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小鼠卵母细胞wee 1和cdc25 mRNART-PCR方法的建立 总被引：1，自引：0，他引：1
在没有现成的哺乳动物卵母细胞ｗｅｅ１、ｃｄｃ２５ ｍＲＮＡ的ＲＴ－ＰＣＲ方法可借鉴的情况下，经过反复摸索，终于选出了１对适宜的ｗｅｅ１ ｃＤＮＡ引物和１对ｃｄｃ２５ｃＤＮＡ引物，并对ＲＴ－ＰＣＲ条件进行了优化试验，成功地建立起了一套稳定的ｗｅｅ１、ｃｄｃ２５ ｍＲＮＡ的ＲＴ－ＰＣＲ方法，为研究哺乳动物卵母细胞，乃至哺乳动物早期胚胎的基因表达奠定了技术基础。 相似文献
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本实验建立了用ＰＣＲ（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ）技术体外扩增牛Ｙ染色体特异ＤＮＡ序列的方法。根据牛的ＳＲＹ序列设计一对引物，两条引物均为２３ｂｐ，对公牛１９４ｂｐ序列进行体外扩增。从屠宰的公、母牛肝和血液中提取ＤＮＡ，用作ＰＣＲ模板，ＰＣＲ仪内进行扩增。结果表明公牛个体样品显示清晰可见的特异ＤＮＡ扩增带，而母牛个体样品无扩增片段出现，与预期的结果完全符合。 相似文献
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以基因外重复的回文因子（ｒｅｐｅｔｉｔｉｖｅｅｘｔｒａｇｅｎｉｃｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ，ＲＥＰ）和肠菌基因间重复一致序列（ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｌｒｅｐｅｔｉｔｉｖｅｉｎｔｅｒｇｅｎｉｃｃｏｎｓｅｎｓｕｓ，ＥＲＩＣ）的碱基顺序设计出的引物为引物，用ＰＣＲ（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ）技术分别扩增了８株快生型大豆根瘤菌（Ｓｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ）的ＤＮＡ，得出了具有菌株特 相似文献
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以PCR鉴定转基因植株的微量DNA提取方法 总被引：25，自引：2，他引：25
报道了将Ｄｒ Ｍａｒｃ Ｚａｂｅａｕ的ＡＦＬＰ技术中的ＤＮＡ提取方法用于以ＰＣＲ技术鉴定转基因植物－拟南芥、烟草和芜菁中。该方法需约１ｈ可完成植物ＤＮＡ的提取，样品用量仅为３０￣１００ｍｇ，产量可达３０￣８０μｇ／ｇ。粗提ＤＮＡ（溶于１０μＬ ＴＥ缓冲液）不必经过纯化，用ＴＥ缓冲液稀释５￣１０倍即可直接用于ＰＣＲ分析。在拟南芥、烟草和芜菁转基因植物鉴定中应用表明这一方法是目前以ＰＣＲ法鉴定转基因植 相似文献
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松材线虫的ＰＣＲ快速诊断研究①许建平１郑经武１王建伟２龚鸿飞１李德葆１（１浙江农业大学生物技术研究所，杭州３１００２９；２杭州动植物检疫局，杭州３１００２１ＰＣＲＡｓａｙｔｏＤｉａｇｎｏｓｉｓａｎｄＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＢｕｒｓａｐｈｅｌｅｎｃｈｕｓ... 相似文献
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以PCR鉴定转基因植株的微量DNA提取方法 总被引：1，自引：0，他引：1
报道了将ＤｒＭａｒｃＺａｂｅａｕ的ＡＦＬＰ（ＡｍｐｌｉｆｉｅｄＦｒａｇｍｅｎｔＬｅｎｇｔｈＰｏｌｙｍｏｒ－ｐｈｉｓｍ）技术中的ＤＮＡ提取方法用于以ＰＣＲ（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ）技术鉴定转基因植物——拟南芥、烟草和芜菁中。该方法需约１ｈ可完成植物ＤＮＡ的提取，样品用量仅为３０～１００ｍｇ，产量可达３０～８０μｇ／ｇ．粗提ＤＮＡ（溶于１０μＬＴＥ缓冲液）不必经过纯化，用ＴＥ缓冲液稀释５～１０倍即可直接用于ＰＣＲ分析。在拟南芥、烟草和芜菁转基因植物鉴定中应用表明这一方法是目前以ＰＣＲ法鉴定转基因植株Ｔ１代单株幼苗的一种简便、快速、有效的方法。 相似文献
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ＰＣＲ技术是一项崭新的体外扩增基因的技术，已广泛应用于与生命相关的学科的研究。本文从植物病害检测的角度，探讨如何应用ＰＣＲ技术来进行植物病害的检测。 相似文献
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用光敏生物素标记鸡新城疫鸡ｃＤＮＡ，制备核酸探针，经斑点交和碱性磷酸酶为色后，探针同该ｃＤＮＡ的ＰＣＲ产物、ＰＣＲ产物重组子和新城疫强弱毒株呈现阳性反应，与ＩＢＶ、ＩＬＴＶ、ＭＧ和正常尿囊液等均呈阴性杂交反应，该ｃＤＮＡ探针是敏感且特异的检测方法。 相似文献
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牛生长激素cDNA的克隆与序列分析 总被引：1，自引：0，他引：1
从平脑垂体中分离总ＲＮＡ，经ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）一纤维素柱纯化ｍＲＮＡ，反转录合成ｃＤＮＡ，经ＰＣＲ技术扩增牛生长激素（ｂＧＨ）ｃＤＮＡ序列，长度为６２０ｈｐ，将ＰＣＲ产物克隆于ｐＵＣ１９Ｓｍａｌ位Ⅰ点转化大肠杆菌ＤＨ５α，经蓝白斑筛选，获得重组克隆，分离重组质粒，经限制性内切酶酶切分析后，进行序列分析。结果表明，一质粒中所含克隆片段为ｂＧＨｃＤＮＡ全序列，与国外所发表的ｂＧＨ核旮酸序列基本相同 相似文献
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以水稻抗瘟性近等基因系Ｈ７Ｒ和Ｈ７Ｓ为材料,采用ＰＣＲ－差别筛选（ＰＣＲｂａｓｅｄｄｉｆｅｒ－ｅｎｔｉａｌｓｃｒｅｅｎｉｎｇ）的方法分离和克隆水稻受稻瘟病菌诱导的抗性相关基因．第一轮筛选获得４２个差异表达的ｃＤＮＡ克隆,经ＰＣＲ扩增,转膜,反向Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交后,得到１２个阳性ｃＤＮＡ克隆．本文对ＰＣＲ－差别筛选的优缺点以及进一步的鉴定工作亦作了讨论． 相似文献
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刘春林 《湖南农业大学学报(自然科学版)》1994,(6)
一种克隆和分析多聚酶链式反应产物的简易快速方法ＢｏｒｉｓＳｋｒｙａｂｉｎＤｉｄｏＶａｓｓｉｌａｃｏｐｏｕｌｏｕ本文介绍一种克隆多聚酶链式反应（ＰＣＲ）产物的快速有效方法，它包括末端修复（Ｅｎｄｒｅｐａｉｒ）和ＰＣＲ产物纯化．紧接是ＰＣＲ产物激酶催化反... 相似文献
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应用ＰＣＲ技术进行Ｐｕｕｍａｌａ病毒核酸片段的特异性扩增．将为进一步研究Ｐｕｕｍａｌａ病毒和相关病毒．以及检测此类病毒感染提供更加特异、敏感、快速的方法。依据已知的Ｐｕｕｍａｌａ病毒核酸序列，从Ｍ节段选出５对寡核苷酸作为ＰＣＲ反应中的引物，以Ｐｕｕｍａｌａ病毒ＲＮＡ作为模板。做ＰＣＲ。ＰＣＲ产物分别经凝胶电泳和核酸杂交的方法进行测定，结果表明。目的核酸片段得到了很好的扩增。 相似文献
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分子标记的类型、特点及在育种中的应用 总被引：2，自引：0，他引：2
介绍了分子标记的４ 个系统：①非ＰＣＲ 标记系统;②以ＲＡＰＤ 为代表的单引物ＰＣＲ 系统;③由两个引物引起的选择性扩增片段多态性（ＡＦＬＰ） ;④以ＳＳＲ（ 或ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ） 为代表的两个引物的ＰＣＲ 系统,以及它们各自的特点。同时还提出了在具体应用时应从５ 个方面考虑、选择合适的标记系统。 相似文献
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聚合酶链式反应技术的研究进展 总被引：1，自引：0，他引：1
聚合酶链式反应技术自诞生以来,已在生物学及相关学科中得到了广泛应用,并得以不断的深入和发展。本就近年来研究和发展出现的一些特殊ＰＣＲ技术,如：逆转录ＰＣＲ、反向ＰＣＲ、定量ＰＣＲ、锚定ＰＣＲ、重组ＰＣＲ、长ＰＣＲ、热起动ＰＣＲ、免疫ＰＣＲ、复合ＰＣＲ、差向显示ＰＣＲ等作一简这,以供参考。 相似文献
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李景鹏 《黑龙江八一农垦大学学报》1995,8(1):109-114
本文叙述了ＰＣＲ技术发明，基本原理，进展和应用，简要地介绍了锚式、巢式、反向、不对称、逆转录、半定量、竞争性、散布重复序列、高变性引物、等位特异性、竞争引物、多重、着色互补、以及免疫ＰＣＲ技术种等。 相似文献
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以水稻抗瘟性近等基因系Ｈ７Ｒ和Ｈ７Ｓ为材料,采用ＰＣＲ－差别筛选的方法分离和克隆水稻受稻瘟病菌诱导的抗性相关基因。第一轮筛选获得４２个差异表达的ｃＤＮＡ克隆,经ＰＣＲ扩增,转膜,反向Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交后,得到了１２个阳性ｃＤＮＡ克隆。本对ＰＣＲ－差别筛选的优缺点以及进一步的鉴定工作亦作了讨论。 相似文献
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ＰＣＲ检测猪应激综合症应用余旭平，徐士清，王伦雄，王松均（浙江农业大学动物科学学院，杭州３１００２９；浙江省农业科学院畜牧兽医研究所，杭州３１００２１；杭州市种猪试验场，杭州３１１１１５）ＡＰｒｅｌｉｍｉｎａｒｙＲｅｐｏｒｔｏｎＰｏｒｃｉｎｅＳｔｒｅ... 相似文献