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烟草马铃薯Y病毒病是由马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)引起的一种系统侵染烟草的病害,该病是我国烟草的主要病害之一。本文对烟草PVY的分子特征,包括马铃薯Y病毒PVY的生物学特性、致病机理与抗病标记等国内外研究现状做了详细介绍,并简单展望了烟草PVY抗病技术。 相似文献
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利用RT-PCR法对广东烟草样品的马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)辅助成分蛋白质(Helpercomponent proteinase,HC-Pro)基因进行了克隆,并对其进行了序列分析。测序结果表明广东PVY HC-Pro(命名为PVY-HC-GD)基因(用PVY-HC-GD表示)全长1 395 bp,编码465个氨基酸。与已报道的PVY HC-Pro基因核苷酸序列相比发现,PVY-HC-GD与PVY NTN株系(PVYNTN)(AB331517)的PVYHC-Pro基因核苷酸序列相似性最高,达99.6%。而氨基酸序列比较表明,PVY-HC-GD与PVY N株系(PVYN)(AM268435)的PVY HC-Pro氨基酸序列相似性最高,为99.1%。进一步将PVY-HC-GD的核苷酸和其编码的氨基酸序列与其他报道的同源基因比对构建了系统关系树,结果显示广东烟草样品中PVY-HC-GD与PVYNTN PVY HC-Pro亲缘关系最近。 相似文献
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为了解马铃薯Y病毒在贵州烟田的发生和流行规律,对2013—2015年采集到的贵州省多个烟区呈现典型茎脉坏死症状的疑似受马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)侵染的烟草样品进行单斑分离和病毒鉴定,并以现有PVY序列信息为参考,设计了4对PVY特异引物,经过RT-PCR扩增、T载体连接、序列测定以及序列拼接,并利用MEGA软件进行系统进化分析。结果发现PVY福泉分离物(PVY Fuquan isolate,PVY-FQ)和PVY大方分离物(PVY Dafang isolate,PVY-DF)为优势株系并获得了PVY-FQ和PVY-DF的全基因组序列。PVY FQ整条基因组由9 699个碱基组成,编码多聚蛋白的开放阅读框位于第188~9 373nt;PVY DF整条基因组由9 706个碱基组成,编码多聚蛋白的开放阅读框位于第190~9 375nt。2条序列的基本特征与已报道PVY基因组一致。对PVY-FQ和PVY-DF全序列与已报道PVY序列进行系统进化分析发现,PVY-FQ与PVY NTN株系具有较高的亲缘关系,而PVY-DF与PVYN具有较高亲缘关系。 相似文献
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马铃薯Y病毒(PVY)对烟草品系NC744及其PVY抗性亲本Virgin A Mutant侵染速度低于另一亲本、推广品种Coker 86。对烟蚜(Myzus persicae)和棉蚜(Aphis gossypii)传播PVY的抗性,NC744显著高于COKer 86。 相似文献
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《西南大学学报(自然科学版)》2020,(9)
利用RT-PCR检测体系对贵州毕节烟区的烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus, TMV)、黄瓜花叶病毒(cucumber mosaic virus, CMV)和马铃薯Y病毒(potato virus Y, PVY) 3种病毒进行病害检测和株系鉴定,样品检测结果显示, TMV发生最严重,检出率为64.13%,其次是PVY,检出率为40.22%, CMV发生较轻,检出率为31.52%.通过同源性比较和构建系统进化树,结果表明,毕节烟区CMV均属于ⅠB亚组, TMV均属于种群Ⅰ, PVY均属于PVY~(N∶O)株系,各株系间没有明显的地域差异,烟田周边马铃薯上分离物MQG1和MQG2,与烤烟上CMV,TMV和PVY 3种病毒的分离物亲缘关系较近,由此可以推测,烟田周边的马铃薯可能是烟田这3种病毒的主要毒源. 相似文献
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河南省马铃薯Y病毒的分子检测与鉴定 总被引：6，自引：0，他引：6
利用RT-PCR技术对郑州市和信阳市的马铃薯Y病毒(potato virus Y,PVY)进行了鉴定。依据PVY p1基因序列设计合成1对引物,以带毒的马铃薯叶片总RNA为模板,RT-PCR扩增得到0.58kb的目的DNA片段,而健康对照无此片段。对PCR产物进行序列测定,Blast分析表明,该DNA序列与PVY N:O株系p1基因序列相似性可达99%,证明所得DNA片段确为PVY p1基因,从而建立了PVY的RT-PCR检测方法。在此基础上,从节省检测时间、优化反应程序及反应体系等方面进行了改进。 相似文献
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[目的]探索适合昭通市昭阳区的有效防治马铃薯Y病毒(PVY)的农艺措施,降低PVY对烤烟生产造成的损失。[方法]测定不同种类地膜覆盖烟地的PVY发病率和病情指数,研究不同种类地膜覆盖对马铃薯Y病毒病的影响。[结果]在烤烟生长的旺长期,3种不同种类地膜覆盖对马铃薯Y病毒病的防治效果来看,黑膜覆盖发病最轻,白膜覆盖发病最重;3种不同种类地膜覆盖的平均病株率为黑膜覆盖(2.55)银灰色膜覆盖(4.39)白膜覆盖(6.78);3种不同种类地膜覆盖的平均病情指数为黑膜覆盖(1.361)银灰色膜覆盖(2.819)白膜覆盖(3.889);黑膜覆盖的发病率和病情指数均最低,黑膜覆盖与银灰色膜覆盖、白膜覆盖发病率和病情指数差异均极显著。[结论]黑色地膜覆盖栽培的烤烟在烤烟生长的主要关键时期发病较轻。这可能是因为黑色地膜反光驱避蚜虫,减少带病毒蚜虫对烟株的接触机会,从而减轻PVY等的发生,黑色地膜比银灰色或白色地膜效果更好。 相似文献
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马铃薯Y病毒病与根结线虫病发生关系研究 总被引：1，自引：0，他引：1
[目的]探讨适合昭阳区的有效防治马铃薯Y病毒(PVY)和根结线虫的生物药剂,降低PVY和根结线虫病对烤烟生产造成的损失。[方法]通过防治根结线虫病的4种药剂和防治马铃薯Y病毒病的3种药剂之间的随机组合进行2种病害间的联防,研究根结线虫的发生对PVY发病率和病情指数的影响。[结果]得出3种最优组合:一是在施用0.5%肯邦线尊颗粒剂(0.5%阿维菌素)作为防治根结线虫病的前提下,后期施用克y特灵(5.6%嘧肽吗啉胍)作为防治马铃薯Y病毒病的药剂,病情指数表现偏低;二是在施用金东旺(阿维·丁硫)作为防治根结线虫病的前提下,施用宁南霉素(8%菌克毒克水剂)作为防治马铃薯Y病毒病的药剂,病情指数表现偏低;三是在施用金东旺作为防治根结线虫病的前提下,施用超敏蛋白(3%微粒剂)作为防治马铃薯Y病毒病的药剂,病情指数表现偏低。[结论]根据研究结果,一方面马铃薯Y病毒病和根结线虫病应分别防治;因为烟草马铃薯Y病毒病在没有根结线虫的情况下照样发生,所以需改变防治根结线虫病的同时也达到防治马铃薯Y病毒病的想法;在2种病同时严重发生的地域,更应重视2种病的同时防治。另一方面根结线虫的存在会加重马铃薯Y病毒病的发生。 相似文献
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为了利用RNA干扰技术防治烟粉虱,需要构建凋亡抑制蛋白(IAP)基因dsRNA转基因烟草表达载体。利用PCR技术扩增烟粉虱IAP基因,将其连接到pMD18-T载体中,用BglⅡ、XhoⅠ和BamHⅠ、SalⅠ分别酶切,将获得的片段分别反向、正向连接至pUC-RNAi载体,用PstⅠ酶切pUC-RNAi-IAP,回收酶切片段,将其连接到表达载体pCAMBIA-2300-35S中,并进行酶切验证。IAPdsRNA转基因烟草表达载体的成功构建为下一步转基因烟草防治烟粉虱的研究奠定基础。 相似文献
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[目的]构建松材线虫cyp-13A11基因RNA干扰载体,研究cyp-13A11基因的功能,为松材线虫病的生物防治提供理论依据.[方法]本文通过设计特异性引物,扩增松材线虫cyp-13A11基因片段,构建至pEASY-T1干扰载体上并转入Trans1-T1大肠杆菌菌株.采用浸泡法对松材线虫进行RNA干扰,通过qRT-P... 相似文献
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利用PVYN-CP和PLRV-CP基因构建了dsRNA原核表达载体L4440RYl,转至大肠杆菌HT115(DE3),获得菌株HTRYl。绘制了菌株HTRYl的生长曲线,研究了IPTG浓度和诱导时间对该菌株dsRNA表达量的影响。结果表明,接种3.5h,菌体浓度OD600为0.6,加入终浓度为0.3～0.4mmol/L的IPTG,诱导4～5h时,dsRNA表达量最高。dsRNA表达条件的研究,为dsRNA的应用研究奠定了基础。 相似文献
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构建DjStag基因的RNA干扰表达载体,诱导表达产生dsRNA后喂食涡虫,观察DjStag表达变化及对涡虫再生的影响。本文以含有东亚三角涡虫DjStag基因的pcDNA3 DjStag重组质粒为模板,经PCR 扩增目的片段,将其克隆到干扰载体L4440 上,构建重组质粒L4440 DjStag后转化入大肠杆菌HT115感受态细胞中, IPTG 诱导表达dsRNA后喂食涡虫。显微观察涡虫再生过程中的表型变化,Real time PCR检测干扰后涡虫DjStag基因表达的变化。结果表明,成功构建了DjStag基因的RNA干扰表达载体;DjStag基因 RNA干扰后,涡虫不能正常再生,再生片段显示出明显的再生缺陷;涡虫体内DjStag基因的表达受到抑制,DjStag mRNA的表达水平显著下降。 相似文献
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[目的]明确Osdg中T-DNA插入位点的基因是否为引起突变表型的基因。[方法]采用OsWRKY10基因5’端、不含WRKY保守域的长300 bp的cDNA片段,构建抑制OsWRKY10基因表达的特异性dsRNA干涉重组表达载体pCam-35SWInW。采用冻溶法将pCam-35SWInW载体导入根癌农杆菌超毒力菌株EHA105,对其进行PCR检测。[结果]该研究成功构建了重组表达载体pCam-35SWInW。采用相应限制性内切酶对重组表达载体进行酶切鉴定,其中以XhoⅠ消解重组质粒,可获得1 kb左右的DNA片段。在抑制基因表达方面,发卡结构比反义结构更为有效。[结论]该研究成功构建了抑制OsWRKY10表达的特异性dsRNA干涉载体,可用于进一步的基因功能研究。 相似文献
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以克隆水稻矮缩病毒(Rice dwarf virts,RDV)基因组片段S11、S12为例,报道一种克隆植物dsRNA病毒基因组的方法.具体过程为:利用T4 RNA连接酶将5′-磷酸、3′-氨基修饰的引物Primer 1连接到RDV病毒基因组第11、12片段dsRNA的3′-OH端,经逆转录、退火、补齐形成全长双链cD-NA,使用单一的互补引物Primer 2进行PCR扩增,扩增产物克隆在pMD 18-T载体上,对重组子进行两次限制性内切酶分析,结合序列测定分离鉴定S11、S12.结果表明,这种方法能同时克隆RDV基因片段S11、S12,是一种有效实用的dsRNA病毒基因组克隆方法. 相似文献
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高效靶向降解烟草花叶病毒核酸的dsRNA筛选与大量制备 总被引：1，自引：0，他引：1
【目的】筛选高效靶向降解烟草花叶病毒（tobacco mosaic virus,TMV）的dsRNA,实现其大量制备,并探究其作用机制。【方法】以TMV编码的CP、MP、RdRP功能基因为靶序列,体外转录合成相应的dsRNA,浸润本氏烟（Nicotiana benthamiana）,24 h后接种TMV,于接毒后2、3 d取样提取总RNA和蛋白质,以CP基因mRNA水平和蛋白水平为指标,结合TMV病毒生物学症状,综合评价各dsRNA对TMV的抑制效果。同时结合侵染性克隆TMV-30B在本氏烟烟株上的荧光表达现象和TMV在三生烟（Nicotiana tabacum var. Samsun NN）上的过敏性坏死反应（hypersensitive necrosis reaction）,通过比较TMV基因组上6个靶序列相对应的dsRNA,筛选出高效抑制TMV的dsRNA片段。为了获取大量的dsRNA,将dsRNA对应的基因片段插入到原核表达载体L4440的双T7启动子之间,转化至RNase III缺陷型大肠杆菌（Escherichia coli）HT115（DE3）中,并对原核表达制备的dsRNA喷施烟草后生成的siRNA进行深度测序,比较外源施用dsRNA后,对TMV侵染的small RNA表达特征和富集带的影响。【结果】筛选出高效影响TMV CP基因表达的dsRNA RdRP1461-1774,并构建了可诱导形成目的dsRNA的原核表达载体L4440-dsRdRP1461-1774,可在DE3中大量制备RdRP1461-1774的dsRNA,菌液中提取的dsRNA喷施于烟草上对TMV的防治效果显著。TMV-30B侵染本氏烟时荧光数量减少,并能够延长叶片萎蔫时间,在三生烟上施用时叶片枯斑数量明显减少。小RNA测序结果显示TMV侵染引起的RNAi过程中正义链和反义链以大致相等的频率产生siRNA,而外源性dsRNA的浸润会引起靶向区域siRNA的富集,siRNA反义链累积量骤增,对应的正义链累积量骤减,外源dsRNA的施用能够引起siRNA表达丰度的变化。【结论】通过比较dsRNA介导植物靶向抗TMV侵染的效果来筛选抗烟草花叶病毒的dsRNA序列,最终选定TMV RdRP基因上一段长313 bp的高效作用片段,该片段dsRNA能够高效与靶基因结合,降低染病植株烟草花叶病毒的表达量。同时构建了RdRP1461-1774基因的dsRNA原核表达系统,实现其低成本的高效量产,为后续dsRNA在植物病毒方面的防治应用打下了基础。 相似文献
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大白菜开花基因 LFY的克隆及dsRNA抑制载体的构建 总被引：2，自引：0，他引：2
以中国大白菜花蕾为材料,通过RT-PCR方法,参照GeneBank公布的序列克隆了Leafy(简称LFY)基因片段,测序分析结果表明,该基因与国外已经报道的序列具有94％的同源性。将此序列以相反方向插入到植物表达载体pROK2 35S启动子之间,并在2反向重复片段之间插入小麦乙酰辅酶A羧化酶的第20内舍子,从而构建了dsRNA抑制双元载体,该载体的构建为通过农杆菌介导转化大白菜进而解决早春扣反季栽培大白菜的先期抽薹问题创造了条件。 相似文献
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分别建立了水稻锯齿叶矮缩病毒(RRSV)病株的dsRNA基因组检测法和单头介体褐飞虱带毒的RT-PCR法,并结合生物学接种试验,对介体传毒特性进行了初步分析.结果显示:dsRNA基因组鉴定法可以从0.5 g病株样品中快速检测到RRSV,RT-PCR法可以灵敏地应用于褐飞虱带毒、传毒情况的检测;饲毒后褐飞虱成虫、若虫的带毒率分别为75.0%、68.2%,传毒率分别为50.0%、32.5%,说明褐飞虱种群传播RRSV的能力很强,是高度亲和的群体. 相似文献