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蛋白质的分离纯化技术是实现酶和蛋白质研究及产品工业化的关键技术之一。该研究就适用于酶和蛋白质分离纯化的各项技术的原理、分类和特点进行了简要的阐述,并对各分离技术的应用进展和应用中应注意问题进行了重点综述。 相似文献
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俞莲君 《郑州牧业工程高等专科学校学报》1995,(1)
蛋白质的分离纯化是一件细致的工作、有时制备一个纯度较高的蛋白质要付出艰巨而长期的努力.制备工作涉及物理学、化学和生物学等较广的知识,在这个繁杂的过程中需要许多复杂的技术操作.到目前为止,还没有一个单独的或一套现成的方法能够把任何一种蛋白质从复杂的混合蛋白质中提取出来,但是对于任何一种蛋白质都有可能选择一套适当的分离程序以获得高纯度的制品.所以,提纯某种蛋白质时,各种方法都要尝试.实验前要进行充分的调查研究,对自己欲分离提纯的蛋白质有一定的了解,同时要建立相应的分析鉴定方法,以指导分离纯化工作的顺利进行.1 蛋白质分离纯化的常用方法 相似文献
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综述了蛋白质的提取方法、纯化技术、结构鉴定技术及影响蛋白质分离和提取的因素,旨在为开展蛋白质的制备及其应用研究提供理论依据。 相似文献
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仙人掌抗菌肽的筛选、分离纯化及性质研究 总被引：1，自引：0，他引：1
目的:研究仙人掌植物是否具有起抑菌作用的抗菌肽,并对其进行分离纯化和部分性质研究。方法:采用梯度盐析的方法提取6种仙人掌不同饱和梯度硫酸铵沉淀的蛋白质组分进行抑菌性试验,筛选蛋白质组分具有抗菌效果的仙人掌品种。用Sephadex G-75和Sephadex G-25柱层析对抗菌效果最为显著的蛋白质组分进一步分离纯化,并对纯化到的具有抗菌活性的多肽物质进行分子量、理化性质和抗菌活性检测。结果:发现4种仙人掌中存在对金黄色葡萄球菌有抗菌作用的小分子量蛋白质成分。其中金手球所含蛋白质组分的抗菌效果最为显著,并从中分离纯化得到具有抗菌活性的多肽物质,命名为MH-AMP-1。MH-AMP-1的分子量(Mr)约为8511 Da,在pH 2.5~7.5的乙酸铵缓冲液中抗菌活性强,且具有一定的热稳定性,对检测的病原菌具有广谱抗菌活性。 相似文献
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俞莲君 《郑州牧业工程高等专科学校学报》1993,(4)
蛋白质分离纯化的方法很多,如离心、色谱、电泳等等。但是要想得到纯度较高的某种蛋白质,往往需要经过很多繁琐复杂的过程,在这“几经周折”的过程中,会因种种因素而影响到纯品的获得量。近几年来,蛋白质纯化的新趋势是使用制备型等电聚焦电泳技术。此技术的最大优点是它的浓缩能力和“一步”达到高度纯化。所以。比较省时 相似文献
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【目的】探索甘蔗幼苗叶片完整叶绿体的分离纯化及其叶绿体蛋白质提取方法,为深入研究甘蔗叶绿体蛋白质组学奠定基础。【方法】以甘蔗品种ROC22幼苗叶片为材料,通过差速离心法制备粗叶绿体制品,分别利用蔗糖密度梯度离心和Percoll梯度离心进一步分离纯化完整叶绿体;提取叶绿体蛋白质,并进行电泳分析。【结果】两种密度梯度离心法均可获得纯度和完整率较高的叶绿体,但蔗糖密度梯度离心法具有分离时间较短、成本较低,分离的叶绿体完整率、纯度和含量高等特点,并且提取的叶绿体蛋白质电泳条带清晰,蛋白质数量多且较全。【结论】与Pecoll梯度离心法相比,蔗糖密度梯度离心法更适宜于在亚细胞水平上进行甘蔗蛋白质组学研究。 相似文献
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【目的】探索甘蔗幼苗叶片完整叶绿体的分离纯化及其叶绿体蛋白质提取方法,为深入研究甘蔗叶绿体蛋白质组学奠定基础。【方法】以甘蔗品种ROC22幼苗叶片为材料,通过差速离心法制备粗叶绿体制品,分别利用蔗糖密度梯度离心和Percoll梯度离心进一步分离纯化完整叶绿体;提取叶绿体蛋白质,并进行电泳分析。【结果】两种密度梯度离心法均可获得纯度和完整率较高的叶绿体,但蔗糖密度梯度离心法具有分离时间较短、成本较低,分离的叶绿体完整率、纯度和含量高等特点,并且提取的叶绿体蛋白质电泳条带清晰,蛋白质数量多且较全。【结论】与Pecoll梯度离心法相比,蔗糖密度梯度离心法更适宜于在亚细胞水平上进行甘蔗蛋白质组学研究。 相似文献
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皱皮木瓜超氧化物歧化酶分离纯化研究 总被引：6，自引：1，他引：6
[目的]探讨皱皮木瓜超氧化物歧化酶（SOD）分离纯化工艺。[方法]以重庆綦江皱皮木瓜为试验材料,采用硫酸铵分级沉淀、Se-vage法除杂蛋白、丙酮再次沉淀脱色除杂和Sephadex G-100凝胶层析,分离纯化皱皮木瓜SOD。采用Folin-酚法测定蛋白质含量,用改良的邻苯三酚自氧化法测定酶活性。[结果]皱皮木瓜SOD在层析过程中得到较好的分离纯化。其纯化倍数是178.72倍,回收率是4.94%,比活力是303.82 U/mg蛋白。SDS-PAGE纯度鉴定结果表明,电泳图为一条谱带,表明分离纯化到达电泳纯的样品。[结论]采用该分离纯化工艺得到比活力较高,达到电泳纯的皱皮木瓜SOD样品。 相似文献
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[目的]为下一步阐明柞蚕粘液腺内容物中56 kD蛋白的功能提供参考。[方法]利用SDS-PAGE,分离柞蚕粘液腺内容物中56kD蛋白,并对其进行初步纯化。采用蛋白印迹法,将其成功转移至PVDF膜,检测其转移效果。[结果]通过对56 kD蛋白的分离和初步纯化,得到单一的蛋白质谱带。经电泳转移后的凝胶和PVDF膜染色结果表明,凝胶中未见蛋白谱带出现,而PVDF膜上的目的蛋白谱带清晰可见,表明56 kD蛋白质已经完全转移至膜上。[结论]该研究为目的蛋白的进一步纯化和氨基酸序列分析奠定了基础。 相似文献
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优选密蒙花(Buddleja officinalis Maxim)总黄酮的分离纯化工艺条件。以总黄酮含量为指标,通过静态和动态试验确定较佳树脂,并通过单因素试验和正交试验优化密蒙花中总黄酮的分离纯化工艺。结果表明,采用AB-8型吸附树脂纯化效果较佳,其优化的密蒙花总黄酮分离纯化工艺为上样浓度2.24mg/m L,用3 BV 50%乙醇洗脱,洗脱流速为1.5 m L/min;处理后所得干膏中总黄酮的纯度为71.31%。其优选的工艺条件简单可行,可为工业化纯化密蒙花总黄酮提供参考。 相似文献
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[目的]构建敲除传染性法氏囊病病毒（IBDV）VP5蛋白跨膜区序列的原核表达载体,并进行目的蛋白的表达、分离和纯化。[方法]利用PCR技术分别扩增IBDVVP5基因的胞外片段和胞内片段,然后将2个片段及pET-28b（＋）同时相接,即载体一胞内片段一胞外片段一载体,构建了敲除跨膜区基因片段的VP5重组表达质粒pET—VP5-FC及改进后的pET—VP5-SC。将表达质粒转化BL21（DE3）,IPrG诱导后经Ni亲和层析及凝胶过滤层析纯化重组蛋白。[结果]得到可溶性表达的IBDVVP5。[结论]为进一步研究VP5蛋白的结构与功能奠定了基础。 相似文献
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混合模式吸附色谱分离纯化贻贝粘蛋白的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
[目的]研究高强度琼脂糖基质混合模式吸附介质分离纯化贻贝粘蛋白的方法并探讨分离机理。[方法]考察在不同酸碱度、不同离子强度下,贻贝粘蛋白在凝胶上的静态吸附、动态吸附及解吸附过程。[结果]氯化钠浓度从0增加到0.5mol/L,介质和蛋白之间平衡吸附量变化在6%以内;而酸碱度对吸附的影响较大,当酸碱度跨越蛋白等电点时,单位酸碱度（pH）最大吸附量变化百分比达23%。[结论]介质的复合配基与贻贝粘蛋白间表现了离子交换、疏水作用、氢键吸附的混合吸附作用,采用酸碱度高于等电点的洗脱液洗脱贻贝粘蛋白,得到纯度为90%的贻贝粘蛋白。 相似文献