为油葵转化植株的有效筛选、抑菌剂. 相似文献
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[目的] 建立高效稳定的甘菊再生体系,并确定卡那霉素和草丁膦的筛选压。[方法] 以甘菊无菌苗叶片为外植体,通过添加不同浓度的NAA和6-BA建立了甘菊遗传转化再生体系。[结果] 在5种芽诱导培养基中,MS3（MS＋NAA 0.1mg/L＋6-BA0.1mg/L）的再生频率最高,可达98%,其不定芽生根率可达100%。培养35d后,添加5和10mg/L卡那霉素的培养基上甘菊再生率为11.3%和10%,添加15和20mg/L卡那霉素的培养基上没有芽的分化;添加0.5mg/L草丁膦的培养基上甘菊再生率为8.7%,添加1mg/L草丁膦的培养基上没有芽的再生,添加1.5和2.0mg/L草丁膦的培养基上没有芽的分化。卡那霉素和草丁膦在甘菊遗传转化中的筛选浓度分别为8.0和0.8 mg/L。[结论] 该研究为进行甘菊转基因试验打下了基础。 相似文献
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以杂种白杨353为研究材料,利用农杆菌介导法转化p AB5启动子诱导外源基因删除系统,采用正交实验设计,以叶盘分化率为评价指标,优化转化过程中主要影响因子。结果表明:优化体系为菌液OD600值0.8,侵染时间8 min,乙酰丁香酮浓度200μmol/L,分化培养基中卡那霉素浓度35 mg/L,头孢霉素浓度350 mg/L,抗性芽生根时的筛选卡那霉素选择压25 mg/L。采用上述遗传优化体系,杂种白杨353叶盘分化率达80.00%,抗性植株经PCR检测,初步确认pAB5启动子诱导的外源基因删除系统已转入其基因组中,为检测外源基因删除系统在杨树中的有效性提供了参考依据。 相似文献
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以中华猕猴桃伏牛95-2的组培苗叶片为外植体,研究不同浓度生长调节剂对其愈伤组织、不定芽诱导和生根的影响及其对卡那霉素的敏感性,从而建立高效稳定的中华猕猴桃伏牛95-2的受体系统.结果表明,中华猕猴桃伏牛95-2的最佳愈伤组织及不定芽诱导培养基为MS+ 1.0 mg/L ZT+0.3 mg/L NAA,在此培养基条件下,其不定芽分化率、每个叶盘不定芽的分化数均较高,分别为87.50％、4.2个;最佳生根培养基为1/2MS +2.0 mg/L NAA,生根率达100.00％.当卡那霉素浓度大于10 mg/L时,能够明显抑制愈伤组织的生长,且随着浓度的增加,愈伤组织死亡率逐渐增大;当卡那霉素浓度为20 mg/L时,愈伤组织及不定芽的分化率均为0,因此20 mg/L卡那霉素浓度为中华猕猴桃伏牛95-2叶片遗传转化的最佳筛选浓度. 相似文献
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抗生素对根癌农杆菌的抑菌作用及对新西伯利亚黑杨组培叶片再生的影响 总被引：3，自引：0，他引：3
以新西伯利亚黑杨(Populus nigra×Populus pyramidalis)为试材,探讨了不同质量浓度的头孢霉素、羧苄青霉素、头孢曲松钠和头孢唑啉钠对叶片不定芽分化的影响,并利用4种不同质量浓度的抗生素对农杆菌EHA105的抑菌效果进行了分析,确立了由农杆菌介导的新西伯利亚黑杨遗传转化中最佳抑菌抗生素是头孢霉素和羧苄青霉素,抑菌的适宜质量浓度为300～400mg·L-1.此外还研究了不同质量浓度的G418、卡那霉素和新霉素对新西伯利亚黑杨叶片不定芽分化及组培苗生根的影响,确定了各阶段筛选转化体的G418、卡那霉素和新霉素的适宜质量浓度,即叶片转化筛选培养时,G418质量浓度为3～4mg·L-1、卡那霉素质量浓度为30～40mg·L-1、新霉素质量浓度60～80mg·L-1;在抗性芽生根培养时,G418质量浓度为3～4mg·L-1、卡那霉素质量浓度为20～30mg·L-1、新霉素质量浓度60～80mg·L-1. 相似文献
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为筛选最适盆栽小菊品种,建立再生转化体系,以11个盆栽小菊品种无菌苗叶片为外植体,比较不同植物生长调节剂配比和抗生素对叶片愈伤组织诱导、不定芽分化及生根等过程的影响。结果表明,11个品种中再生率最高的为微风深红,其最适分化培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA,再生率为95.0%;叶片分化对卡那霉素和潮霉素的抗性选择压分别为15、10 mg/L;对植株生根的抗性选择压分别为10、8 mg/L;羧苄青霉素抑菌浓度最适范围为200～400 mg/L。本研究建立了盆栽小菊叶片外植体的高效再生及转化体系,为今后菊花的转基因工作奠定良好的基础。 相似文献
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研究头孢噻肟钠、头孢曲松钠、头孢拉啶、头孢他啶4种头孢类抗生素对根癌农杆菌LBA4404和EHA105的抑制作用;以欧美杨111和盖杨组培苗为材料,研究卡那霉素（Km）对2种杨树叶片分化及茎段生根的影响,并分析头孢噻肟钠对欧美杨111叶片分化及茎段生根的影响。结果表明,头孢噻肟钠、头孢曲松钠和头孢他啶对LBA4404具有良好的抑菌效果,使用浓度为50 mg/L,其中头孢噻肟钠对农杆菌EHA105的抑菌效果最好,头孢拉啶抑菌效果较差。不同杨树品种对卡那霉素的耐受性差异不大,欧美杨111在叶片转化筛选培养时,使用浓度为10 mg/L,抗性芽生根阶段为20 mg/L;盖杨在叶片转化筛选培养时,卡那霉素使用浓度为20 mg/L,抗性芽生根阶段为25 mg/L,头孢噻肟钠对欧美杨111叶片分化和茎段生根影响不大。 相似文献
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二色胡枝子遗传转化中抗生素浓度优化研究 总被引：1，自引：0，他引：1
探讨了卡那霉素、G418和头孢霉素3种抗生素对二色胡枝子不同培养阶段外植体生长、分化和生根的影响及对农杆菌的抑菌效果.确立了由农杆菌介导的二色胡枝子遗传转化研究中抗生素转化体的筛选浓度和头孢霉素对菌株的抑菌浓度.结果表明:在子叶节转化筛选阶段,卡那霉素和G418的适宜浓度分别为20 mg/L和7.5 mg/L;在抗性芽增殖培养阶段.卡那霉素和G418浓度分别为150 mg/L和15.0 mg/L;在生根阶段,卡那霉素和G418浓度分别为20 mg/L和5.0mg/L.而头孢霉素在各阶段适宜浓度为0～300 ms/L;头孢霉素对农杆菌LBA4404和C58抑制浓度为200～300 mg/L时效果理想. 相似文献
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[目的]以英国薰衣草叶片为材料,创建稳定高效的农杆菌介导薰衣草的遗传转化体系.[方法]未经预培养的英国薰衣草叶片,在OD600=0.4的根癌农杆菌菌液中浸染10 min,共培养1d后,在Cef抑菌浓度为300 mg/L、Kan筛选浓度为30 mg/L的选择培养基上诱导芽分化,抗性芽在Kan浓度为10 mg/L生根培养基上诱导生根.[结果]对筛选得到的65株抗性苗进行PCR检测,获得2株阳性植株,转化率达到3.00;.[结论]建立了稳定高效的农杆菌介导英国薰衣草的遗传转化体系. 相似文献