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1.
将致仔猪水肿病大肠埃希氏菌107／86菌株在TSB、TSA培养基上传代，使之表达F107菌毛，大量收集菌毛化的细菌，利用热洗脱法提取菌毛抗原。粗提菌毛抗原经聚丙烯酰胺凝胶电泳可见一条约15ku的条带，以染色凝胶为对照，将未染色凝胶上的菌毛抗原条带切下，进行提纯。经免疫印迹反应，证实其条带为F107菌毛蛋白。 相似文献
2.
F107(F18ab)菌毛单抗的制备、鉴定与初步应用 总被引：9，自引：2，他引：7
将大肠杆菌107／86和水肿病菌株在TSB中培养，鉴定其表达F107菌毛，前者作为免疫原免疫BABL／C小鼠，后者作为检测抗原包装酶标板。细胞融合后经ELISA和玻板凝集检测，得到一株阳性杂交瘤细胞株，命名为F7－1。该细胞株制备的腹水ELISA效价为：2^16，试管凝集价为：1：5120，在免疫印迹中可与提取的F107菌毛特异性条带发生反应。利用此单抗检测表明，91％的水肿病菌株表达F107菌毛。 相似文献
3.
以产志贺毒素样大肠杆菌（SLTEC）F18ab血清型标准菌株107/86基因组DNA为模板,利用PCR技术成功扩增出编码F18ab完整菌毛操纵子fed基因,克隆入表达载体pBR322,经限制性内切酶酶切分析,DNA琼脂糖电泳鉴定并结合序列测定分析,构建和筛选出含fed完整基因正确插入的pBR322-fed重组质粒,将上述重组质粒转化至不含任何菌毛结构的大肠杆菌SE5000,该表达重组菌能分别与兔抗F18ab亚单位蛋白FedF高免血清、鼠抗F18ab菌毛a单因子单克隆抗体、兔抗F18ab菌毛高免血清和抗F18ab菌毛IgG抗体产生明显的凝集反应。用热抽提法分别抽提和纯化SLTEC F18ab标准株107/86和重组菌SE5000（pBR322-fed）体外表达的F18ab菌毛,纯化菌毛经SDS-PAGE电泳和考马斯亮蓝染色获单一相对分子质量约为15 000蛋白条带。Western-blotting结果表明：兔抗F18ab菌毛高免血清能特异性识别SLTEC F18ab标准株107/86和重组菌SE5000（pBR322-fed）所提纯的单一主要结构蛋白。用重组菌SE5000（pBR322-fed）进行易感仔猪小肠上皮细胞体外黏附试验和黏附抑制试验,结果表明：重组菌SE5000（pBR322-fed）和SLTEC F18ab标准株107/86一样具有较强的黏附易感仔猪小肠上皮细胞的能力,而兔抗F18ab菌毛高免血清能有效地抑制上述重组菌SE5000（pBR322-fed）和SLTEC F18ab标准株107/86对易感仔猪小肠上皮细胞的黏附结合。 相似文献
4.
F18菌毛是致猪水肿病的产Vero细胞毒素大肠杆菌(VTEC)及某些产肠毒素大肠杆菌(ETEC)的主要毒力因子之一.现已知,F18菌毛抗原有F18ab、F18ac两种血清型变异,F18ab即为F107,而F18ac则包括近来才发现并命名的菌毛2134P及定居因子8813.现将有关F18菌毛的研究进展概述如下. 相似文献
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F18菌毛是致猪水肿病的产Vero细胞毒素大肠杆菌（VTEC）与某些产肠毒素大肠杆菌（ETEC）的主要毒力因子之一，现已知，F18菌毛抗原有F18ab,F18ac两种血清型变异，F18ab即为F107，而18ac则包括近来才发现并命名的菌毛2134P及定居因子8813。现将有关F18菌毛的研究进展概述如下。 相似文献
6.
根据已发表的大肠埃希氏菌F18ab菌毛F亚单位(FedF／ab)的基因(fedF／ab)序列，设计了1对引物，利用PCR技术从大肠埃希氏菌F107／86、YCED1、YCED2、C、D和12F株中分别扩增获得了一段序列，并克隆至pGEM—T载体，获得了重组质粒TF107F、TYCED1F、TYCED2F、TCF、TDF、T12FF。经琼脂糖凝胶电泳、序列测定及分析，6个重组质粒的大小均为903bp，与fedF／ab基因大小一致。其中大肠埃希氏菌F107／86、YCED1、C和12F株的fedF基因序列完全相同；只有YCED2株在第181位碱基处存在1个C→T的无义变异差异，D株在第655位碱基处存在1个T→C变异差异并在氨基酸水平出现1个S→P变异。结果表明，所克隆的序列均为F18ab菌毛F亚单位的基因。 相似文献
7.
肠毒性大肠杆菌(ETEC)C83917(987P~+)、C83919(F41~+)分别在 TSB 和 Minimal 液体培养基中培养,菌体表面能产生丰富的菌毛.用加热搅拌法使菌毛从菌表面脱落,通过酸沉淀和 MgCl_2反复沉淀提纯菌毛,经负染后用电镜观察。987P 菌毛较粗大。F41菌毛较纤细,两种菌毛都保持完整,呈长丝状,纵横交错或束状排列.用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定,987P 菌毛的分子量为20000,F41菌毛的分子量为28000。用提纯的987P 和 F41菌毛分别免疫家兔,得到高效价的抗血清,经琼扩试验检测,抗血清滴度最高可达1:128～1:256.琼扩试验证明,987P 与 F41之间无交叉免疫反应. 相似文献
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致断奶仔猪腹泻、水肿病大肠杆菌F18菌毛a因子单克隆抗体的研制及其初步应用 总被引：2，自引：0，他引：2
以表达 F18ac菌毛参考菌株 2 134(O15 7∶ H19)为研究对象 ,摸索出了 F18ac菌毛表达的最佳条件 ,采用热洗脱法获得了较纯的 F18ac菌毛 ,并以之免疫小鼠 ,利用淋巴细胞杂交瘤技术 ,用直接玻板凝集法筛选出 1株杂交瘤细胞株 19B4 ,能稳定分泌针对 F18ac菌毛和 F18ab菌毛共同抗原表位 a因子的单克隆抗体。细胞培养上清对 F18ac菌毛参考菌株 2 134和 F18ab菌毛参考菌株 10 7/ 86的直接凝集价均可达 1∶ 8,腹水单抗直接凝集效价可达 1∶ 10 2 4 ,而与猪源产 F4、F5、F6和 F4 1粘附素大肠杆菌菌株、鸡源产 型菌毛大肠杆菌菌株及沙门氏菌不发生凝集反应。免疫印迹试验结果显示 ,腹水单抗可同时特异识别 F18ac菌毛 170 0 0和 F18ab菌毛 15 0 0 0左右的主要亚单位多肽。应用所研制的单抗对 2 15株断奶仔猪腹泻大肠杆菌分离株进行了检测 ,结果上述分离株 TSB培养物的 F18菌毛的检出率为13.4 % ,TSA培养物的检出率为 8.4 %。F18菌毛阳性分离株的 O血清型除了常见血清型 O139、O14 1外 ,还有非常见血清型 O10 7、O131和 O9等。TSB培养物的 F18菌毛检出率明显高于 TSA培养物的检出率 ,表明 F18菌毛在 TSB培养基中比在 TSA培养基上更容易表达 ,TSB培养基是适合 F18菌毛检测、流行病学调查的培养基 相似文献
9.
致猪水肿病大肠杆菌F18ab菌毛单克隆抗体的研制及其初步应用 总被引：4，自引：0，他引：4
将致猪水肿病大肠杆菌 F18ab菌毛提纯 ,以其免疫 BAL B/ c小鼠 ,利用淋巴细胞杂交瘤技术 ,经 3次融合 ,共筛选出 4株能稳定分泌针对 F18ab菌毛的特异单克隆抗体的杂交瘤细胞株 4 G8、4 H11、4 A2和 3A12 ,腹水单抗的直接凝集价最高可达 1∶ 32 0 0。免疫印迹试验表明 ,4株腹水单抗均可特异识别 F18ab菌毛 Mr 15 0 0 0左右的主要亚单位多肽。应用所研制的单抗对 11株猪水肿病大肠杆菌分离株 F18ab菌毛表达情况进行了检测 ,结果显示 ,上述分离株中F18ab菌毛的出现率为 72 .7% (8/ 11) ,检出的 F18ab菌毛阳性分离株的 O血清型均为 O1 39。 相似文献
10.
根据已经发表的F18ab菌毛F亚单位(FedF/ab)的基因(fedF/ab),设计一对引物,利用PCR技术从本实验室保存的10株大肠杆菌(F107/86、YCED1、YCED2、C、D、E、12F、2134P、8199、8813)中分别扩增到一段序列,并克隆至pGEM_T载体,获得重组质粒TF107F、TYCED1F、TYCED2F、TCF、TDF、TEF、T12FF、T8813F、T8199F、T2134PF。琼脂糖凝胶电泳、序列测定及分析表明,该10个序列大小均为903bp。通过与已发表的fedF/ab进行比较,可将这10个菌株分为2个主要遗传分支;其中F107/86、YCED1、YCED2、C、D、12F与fedF/ab具有高度同源性,属于fedF/ab;另外E、8813、8199、2134P虽与fedF/ab具有99.4%的同源性,推导的氨基酸序列具有98.3%的同源性,但通过基因树分析证明其已成为一个单独的分支,属于fedF/ac。 相似文献
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Inheritance of the F4ab, F4ac and F4ad E. coli receptors in swine and examination of four candidate genes for F4acR 总被引：2，自引：1，他引：2
P. Python H. Jörg S. Neuenschwander M. Asai-Coakwell C. Hagger E. Bürgi H.U. Bertschinger G. Stranzinger & P. Vögeli 《Zeitschrift für Tierzüchtung und Züchtungsbiologie》2005,122(S1):5-14
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四个春箭舌豌豆品系原种及第三代过氧化物酶同工酶分析 总被引：4，自引：2，他引：2
应用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对引自国际干旱农业研究中心的4个春箭舌豌豆品系原种(F0)和在甘肃省甘南藏族自治州经过3个世代选育的F3代,进行幼苗下胚轴过氧化物酶同工酶分析。结果表明,2505品系F3代在相对迁移率(Rf)为0．725位置和原种相比酶带缺失,而Rf值为其它位置处谱带颜色均较原种为浅;2556F3代在Rf值为0．725处呈现酶带,而原种该谱带缺失,其它位置各谱带明显较原种为深;2560F3代在Rf值为0．211和0．266位置处酶带变宽,颜色加深;2566F3代在Rf值为0．725处呈现酶带而原种该谱带缺失,在Rf值为0．211和0．266处2酶带较原种位置偏上,颜色偏深。供试8个品系过氧化物酶同工酶酶谱与对照品种333／A相比,均存在较大差异。由此对以上4品系原种和F3代呈现出的宏观上的生态适应性提供了分子水平上遗传变异依据。 相似文献
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Byun JW Jung BY Kim HY Fairbrother JM Lee WK 《Veterinary journal (London, England : 1997)》2012,193(2):593-594
A one-step real-time PCR using one set of oligonucleotide primers and three probes was developed for differentiation of F4 (K88) variants (F4ab, F4ac, F4ad) of enterotoxigenic Escherichiacoli (ETEC) from diarrhoeic pigs. The limits of detection of F4ab, F4ac and F4ad in broth dilution were 10(6), 10(5) and 10(4)colony forming units (CFU)/mL, respectively. In faecal samples spiked with E.coli, the limits of detection of F4ab, F4ac and F4ad were 10(6), 10(6) and 10(4)CFU/g faeces, respectively, without enrichment and 10(3), 10(2) and 10(2)CFU/g faeces following enrichment. In 42 ETEC field isolates from pigs in Korea encoding the F4 gene, all were identified as the F4ac variant. 相似文献
15.
新城疫病毒F48E9株融合蛋白基因核苷酸序列分析 总被引：4，自引：1，他引：3
通过反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增出新城疫病毒国内标准强毒株Ｆ４８Ｅ９的融合蛋白基因的ｃＤ－ＮＡ。经双粘端定向克隆到ｐＵＣ１９的多克隆位点中,采用Ｓａｎｇｅｒ’ｓ双脱氧末端终止法测定ｃＤＮＡ片段的核苷酸序列,并推导出其氨基酸序列。Ｆ基因全长为１６６２个ｂｐ,单一的开放阅读框编码５５３个氨基酸的多肽。Ｆ蛋白的疏水构型有三个强疏水区;其裂解位点的氨基酸序列为１１２Ｒ－Ｒ－Ｑ－Ｒ－１１６Ｒ－１１７Ｆ;Ｆ蛋白上共有１２个Ｃｙｓ残基位点和五个潜在糖基化位点。 相似文献
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