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1.
猪生殖和呼吸综合征病毒中国分离株B13株ORF5基因在杆状病 … 总被引：4，自引：0，他引：4
本研究将ＰＲＲＳＶＢ１３株ＯＲＦ５基因克隆到杆状病毒转移载体质粒ｐＶＬ１３９３中,构建了重组转移载体质粒ｐＶＬ１３９３－ＯＲＦ５。用该重组转移载体质粒与线性化苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｃＭＮＰＶ－ＳＶＩ Ｇ）基因组ＤＮＡ（ＢａｃｕｌｏＧｏｌｄ Ｌｉｎｅａｒｉｚｅｄ Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ ＤＮＡ）共转染草地夜蛾（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ,ｓｆ９）细胞,得到重组病毒ＡｃＭＮＰＶ 相似文献
2.
本研究克隆了萤光假单胞菌ＡＳ１．５５（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓＡＳ１．５５）的亮氨酸基因（ｌｅｕ＾＋）ＥｃｏＲＩ片段（－６．６ｋｂ）,并获得含有该片段的重组质粒ｐＢＲ３２２－ＬＥＵ。从ｐＢＲ３２２－ＬＥＵ质粒中分离出ｌｅｕ＾＋ＥｃｏＲＩ片段,将其插入到ｎｉｆＡ质ｐＭＣ７１Ａ的ＥｃｏＲⅠ位点使氯霉素抗性基因失活,从而构建了不带抗药性基因ｎｉｆＡ质粒ｐＭＣ７１Ａ－ＬＥＵ。 相似文献
3.
用根据国外已报道的甜菜坏死黄脉病毒（ＢＮＹＶＶ）的ＲＮＡ２的序列合成的两个引物，通过对ＢＮＹＶＶ新疆分离物的ＲＮＡ逆转录获得了ＢＮＹＶＶ的外壳蛋白基因的ｃＤＮＡ，经ＰＣＲ扩增后用Ｔ４聚合酶补平两端，克隆到ｐＧＥＭ－７Ｚｆ（＋）质粒的ＳｍａＩ位点，转化大肠杆菌ＤＨ５α，经筛选得到正向插入的重组质粒ｐＧＥＢ３。用ＰＣＲ扩增和酶切均得到５９０ｂｐ的ＤＮＡ片段。用ＡＢＩ３７０Ａ型ＤＮＡ全自动序列仪测出该ｃ 相似文献
4.
含与不含前导序列的乙肝病毒表面抗原在转基因番茄中表达的研究 总被引：24，自引：2，他引：22
将携带有乙型肝炎病毒（ａｄｗ亚型）表面抗原（ＨＢｓＡｇ）基因和ＨＢｓＡｇ及其前导序列（ＨＢｓＡｇ＋ｐｒｅＳ１＋ｐｒｅＳ２）基因的植物表达载体ｐＲＯＫＩＩ，分别导入农杆菌ＬＢＡ４４０４中，通过叶盘转化法得到转基因番茄及其后代。Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交证明现任中外源基因已插入到植物染色体中。ＥＬＩＳＡ检测结果表明用ＨＢｓＡｇ基因转化的番茄叶片和果实中都能表达ＨＢｓＡｇ，而用含ｐｒｅＳ的ＨＢｓＡｇ基 相似文献
5.
根据已发表的ＩＢＤＶ基因组序列设计并合成一对特异扩增ＩＢＤＶ ＶＰ２ｃＤＮＡ的引物，以纯化的ＩＢＤＶ－Ｄ７８弱毒疫苗株基因组为模板，利用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增出约１．５ｋｂ产物。将ＰＣＲ产物克隆到ｐＵＣ１９的Ｓｍａｌ位点，经酶切图谱分析等方法鉴定出重组ＶＰ２ｃＤＮＡ质粒（ｐＶＰ２）。将ＶＰ２基因正向插入ＦＰＶ启动子ＬＰ２３Ｐ２下游，连同痘苗病毒启动子Ｐ１１启动的ＬａｃＺ报告基因盒插入ＦＰＶ转移载体中 相似文献
6.
核酸探针检测人工感染猪及死胎的猪繁殖与呼吸综合症病毒 总被引：3，自引：0，他引：3
利用反转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术扩增出猪繁殖与呼吸综合症病毒（ＰＲＲＳＶ）美洲株ＡＴＣＣ ＶＲ－２３３２ＯＲＦ６及部分ＯＲＦ７５８６ｂｐ的ｃＤＮＡ。将ＰＣＲ产物连接进线状克隆载体ｐＧＥＭ－Ｔｅａｓｙ ｖｅｃｔｏｒ后获阳性重组质粒。用ＥｃｏＲＩ及ＳｍａＩ双酶切阳性重组质粒ＤＮＡ,回收４６３ｂｐ的小片段并以此制备出地高辛标记的核酸探针。应用该探针对４头鼻内人工感染ＡＴＣＣＶＲ－２３３２的 相似文献
7.
鸡传染性法氏囊病毒cDNA文库的建立及核酸探针的制备 总被引：1，自引：0，他引：1
利用氯化铯－蔗糖超速离心法纯化了细胞培养的鸡传染性法氏囊病（ＣＪ－８０１株）。经蛋白酶Ｋ消化，酚抽提得到的基因组ＲＮＡ在ＡＭＶ反转录酶催化下合成双链ｃＤＮＡ，通过Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ４００柱层析得到４００ｂｐ以上的大片段。将其重组到载体质粒ｐＵＣ１９的ＳｍａＩ酶切位点上，转化大肠杆菌ＮＭ５２２株。通过α－互补鉴定重组体克隆，从而构建了ＩＢＤＶ的ｃＤＮＡ文库。从文库中筛选出三个重组子作为用于ＩＢＤＶ诊 相似文献
8.
MBP-狂犬病毒NP融合蛋白在大肠杆菌中的表达及NP的纯化 总被引：2，自引：0，他引：2
将狂犬病毒核蛋白结构基因重组到原核表达质粒ｐＭＡＬ－Ｃ２Ｘ中,经ＩＰＴＧ诱导表达出的ＭＢＰ－ＮＰ融合蛋白分子量约９８ｋＤ;用支链淀粉琼脂糖凝胶亲和层析纯化得到电泳均一的融合蛋白,融合蛋白用因子Ｘａ裂解后,经Ｑ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ离子交换层析可将ＭＢＰ与ＮＰ分开,得到了电泳均一、分子量约５６ｋＤ的ＮＰ蛋白,经Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析证实抗原性正确,为进一步利用ＮＰ蛋白制备抗体或单克隆抗体打下了基 相似文献
9.
狂犬病病毒3aG株核蛋白基因cDNA的克隆及序列分析 总被引：1，自引：0，他引：1
从狂犬病病毒感染的ＢＨＫ细胞裂解上清液中快速提取病毒ＲＮＡ,用反转录－聚合式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法得到编码核蛋白完整结构基因的ｃＤＮＡ,进一步将此基因克隆入ｐＵＣ１８中,进行核苷酸序列分析,并与国外ＰＶ、ＣＶＳ、ＳＡＤＢ１９株以及国内５ａＧ株的Ｎ基因序列进行了同源性比较,证明所克隆Ｎ基因正确。 相似文献
10.
甘薯羽状斑驳病毒外壳蛋白基因在大肠杆菌中的表达及特异抗血清的制备 总被引：12，自引：0，他引：12
根据已报道的甘薯羽状斑驳病毒（ＳＰＦＭＶ）外壳蛋白（ＣＰ）基因的核苷酸序列合成引物,利用ＲＴ－ＰＣＲ的方法获得ＣＰ基因后,再将其克隆到原核表达载体ｐＥＴ３０ａ（＋）中。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明,经ＩＰＴＧ诱导,ＣＰ基因在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳ中获得了高效表达。以含表达产物的凝胶为抗原,免疫家兔,制备了ＳＰＦＭＶ外壳蛋白的特异性抗血清。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ和点免疫（Ｄｏｔｂｏ 相似文献
11.
细粒棘球蚴生发层细胞系可溶性抗原的免疫学及SDS-PAGE分析 总被引：3，自引：0，他引：3
本研究报道了细粒棘球蚴生发展细胞可溶性抗原的免疫学研究结果及ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果，将原头节可溶性抗原，生发展可溶性抗原，囊液抗原免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠制备抗血清并用原头节人工感染Ｂａｌｂ／ｃ小鼠制备阳性鼠血清，再用生发展细胞系可溶性抗原以间接ＥＬＩＳＡ法进行检测以观察该抗原的反应原性；用ｐＡｇ，ｇＡｇ，ＳＨＦ以及生发展分泌抗在分别对曾反种过细胞系细胞的Ｂａｌｂ／ｃ小鼠的血清进行检测，以了解细胞系抗原 相似文献
12.
本研究把含有β干扰素基因的植物表达载体ｐＧ２１（含有β干扰素基因的信号肽）和ｐＧ１１通过三亲结合转移到了农杆菌Ｃ５８Ｃ１（ｐＧＶ２２６０）中，并与ｐＧＶ２２０６０发生同源重组而稳定存在于它Ｔｉ质粒ｐＧＶ２２６０上，进一步用此载体把β干扰素工因转移到了烟草细胞中Ｓｏｕｔｈｅｒｎ分析证明了此基因已整合到染色体上，ＲＮＡ点杂交及ＮＰＴⅡ酶分析显示此基因植物细胞中得到了表达，实验中还发现含有ｐＧ２１的农杆 相似文献
13.
促黄体素释放激素与乙肝表面抗原嵌合基因在家蚕体内的表达 总被引：1，自引：0，他引：1
以在家蚕培养细胞中获得的重组ＢｍＮＰＶ病毒感染５龄的家蚕，在感染后第２４ｈ可以测出ＨＢｓＡｇ的活性。以后随着感染时间的延长，ＨＢｓＡｇ的量也逐渐升高。用ＥＬＩＳＡ抑制法测得每血淋巴中含ＨＢｓＡｇ－ＬＨＲＨ的量为７－１２μｇ．ｍＬ＾－１。以兔抗ＬＨＲＨ抗体对家蚕血淋巴进行免疫沉淀，在电子显微镜下观察到与乙肝病毒表面抗原大小类似的颗粒。 相似文献
14.
水稻黄单胞菌水稻变种的rpfA基因的定位和次级克隆 总被引：1，自引：0，他引：1
水稻黄单胞菌水稻变种产生两种顺乌头酸酶（ＸｏｏＡｃａｎＡ和ＸｏｏＡｃａｎＢ）,编码ＸｏｏｃａｎＡ的ｒｐｆＡ基因已被克隆在重组质粒ｐＧＸＮ３０００中。本工作通过转座子Ｔｎ５Ｂ２０诱变ｐＧＸＮ３０００,鉴定了ｒｐｆＡ基因的位置及其转录方向,并进一步将含有完整ｒｐｆＡ基因的４．８ｋｂＡｓｐ７１８ＥｃｏＲⅠ片段次级克隆到了多用途载体质粒ｐＩＪ３２００。 相似文献
15.
通过反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增了新城疫病毒（ＮＤＶ）Ｆ４８Ｅ８株核衣壳蛋白（ＮＰ）基因,并克隆到ｐＵＣＮＰ。应用分子克隆技术,将ＮＰ基因导入鸡痘病毒（ＦＰＶ）转移载体ｐＦＧ１１７５－１中Ｐ７．５启动子的下游,得到含ＮＤＶ ＮＰ基因的质粒ｐＦＧＮＰ１１７５－１。利用脂质体转染技术,将该质粒转染ＦＰＶ疫苗株２８２Ｅ４感染３－４ｈ的鸡胚成纤维细胞,采用蓝斑筛选方法纯化多次,得到稳定的重组Ｆ 相似文献
16.
脑钠肽与谷胱甘肽巯基转移酶融合蛋白的表达与分离纯化 总被引：1，自引：0，他引：1
用ＰＣＲ技术扩增获得脑钠肽－９５ｃＤＮＡ,再由它获得脑钠肽－３８ｃＤＮＡ（ＢＮＰ－３８ｃＤＮＡ）选用融合蛋白表达质粒ｐＧＥＸ－３Ｘ作载体,构建成谷胱甘肽巯基转移酶（ＧＳＴ）和ＢＮＰ－３８的融合基因,该基因在大肠杆菌ＪＭ１０９中表达的最佳体系是：以１：１０扩大培养４ｈ加入终浓度为０．５ｍｍｏｌ／Ｌ的诱导剂ＩＰＴＧ诱导培养４ｈ,诱导表达的融合蛋白量可达５６μｇ／ｍＬ,培养液,是国外文献的３．７３倍,用 相似文献
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表达鸡传染性法氏囊病病毒VP2重组鸡痘病毒的构建 总被引：2，自引：0，他引：2
含ＩＢＤＶ保护性抗原ＶＰ２的质粒,以ＳｐｈＩ消化,然后用Ｔ４噬菌体ＤＮＡ聚合酶将末端补平,产物纯化后再以ＳａｌＩ消化一次,经再次纯化后与ＳｍａＩ和ＳａｌＩ分步酶切的鸡痘病毒插入载体ｐＦＧ１１７５－１相连,使唤基因顺向插入到载体Ｐ７５启动子下游,得到含ＩＢＤ ＶＰ２基因的重组插入载体ｐＦＧ ＶＰ２。 相似文献
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鲑鱼生长激素cDNA在大肠杆菌中的表达及表达产物对罗非鱼促？… 总被引：5，自引：0，他引：5
采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术在对鲑鱼生长激素ｃＤＮＡ进行改造。将改造后的基因克隆到大肠杆菌表达质粒ｐＢＶ２２０,构建重组鲑鱼生长激素基因表达质粒ｐＢＶＧＨ１８,并在大肠杆菌中获得表达,表达量约占细胞可溶性总蛋白的１０％。表达产物经初步纯化和复性后作为饲料添加剂投喂罗非鱼,具有明显的促生长作用。 相似文献
19.
用猪瘟兔化弱毒（ＳＦＶ—Ｃ）牛睾丸细胞培养上清液，经ＰＥＧ—２００００沉淀和蔗糖密度梯度离心提纯制备ＳＦＶ—Ｃ抗原，腹腔免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，取抗体阳性的免疫小鼠脾细胞，在５０％（Ｗ／Ｖ）ＰＥＧ—４０００作用下，与ＳＰ２／０－Ａｇ１４小鼠骨髓瘤细胞进行融合，产生杂交瘤细胞。用间接ＥＬＩＳＡ法筛选阳性杂交瘤细胞株。通过有限稀释进行３次克隆，获得了２株分泌抗ＳＦＶ—Ｃ的单克隆抗体杂交瘤细胞株，并对其染色体形态和数目进行分析鉴定。 相似文献
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盐单胞菌（Ｈａｌｏｍｏｎａｓ ｓｐ．）Ｃ６与耐盐有关的可能转座酶Ａ基因长１７０７ｂｐ,编码５６８个氨基酸,其上游１￣１７１ｂｐ ＤＮＡ区域内含有核糖体结合位点ＧＡＧＧ和类似于大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ｐｒｏＵ、ｐｒｏＰ和ｇａｌｐＩ、枯草牙胞杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）白基因ｇｆｐ为报告基因,启动子探针载体ｐＨＮ１２７为载体质粒,通过亚克隆,在ｐＨＮ１２７无启动子的ｇｆｐ基因上游插入了包 相似文献