小豆锈病分子检测体系的构建及应用     

殷丽华  张金鹏  章国庆  刘国辉  柯希望  左豫虎 《干旱地区农业研究》2023,(6):238-244

由豇豆单胞锈菌（Uromyces vignae Barclay）引起的小豆锈病是小豆生产中危害最为严重的病害之一,建立早期分子检测技术体系对病害早期诊断和及时防控具有重要意义。本研究以豇豆单胞锈菌ITS序列为依据设计引物,结合已报道的单胞锈菌属特异检测引物,以豇豆单胞锈菌为目标菌,以茄链格孢、茄丝核菌、禾谷镰刀菌、稻瘟菌、苹果轮纹病菌、半裸镰刀菌、玉米链格孢菌、尖孢镰刀菌和禾顶囊壳等9种常见植物病原真菌为参照菌,采用CTAB法提取上述各菌株的基因组DNA,应用普通PCR技术筛选出豇豆单胞锈菌的特异性检测引物UV-ITS,在此基础上设计巢式PCR引物UV-MX,构建了基于巢式PCR的高灵敏度小豆锈病分子检测体系。该巢式PCR体系在基因组DNA浓度仅为4×10^-6 ng·μL^-1时仍可实现有效扩增,其灵敏度是普通PCR的10万倍。以感病小豆品种‘宝清红’接种锈菌后不同时间的叶片为材料检验检测体系的应用效果发现,接种后12 h的小豆叶片样本即可扩增出豇豆单胞锈菌的特异性条带。本研究建立的小豆锈病分子检测体系特异性强、灵敏度高,具备对潜伏期病害进行早期诊断的应用潜力,可为小豆锈病的早期快速诊断和及时防控提供重要的技术支撑。  相似文献   

褪黑素诱导小豆抗锈病机理的初步研究   总被引：2，自引：0，他引：2  

郭博铖 #  柯希望 #  高尚雨  于昕卉  孙启明  左豫虎 《植物保护》2020,46(1):145-150

为明确外源褪黑素诱导小豆抗锈性的作用及机理,以感病小豆品种‘宝清红’为材料,采用叶面喷施不同浓度褪黑素激发处理小豆真叶,而后对真叶挑战接种锈菌夏孢子,结果表明,低浓度(11.61 mg/L)褪黑素可显著提升小豆对锈病的抗性。夏孢子萌发试验表明,褪黑素对夏孢子萌发及芽管生长无显著抑制作用,表明褪黑素无抑菌活性。进一步的基因表达分析发现,与对照相比,褪黑素激发诱导了水杨酸(SA)通路关键基因NPR1于接种后24 h显著上调表达,且病程相关蛋白PR1、几丁质酶(CHI)、β-1,3-葡聚糖酶(GLU)及PR5均于接种后24～120 h被显著诱导表达,说明褪黑素可能通过诱导NPR1表达,进而激活下游PR蛋白的高水平应答,使感锈病小豆品种获得对锈病的抗性。  相似文献   

甘草单胞锈菌的孢子阶段、生活史及防治研究   总被引：3，自引：0，他引：3  

罗友文  薛根生  陈昕旺 《植物保护学报》1992,19(2):127-132

甘草单胞锈病是新疆南北地区甘草栽培中一种毁灭性病害。1987—1989年在田间和室内对甘草单胞锈菌〔Uromyces glycyrrhizae(Rabenh.)Magn.〕的孢子阶段、生活史和防治进行了研究。结果表明,本菌为单主全孢型锈菌,能在甘草生长期产生5种不同的孢子。人工接种证实本菌的夏、冬(担)孢子能于冬前发芽侵染甘草根蘖芽,潜伏越冬,于次春出现夏孢子型、性(锈)子器型和混生型3种不同的系统侵染病株,成为当年发病的初侵染源。夏孢子于生长季节重复侵染叶部、茎梢和根蘖芽、腋芽,产生局部和系统侵染,造成毁灭性为害。  相似文献   

进境日本圆柏上亚洲胶孢锈病菌的检疫鉴定     

《植物检疫》2020,(4)

自宁波口岸进境日本圆柏枝叶上,采集获得3份胶锈菌属的标本,编号为JC1、JC2、JC3,采用形态学观察和分子鉴定方法对上述样品进行了研究。形态学观察确认3份标本上的锈菌属于胶锈菌,仅有冬孢子阶段的形态特征,冬孢子堆丛枝状,生长在枝干上,但不产生明显的隆起,2～6 mm高,棕褐色;冬孢子双胞,圆柱形至拟纺锤形或椭圆形,31～50μm×16～27μm,壁厚1.0～2.5μm,桔黄色,芽孔1～2个,位于近膈膜处;孢柄无色,圆柱形,直径2.5～5.0μm。通过对rDNA 18S,ITS,28S序列测定,3份标本上锈菌序列互相之间具有100%的相似度。构建系统发育分析进一步发现3份标本与GenBank中多株亚洲胶孢锈病菌聚在同一分支上。结合形态及分子系统发育分析结果,明确采集于日本圆柏上所截获病菌为亚洲胶孢锈病菌,这是我国口岸首次截获该种重要植物病原菌。  相似文献   

蚕豆和豌豆锈病病原菌的分子鉴定     

邓东  孙菲菲  孙素丽  何玉华  段灿星  朱振东 《植物保护学报》2022,49(4):1071-1076

为明确我国热带和亚热带地区蚕豆Vicia faba和豌豆Pisum sativum锈病的病原菌种类,通过致病性测定和ITS序列系统发育分析对来自我国云南省玉溪市的4份豌豆锈菌分离物及云南、广西、重庆和四川省(区、市)的5份蚕豆锈菌分离物进行系统鉴定。结果显示,分离自豌豆的锈菌WX1分离物对蚕豆和豌豆均具有高致病性,在侵染叶片上产生大量锈子器;分离自蚕豆的锈菌CX3分离物仅对蚕豆具有高致病性,能在叶片上产生大量夏孢子,而对豌豆的致病性相对较低,仅产生少量的夏孢子堆;分离物WX1和CX3对小扁豆和鹰嘴豆不具有致病性。基于ITS序列系统发育分析表明,所有不同寄主来源的蚕豆单胞锈菌分离物均聚类于一个系统发育组,但分离自蚕豆和豌豆的分离物分别聚类在不同的亚组。表明分离自云南省玉溪市豌豆上的蚕豆单胞锈菌Uromyces viciae-fabae应为豌豆专化型,定名为U. viciae-fabae ex P. sativaum,而来源于云南、广西、重庆和四川省(区、市)的蚕豆锈病病原菌为蚕豆专化型U. viciae-fabae ex V. faba。  相似文献   

进境美国小麦中黑麦草腥黑穗病菌的检测和鉴定     

田利华  易建平  周国梁  周业琴  印丽萍  周而勋 《植物检疫》2006,(Z1)

从进境美国小麦洗涤液中发现一种类似小麦印度腥黑穗病菌的冬孢子,冬孢子大小为25.0~33.8(29.5±2.3)μm,球形至近球形,淡黄褐色至暗红褐色,半透明至不透明,外胞壁具深褐色疣状突起,突起表面观为锥形至平截状,有时呈不完全脑纹状,外被淡色透明胶质鞘。冬孢子处理后经通用引物Til1/Til4和U2/U10扩增,其扩增产物用黑麦草腥黑穗病菌Tilletiawalkeri的特异性引物W1/W4再次扩增可以得到760bp的产物,产物测序得到的序列和GenBank中黑麦草腥黑穗病菌菌株YRG-001(AF218063)的序列相似性为99%(717/719),和GenBank中小麦印度腥黑穗病菌菌株Bpop(AF218060)的序列相似性为96%(694/719)。实时荧光检测的结果表明黑麦草腥黑穗病菌的探针TWAL能得到阳性扩增曲线。根据冬孢子形态特征、PCR分析、实时荧光检测和序列分析的结果,将这种腥黑穗病菌冬孢子鉴定为黑麦草腥黑穗病菌(T.walkeri)。  相似文献   

锈寄生菌对落叶松褐锈病抑制作用的观察   总被引：2，自引：0，他引：2  

袁志文  苑健羽  李连芝 《中国生物防治》1991,(2)

本试验观察看出,被锈寄生菌寄生的落叶松褐锈病菌的冬孢子和夏孢子逐渐裢(?)色,后期孢壁破碎,内含物释出。被寄生的冬孢子萌发率降低50％左右。4年林间调查结果看出,落叶松褐锈病的发生程度随着锈寄生菌寄生率的逐年增加而减轻。锈寄生菌对落叶松褐锈病有较强的抑制作用。  相似文献   

小驳骨锈病的重寄生现象及重寄生菌鉴定(英文)   总被引：2，自引：0，他引：2  

廖咏梅  熊英  罗荡平  王忠文  袁高庆  周传明 《中国生物防治》2008,(Z1)

在小驳骨锈病的冬孢子堆上发现一种重寄生菌。被重寄生菌寄生的病斑表面可见到一层白色菌丝体。光学显微镜下发现,被寄生的柄锈菌菌丝和冬孢子断裂、变形和退色。18S rDNA PCR扩增及测序结果表明,重寄生菌为刀孢轮枝菌(Lecanicillium psalliotae),本文首次报道刀孢轮枝菌寄生柄锈菌。  相似文献   

小豆种质资源对锈病的抗性评价     

《中国植保导刊》2020,(9)

为筛选小豆(Vigna angularis)抗锈病性资源,本研究以54份小豆种质资源为材料,通过室内接种豇豆单胞锈菌(Uromyce vignae)菌株ZXL01,并分析叶片表面花斑轻重和每1.5 cm~2夏孢子堆的数量,以评价小豆种质资源对锈病的抗性。结果表明,供试材料对小豆锈病的抗性存在明显差异。15份种质资源表现抗病,其中,吉林373和QH2对锈病表现免疫,占供试品种的3.7%;龙垦早红、北4、LZX031、建37、建265和QH1高抗锈病,占供试品种的11.1%;保M908-15、极旱红小豆、吉红6号、北12、湾选1号、保8824-17和北10为中抗种质资源,占供试品种的12.9%。其余39份种质资源均对小豆锈病表现感病。本研究筛选获得小豆抗锈病资源可为田间生产和抗病品种培育提供重要参考。  相似文献   

感染锈菌甜菜种子的检疫处理     

RamNath  P.C.Agarwal  UshaDev  A.K.Lanbat  袁自清 《植物检疫》1988,(3)

甜菜单胞锈菌 Uromyces belae Tul.ex kickx 引起的甜菜锈病是许多国家的一种造成产量严重损失的种传病害,以污染和侵染种子的冬孢子为初侵染源引入和传播于新的地区。目前,在印度还没有发现该病。由于这种病的严重性,曾发现几批感染该菌的进口甜菜种子都不得不退回和毁掉。1985年期间,我们收到英国剑桥植物育种所约1kg剥皮甜菜种子,当进行检疫检验时,发现种样感染有甜菜单胞锈菌的夏孢子和冬孢子及甜菜蛇眼病病菌茎点霉 Phoma betae  相似文献   

小豆抗锈病诱导剂的筛选     

康静  柯希望  申永强  殷丽华  徐晓丹  左豫虎 《植物病理学报》1955,49(6):871-875

Four common inducers, salicylic acid (SA), 1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid (ACC), benzothiadiazole (BTH) and methyl jasmonate (MeJA), were selected to evaluate the effects of inducers on the resistance of adzuki bean to rust by investigating urediospores germination and the adzuki bean resistance to Uromyces vignae. The results showed that four inducers had no effects on the urediospores germination. However, they can significantly induce adzuki bean resistance to U. vignae. Among these four inducers, 0.25 mg·mL^-1 ACC can significantly reduce the disease index, which was 45.06% lower than the control. Aditionally, seedlings treated with ACC exhibited a typical "triple reaction", which indicated that this induced resistance may relate with the endogenous ethylene biosynthesis in adzuki bean. Then the adzuki bean seedlings were treated with an ethylene receptor inhibitor, 1-methylcyclopropene (1-MCP) alone or combined with ACC. The results showed that 1-MCP alone had no significant effect on the growth and rust resistance of adzuki bean. However, 1-MCP could eliminate the "triple reaction" and did not affect the induced resistance caused by ACC when it used combined with ACC. Results obtained in current study suggested that ACC can significantly induce the resistance of adzuki bean to the rust. Moreover, we speculate that ACC-induced rust resistance of adzuki bean may not depend on ethylene signaling pathway.  相似文献   

小豆抗锈病诱导剂的筛选     

康静  柯希望  申永强  殷丽华  徐晓丹  左豫虎 《植物病理学报》2019,49(6):871-875

<正>由豇豆单胞锈(Uromyces vignae)引起的小豆锈病是我国小豆生产中的重要病害之一[1,2],在中国华北及东北地区发生严重,可造成严重的产量损失[3]。当前小豆锈病的防治主要依赖化学药剂,但长期使用化学药剂存在残留、破坏生态等弊端。因此寻找绿色可持续的防控措施越来越受到人们的关注。利用外源诱导剂诱导植物抗性是一种潜在的病害防控措施[4]。目前,已有超过30种的植物被证实可被诱导产生抗病性[5]。但在诱导小豆抗锈病方面的研究报道尚  相似文献   

小豆AP2/ERF基因家族鉴定及其应答锈菌侵染的表达分析     

柯希望  张金鹏  刘国辉  殷丽华  张盼盼  曹鸣宇  康静  杨阳  徐晓丹  郭永霞  左豫虎 《植物病理学报》2020,50(4):394-404

 为明确小豆VaAP2/ERF家族基因在小豆应答豇豆单胞锈菌(Uromyces vignae)侵染中的作用,本研究采用生物信息学方法从小豆基因组中鉴定VaAP2/ERFs家族基因186个,包括AP2(24个)、RAV(2个)、Soloist(1个)及ERF(159个)四个亚家族,其中ERF亚家族又可分为DREB和ERF两个亚类。基因结构分析发现,68.3%的VaAP2/ERFs基因不具内含子。保守基序分析发现,各亚族成员保守域组成类似,可作为基因家族分类的重要依据。前期转录组测序发现VaAP2/ERF中的6个成员接种后24 h显著上调,进一步应用qPCR技术对其在‘1-D-3’(免疫)及‘宝清红’(感病)中应答锈菌侵染的表达分析发现,免疫品种中6个成员均于接种后6 h及120 h显著上调,另有2个于接种后12 h也显著上调,表明上述基因均在小豆抗锈病中发挥正调控作用。  相似文献   

应用real-time PCR定量检测小麦条锈菌潜伏侵染量方法的建立   总被引：7，自引：2，他引：5  

潘娟娟  骆勇  黄冲  孙振宇  赵磊  闫佳会  马占鸿 《植物病理学报》2010,40(5):504-510

 小麦条锈病是我国小麦主要病害之一。快速、及时地诊断与定量监测处于潜育状态下的病叶,对准确估计越冬、越夏后的病情,制定正确的防治方案具有重要的意义。根据小麦条锈菌Puccinia striiformis的β-tubilin基因序列设计对该病原菌的种具有特异性的引物betaf/betar,并分别在普通PCR和real-time PCR扩增时对该引物的特异性和灵敏性进行了测定。结果表明该引物对小麦条锈菌特异性高,可稳定扩增出243 bp的目标条带。Real-time PCR的灵敏度为普通PCR的100倍。应用此特异性引物,建立了real-time PCR测定系统,定量测定了条锈菌在小麦叶片接种后组织内的DNA随时间的变化。结果表明,在接种后12 h,可在小麦叶片内检测到条锈菌,且条锈菌在小麦叶片内潜育期间随时间呈指数增长。接种第6 d后叶片内的菌量有明显的增加。建立的小麦条锈菌的real-time PCR早期定量测定方法,为及时、快速监测小麦条锈病在潜育期间的发病规律以及为该病的预测、防治提供依据。  相似文献   

长豇豆疫病的初步研究   总被引：3，自引：0，他引：3  

黄健坤  戚佩坤 《植物病理学报》1984,14(4):193-199

 广州地区长豇豆普遍出现的"死藤"除了镰刀菌枯萎病外,疫病也是重要的病原。疫病病原菌经鉴定为Phytophthora vignae Purss。这一发现,对长豇豆抗枯萎病的育种工作具有重要的意义。Phytophthora vignae人工接种只危害豇豆属各个品种,但刺伤接种能侵染菜豆荚、茄子果实、马铃薯块茎;不能侵染大豆、绿豆、赤豆、豌豆、蚕豆、黄瓜、辣椒。在高菌量接种条件下,所参试的8个品种均不抗病,以"抗病二号"较好。盆栽药效试验以90%乙磷铝300倍液效果较好。喷药后即接种防效达90.81%。喷药3天后还有一定的效果,但接种24小时后再喷药,药效便可降低为51.33%。  相似文献   

两种唐松草鉴定为小麦叶锈菌的转主寄主     

赵杰  杜志敏  刘尧  梁晓飞  陈俐  康振生 《植物病理学报》2021,51(1):70-84

 引起小麦叶锈病的小麦叶锈菌(Puccinia triticina)是转主寄生菌,其转主寄主主要为唐松草属(Thalictrum)种类,也包括扁果草属(Isopyrum), 牛舌草属(Anchusa), 铁线莲属(Clematis)和蓝蓟属(Echium)的个别种类。然而,迄今,中国仅有亚欧唐松草和瓣蕊唐松草被报道为小麦叶锈菌转主寄主。本文对采集于陕西的东亚唐松草(T. minus var. hypoleucum)、甘肃的贝加尔唐松草(T. baicalense),通过人工接种小麦叶锈菌确定它们是否能够作为小麦叶锈菌的转主寄主。同时,本文作者收集自然条件下贝加尔唐松草组织上受侵染产生的锈子器样品,通过其ITS区序列分析以确定小麦叶锈菌的有性循环是否在田间条件下发生。结果表明,小麦叶锈菌的担孢子均可侵染东亚唐松草和贝加尔唐松草,完成其性子器和锈子器阶段,产生的锈孢子可侵染感病小麦产生夏孢子堆,从而证实东亚唐松草和贝加尔唐松草均可作为小麦叶锈菌的转主寄主。来自贝加尔唐松草22个锈子器样品的ITS区序列比对,表明其与NCBI网上提交的小麦叶锈菌享有95%~96%的序列同源性。由此推测,自然条件下,中国小麦叶锈菌可能侵染感病唐松草完成有性循环。  相似文献   

以Ypt1基因序列为靶标的辣椒疫病菌快速分子检测     

李毛毛  赵伟  汪涛  谷雨  高智谋  戚仁德 《植物病理学报》2014,44(5):546-551

PCR primers were designed based on the sequence of Ras-related protein gene (Ypt1) of P. capsici. According to the multiple sequence alignment, Ypt1 has the sufficiently polymorphic intron region for the development of P. capsici-specific primers (PcYpt1F/PcYpt1R). One primer pair was developed which can amplify one P. capsici-specific fragment of 156 bp. Using the primer pair, the P. capsici infected plants and soils were detected. Additionally, Ypt1 has an appropriate region for the development of Phytophthora genus-specific primers (Ypt1F/Ypt1R), which can amplify a fragment of about 540 bp from 14 different Phytophthora specices and a fragment of about 350 bp in Pythium species, with no amplification from fungal species. By PCR optimization using P. capsici genomic DNA, the detection sensitivities of 10 pg and 10 fg DNA were achieved in standard PCR (PcYpt1F/PcYpt1R) and nested PCR (Ypt1F/Ypt1R and PcYpt1F/PcYpt1R), respectively. The developed primers were proved to be efficient in detection of Phytophthora pathogens from diseased plant tissues and residues in soils.  相似文献   

菜豆黄花叶病毒中国和叙利亚蚕豆分离物外壳蛋白的序列分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

亓鹏  王晓鸣  何月秋 《植物病理学报》2007,37(4):368-376

 病毒病是影响云南省蚕豆生产的重要病害。对采集的蚕豆病毒病标样进行了组织印迹法检测,表明菜豆黄花叶病毒(BYMV)是最主要的病原。据此,以BYMV基因的保守序列设计了一对特异性引物,用BYMV的5个中国云南蚕豆分离物和1个叙利亚蚕豆分离物侵染的蚕豆叶片总RNA为模板,RT-PCR扩增获得了长度为907bp的目标片段。序列分析显示,此片段中包含822bp的外壳蛋白序列。6个分离物间的外壳蛋白核苷酸和推导编码蛋白质的氨基酸序列的同源性分别为86.4%~100.0%和96.7%~100.0%。与GenBank登录的34个具有完整外壳蛋白序列的BYMV分离物进行同源性和系统进化树分析的结果表明,6个分离物在核苷酸和氨基酸水平上与其它分离物的同源性分别为79.1%~97.9%和83.5%~98.5%,BYMV中国蚕豆分离物与日本蚕豆分离物同源性最高。外壳蛋白基因的序列特征揭示,在BYMV中的蚜传相关基序为NAG。  相似文献   

谷子锈菌巢式PCR检测体系的建立     

王楠  李志勇  董立  白辉  朱彦彬  全建章  董志平 《植物病理学报》2015,45(4):438-442

<正>由粟单胞锈菌(Uromyces setariae-italicae)引起的谷子锈病是一种危害严重的真菌性病害,该病可在短期内大面积流行,通常导致减产10%~30%。谷子锈病病原菌U.setariae-italicae,属担子菌亚门(Basidiomycotina)、柄锈菌科(Pucciniaceae)、单胞锈菌属(Uromyces),是一种多孢型转  相似文献   

UeFuz7在菰黑粉菌二型态转换中的作用