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1.
栀子高质量总RNA的提取 总被引：3，自引：1，他引：2
利用改进的高盐高pH值法和EASYspin植物RNA快速提取试剂盒,从富含次生代谢产物的栀子叶片和果实中提取总RNA。用紫外分光光度法和1%非变性琼脂糖凝胶电泳检测总RNA质量,0.7%非变性琼脂糖凝胶电泳检测反转录产物质量,利用RT-PCR反应检测反转录产物用于基因扩增的有效性。结果表明,高盐高pH值法提取的栀子果实总RNA,试剂盒法提取的栀子叶片总RNA产量均较高,28S和18S条带清晰,28S条带亮度是18S条带的2倍,且A260/A280在1.9~2.0;以提取的RNA为模板反转录的cDNA长度范围较广(250~5000 bp);上述反转录获得的cDNA均能够成功用于60S核糖体蛋白L18A基因片段的扩增。综上所述,利用高盐高pH值法提取栀子果实总RNA、利用EASYspin植物RNA快速提取试剂盒提取栀子叶片总RNA,效果最好。本研究成功建立了从栀子果实和叶片中提取高质量总RNA的方法。 相似文献
2.
《分子植物育种》2016,(4)
水茄果实中富含多糖、蛋白、色素和其他代谢物质,影响其总RNA提取的质量。本研究中比较Trizol法、改良Trizol法、改良CTAB法和两种试剂盒法5种方法提取的水茄果实总RNA,用琼脂糖凝胶电泳检测总RNA的完整性,Onedrop光谱仪检测总RNA的浓度和纯度。结果表明:改良Trizol法最为有效,该方法提取的总RNA在琼脂糖凝胶上得到清晰的28S和18S条带,OD_(260nm)/OD280nm值在1.8~2.1之间、OD_(260nm)/OD_(230nm)的比值大于2.0;改良CTAB法获得的RNA质量较好,但步骤较为繁琐,耗时长;Trizol法和试剂盒法得到总RNA浓度较低。RT-PCR试验进一步表明,以改良Trizol法获得的总RNA可用于基因分离,所得条带清晰,与目的片段大小一致且比对正确。 相似文献
3.
剑麻不同组织RNA提取方法比较分析 总被引：6，自引：0，他引：6
本研究以剑麻茎尖、花和成熟叶片为材料,比较了SDSⅠ、SDSⅡ、CTABⅠ、CTABⅡ共4种提取缓冲液组成以及Promega公司RNA提取试剂盒、Qiagen植物RNA分离试剂盒、改良Trizol法、改良SDSⅠ法、改良CTABⅠ法以及优化后的改良CTABⅠ法等6种RNA提取方法提取RNA的效果,结果表明:不同缓冲液组成对实验结果影响很大,其中缓冲液CTABⅠ提取的RNA质量和产率均较理想。6种RNA提取方法提取的RNA差异明显,其中优化后的改良CTABⅠ法可同时适合于剑麻茎尖、花和成熟叶片RNA的提取,不仅产率高,而且RNA的质量也较好,无DNA污染,OD260/OD280分别为1.87、2.04和1.98,OD260/OD230分别为2.46、2.10和2.15,产率分别为84.7μg/gFW、65.8μg/gFW和4μg/gFW。用该方法提取的RNA可满足下一步文库构建及基因克隆等分子生物学研究。 相似文献
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百合鳞片总RNA提取方法的比较 总被引：1，自引：0，他引：1
为了筛选出适合百合鳞片的总RNA的提取方法,本研究以东方百合品种Siberia的鳞片为材料,比较了Trizol法、改良Trizol法、RNA提取试剂盒以及改良CTAB法提取RNA的效果。结果表明:Trizol法、改良Trizol法及RNA plant plus Reagent提取试剂盒均不能提取到完整的RNA;离心柱型植物总RNA提取试剂盒存在DNA污染;改良CTAB法能有效去除多糖,28S条带的荧光亮度是18S条带的1.5～2倍,D260/D280值都在1.9～2.1之间,D260/D230值大于2,两个样品的平均得率分别为103.57μg/g和119.21μg/g,说明此方法适合百合鳞片RNA的提取。RT-PCR结果扩增出了特异性条带,说明改良CTAB法从百合鳞片中提取的RNA质量高、完整性好、产率高,完全可以用于后续的分子生物学实验。 相似文献
5.
野生香蕉叶片总RNA提取方法研究 总被引：3，自引：1，他引：2
采用TRIZOL试剂盒法、RNAsio试剂法和改良CTAB法提取香蕉叶片总RNA,并通过凝胶电泳、紫外分光光度法检测提取的RNA样品的质量。研究结果表明：改良CTAB法提取的RNA具有28SrRNA和18SrRNA两条清晰的条带,OD260／OD280在1.80-1.95之间,OD260／OD230在1.75-2.10之间,具有较高的纯度;其它两种方法获得的RNA纯度不够,降解严重。将提取的RNA分别逆转录成cDNA,经RT-PCR扩增,只有改良CTAB法出现清晰的条带,进一步证明改良CTAB法提取的RNA具有很高的纯度,可以满足进一步分子生物学研究的要求。 相似文献
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《分子植物育种》2016,(8)
植物总RNA提取的传统方法有很多种,如CTAB法,TRIzol法和SDS法。为了方便快捷的提取出高质量的植物总RNA,目前越来越多的植物总RNA提取的试剂盒被开发了出来,但不同的提取方法对不同植物组织的RNA提取效果不一。为了筛选出适合火炬松总RNA的提取方法,本研究以火炬松的韧皮部和较老的针叶为材料,比较了改良的CTAB法、Column Plant RNAout 2.0提取试剂盒、E.Z.N.A.TMPlant RNA Kit、Hi Pure Plant RNA Mini Kit、EASYspin Plus Plant RNA Kit和Mag Zol TM Reagent法提取总RNA的效果,结果表明:改良CTAB法对韧皮部和针叶均有最好的提取效果。Mag Zol TM Reagent法和EASYspin Plus Plant RNA Kit没能提取到完整的RNA,其他试剂盒的提取效果均不十分理想。 相似文献
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血红鸡爪槭叶片总RNA提取方法的比较研究 总被引：1，自引：0，他引：1
血红鸡爪槭叶片中富含多糖、多酚物质,严重影响了RNA提取纯度和质量。为了获得适宜血红鸡爪槭叶片总RNA提取的方法,采用柱式植物RNAout法、TRIZOL法和改良CTAB法3种提取方法对其叶片总RNA提取效果进行比较分析。结果显示,采用柱子法提取获得的总RNA产率最高,但是有DNA污染;TRIZOL法提取的总RNA OD260∕OD280为1.65,可能有多糖和酚类物质的污染,并且产率最低;改良CTAB法提取的总RNA纯度很高,OD260/OD280平均值在2.0左右,产率在上述两种方法之间,电泳图清晰,而且改良CTAB法提取的总RNA,经RT-PCR获得了清晰的特异性条带。表明改良CTAB法提取的总RNA纯度和产率高,完全可以满足进一步分子生物学研究的需要,是血红鸡爪槭叶片总RNA提取的适宜方法。 相似文献
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椰子果肉组织中总RNA的提取及质量分析 总被引：1，自引：0，他引：1
本研究以椰子(Cocos nucifera L.)果肉组织为材料,应用改良CTAB法对不同成熟度的椰肉组织总RNA进行提取分析.结果表明:改良CTAB法能有效去除椰肉组织中不同种类杂质的干扰,从两种不同成熟度的椰肉组织中获得了高质量的总RNA;应用琼脂糖凝胶电泳检测得到两条清晰的谱带,分别为28S和18S.通过紫外分光光度计检测含量和纯度显示:OD260/OD280值介于1.6～1.9之间,不同成熟度的椰肉组织提取的总RNA的浓度分别为0.070 μg/μL和0.053μg/μL.本研究使用的方法适用椰肉组织总RNA的提取,能够获得质量好、产率高、完整性强的总RNA,为进行椰子果实发育相关基因的克隆和分析奠定了一定的研究基础. 相似文献
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银杏叶片RNA提取方法的研究 总被引：3，自引：2，他引：1
为了获得一种银杏（Ginkgo biloba L.）叶片总RNA提取的理想方法,为后续的分子生物学研究打下基础,笔者以不同生长期的叶片为材料,利用生物分光光度计和凝胶电泳法比较了改良CTAB法、乙二醇丁醚法以及改良Trizol法提取的银杏总RNA的产率和纯度。结果表明：改良Trizol法所提取RNA的OD260/OD280比值介于1.8~2.0之间,并且OD260/OD230在1.9~2.1之间,具有较高的纯度。凝胶电泳结果表明,改良Trizol法有28S rRNA和18S rRNA 2条清晰的条带,且很少有降解;CTAB法获得的RNA品质也较好,但存在降解和弥散现象,乙二醇丁醚法提取效果较差。这表明改良Trizol法提取的总RNA具有很高的纯度,可以满足进一步分子生物学研究的要求。 相似文献
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高质量提取银杏种仁总RNA的改良方法 总被引：3，自引：1，他引：2
提取高质量的RNA是获取银杏(Ginkgo biloba L.)种仁药用蛋白基因以及从基因表达水平研究林木良种银杏种子发育和后熟的必要条件。现有提取方法难以获得高纯度的银杏种仁总RNA。本研究旨在改良现有提取方法,以满足抽提富含蛋白质、多糖、多酚等特殊材料高质量RNA的需要。文中将改进的CTAB法和Trizol一步法相结合,优化了试剂组合并改进实验细节,从银杏种仁中获得了高质量的总RNA。通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计检测,提取的总RNA具有清晰的28SrRNA、18SrRNA条带,亮度满足2：1比例关系。OD260/OD280比值在1.85~2.00之间。将提取的总RNA用于Northern杂交分析可检测到清晰的信号,而用于RT-PCR和5'-RACE也可获得清晰的目的条带。说明这种方法获得的总RNA完整度和纯度很高,完全可以满足下游分子生物学实验要求。 相似文献
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三种改良提取长雄野生稻根叶总RNA方法的比较研究 总被引：2，自引：1，他引：1
为探讨野生稻总RNA的提取,笔者尝试了改良SDS、CTAB和TRIzol三种提取方法分别提取长雄野生稻根和叶总RNA,通过琼脂糖凝胶电泳和分光光度计检测,比较这三种方法的提取效果.结果表明,改良SDS、CTAB法提取的根总RNA的电泳条带清晰,几乎没有污染,无明显降解,OD260/OD280在1.75～2.0之间,能满足一般的分子操作要求,但所提取的叶片总RNA则有明显的DNA污染和少量的蛋白质污染.用TRJzol法提取的总RNA,无论是根还是叶片,均有不同程度蛋白质污染.若要进行下一步的分子操作,需先进行RNA的纯化,以去除蛋白质.可见改良SDS、CTAB法提取根的总RNA是首选. 相似文献
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一种适合葡萄多种组织的总RNA提取方法 总被引：1，自引：1，他引：0
为了解决葡萄组织中总RNA提取难度大的问题,以感染葡萄卷叶病毒-3的葡萄品种‘蛇龙珠’为试验材料,采用CTAB结合SDS法对总RNA提取方法进行了研究,建立了一套适合葡萄叶片、叶柄及韧皮部等多种组织总RNA提取的方法。结果表明,该方法在多种组织中均能获得高质量的RNA,OD260/OD280=1.8~1.9,电泳结果表明,所得RNA完整性好,无降解。同时用所得RNA进行了GLRaV-3的检测,电泳结果表明该法所得RNA可满足葡萄病毒病RT-PCR检测的质量要求。该方法操作简单,结果稳定,对其他富含多酚、多糖类植物组织总RNA的提取具有借鉴意义。 相似文献
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高质量的小麦种子总RNA的快速提取方法 总被引：5，自引：0，他引：5
提取高质量的RNA是从基因表达水平上研究小麦种子发育的必要条件。现有提取方法难以快速得到高纯度的小麦种子总RNA。本试验将冷酚法和Trizol一步法相结合,在5h左右就可得到高质量的总RNA。通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计检测,提取的总RNA具有清晰的28S rRNA、18S rRNA条带,OD260/DO280比值在1．90-2．00之间。将提取的总RNA用于反转录,可获得高质量的cDNA,在cDNA—AFLP分析上可得到清晰的条带。说明这种方法获得的总RNA纯度和完整度非常高,完全满足分子生物学研究的要求。 相似文献
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为了从可口革囊星虫体壁中提取高质量的RNA,以便深入开展分子生物学研究。采用改良Trizol法、Trizol法和十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法3种方法提取可口革囊星虫体壁中总RNA,并通过琼脂糖凝胶电泳比较不同方法提取总RNA的效果。结果表明：改良Trizol法提取的总RNA经电泳后能看到清晰完整的28S rRNA、18S rRNA和5S rRNA条带,无拖尾现象;而Trizol法和CTAB法提取的总RNA电泳条带完整性较差,缺少28S rRNA。传统的Trizol法和CTAB法不适用于可口革囊星虫体壁总RNA的提取;改良Trizol法提取的总RNA电泳条带清晰、完整性好,质量符合cDNA合成、RT-PCR扩增等后续实验要求,适用于提取可口革囊星虫体壁总RNA。 相似文献