共查询到19条相似文献，搜索用时 250 毫秒
1.
《北方园艺》2020,(3)
柚喀木虱Cacopsylla citrisuga YangLi是柑桔黄龙病的传播媒介,在云南省宏德州主要为害柠檬、柚子等果树类的嫩梢及嫩叶,其成虫及若虫体内均检测到黄龙病亚洲种病原菌‘Candidates Liberibacter asiaticus’。该研究基于16S rDNA基因的RFLP指纹图谱法,建立了野外柠檬和柚子上柚喀木虱成虫体内微生物的16S rDNA文库,分析了柚喀木虱体内共生菌多样性。结果表明:柚喀木虱体内存在共9种体内共生菌,木虱/喀木虱次生共生菌(secondary endosymbiont of Psylla/secondary endosymbiont of Cacopsylla)、不可培养菌(uncultured bacterium)、Arsenophonus endosymbiont、Pantoea sp.、uncultured Erwiniasp.、Pseudomonas sp.、Rahnella sp.、Enterobacter sp.、Wolbachieae bacterium。根据指纹图谱结果分析,每个文库所分布操作单元(OUT)结果均不同,表明不同寄主植物及性别的柚喀木虱成虫体内共生菌的种类及数量存在差异。 相似文献
2.
《果树学报》2020,(9)
【目的】柑橘黄龙病(Citrus Huanglongbing,HLB)是柑橘产业的头号杀手,其病原主要是韧皮部杆菌属亚洲种(Candidatus Liberibacter asiaticus,CLas),为革兰氏阴性菌,田间主要经亚洲柑橘木虱(Diaphorina citri)传播,为深入研究该病菌分泌蛋白的功能,笔者筛选其中1个分泌蛋白,进行原核表达并制备抗体。【方法】设定4点条件从Prasad等预测的166个分泌蛋白基因中筛选,与pET-28a构建重组表达载体,以原核表达的融合蛋白作为抗原,用于注射兔子,制备多克隆抗体。【结果】从预测的166个分泌蛋白基因中筛选出05150基因,成功构建表达载体pET-28a-05150,表达菌株pET-28a-05150在18℃、0.1 mmol·L~(-1) IPTG浓度条件下诱导的目的蛋白为包涵体。获得的pET-28a-05150抗血清通过ELISA效价为1∶4 000,通过dot ELISA检测手段可与田间感病样品发生显色反应,通过Western blot能与融合蛋白杂交出特异性条带。【结论】该研究筛选了CLas的分泌蛋白基因05150,以其体外表达蛋白制备了pET-28a-05150抗血清,为研究05150基因功能奠定前期基础,也为建立HLB的血清学检测手段及探究柑橘黄龙病菌分泌蛋白基因的筛选方法提供参考。 相似文献
3.
从严格密封温室的盆栽巨峰葡萄根系、寄生的葡萄根瘤蚜虫体和根际土壤中分离获得17个细菌菌株,并对其16S rDNA基因进行PCR扩增和序列分析。结果表明,17个细菌菌株16S rD-NA均扩增出1 500 bp左右的片断,通过与Genbank上已知同源性较高细菌的16S rDNA部分序列对比,初步确定了这17个细菌菌株分属于蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)、枯草芽孢杆菌(Bacillus substilis),其中蜡状芽孢杆菌(菌株C2、R2、L2、L3、L4)和巨大芽孢杆菌(菌株L1、L4、R1、R3、C1、B1、B2、J1、J2)集中于葡萄根系和葡萄根瘤蚜虫体,而枯草芽孢杆菌(菌株T1、T2)只在根际土壤中发现,说明蜡状芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌为葡萄根系和葡萄根瘤蚜的共生细菌。 相似文献
4.
葡萄卷叶伴随3型病毒和葡萄A病毒的多重检测及其系统进化分析 总被引：1，自引：0，他引：1
葡萄卷叶伴随3型病毒（Grapevine leafroll associated virus-3,GLRaV-3）和葡萄A病毒（Grapevine virus A,GVA）常常复合侵染部分主栽欧美杂交葡萄品种。以半定量RT-PCR与qRT-PCR方法研究了‘希姆劳特’葡萄（Vitis vinifera L. × V. labrusca L.‘Himrod’）中不同组织内病毒的相对积累量,结果表明叶脉和韧皮部内的病毒相对积累量显著高于其他组织。以成熟枝条韧皮部组织的cDNA为模板,优化了RT-PCR多重扩增体系,可以同时扩增待测样本中两种病毒的目标基因。从一株复合感染GLRaV-3与GVA的‘藤稔’葡萄（Vitis vinifera L. × V. labrusca L.‘Fujiminori’）中,分别克隆了GLRaV-3外壳蛋白（coat protein,CP）基因全长序列和GVA部分基因组区域序列,后者包括CP基因的部分序列与病毒RNA沉默抑制子（viral suppressor of RNA silencing,VSR）基因全长序列。病毒核酸同源性分析与系统进化研究表明,不同GLRaV-3分离物的CP高度保守;而‘藤稔’葡萄的GVA分离物包含多种变异株,具有准种病毒的特点。 相似文献
5.
雪花梨及其亲缘品种S基因型的确定 总被引：8，自引：2，他引：8
梨是典型的自交不亲和性果树,自然授粉结实率低,品质差。通过确定梨品种S基因型可寻找简便快速克服自交不亲和性,提高产量,改良品质的方法。根据梨S基因的一级结构特点,利用S基因的保守序列设计特异引物,并对雪花梨及其亲缘品种的基因组DNA进行PCR扩增。将基因组特异扩增电泳只显示一条S基因带雪花梨的特异扩增片段回收并与T载体连接,转化至大肠杆菌中。取其中1个阳性克隆进行测序,并通过生物信息学软件分析确定其核苷酸序列,推导出氨基酸序列,经网上Blast比较,确定该雪花梨S基因片段的S基因型,然后就该S基因进行酶切系统分析,有针对性地挑取另一个阳性克隆测序分析。另外,通过品种间的亲缘关系并经过酶切检测以分析雪花梨亲缘品种的S基因型,并确定各品种的S基因型分别为:雪花S4S16、冀蜜S1S16、雪青S3S16、雪峰S4S16、雪英S3S16、雪芳S4S16。 相似文献
6.
几种苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白对黑龙江省主要蔬菜害虫小菜蛾活性分析 总被引：1，自引：0，他引：1
利用已克隆的3种Bt cry基因cry1Ca、cry1Ia、cry2Ab和1种野生菌株HD-73(cry1Ac)表达的4种Bt Cry杀虫晶体蛋白,对小菜蛾进行生物活性分析,并将Cry1Ac杀虫晶体蛋白分别与其它3种蛋白按1:1的比例组合,对小菜蛾进行生物活性测定.结果表明:单独使用Cry1Ac的活性最高,LC50为2.39 μg/mL,Cry1Ac与Cry2Ab混合对小菜蛾的具有较高的毒力,LC50为48.91,高于其它组合. 相似文献
7.
大白菜核雄性不育相关基因BrLTP1的克隆及特征分析 总被引：2，自引：0，他引：2
利用cDNA-AFLP技术分析大白菜核雄性不育两用系‘AB02’可育株（msms）和不育株（Msms）花蕾的基因表达谱,在可育株混合花蕾cDNA中扩增出1条特异条带TDF-25,通过RACE和RT-PCR技术克隆了该基因的全长cDNA序列。序列分析表明,该基因编码脂质转移蛋白,命名为BrLTP1。BrLTP1全长cDNA序列为750 bp,推测编码1个包含183个氨基酸残基的前体蛋白。BrLTP1蛋白含有典型的脂质转移蛋白N端信号肽,保守的AAI结构域和半胱氨酸位点。预测BrLTP1蛋白含有多种修饰性位点,包括1个PKC磷酸化位点,2个N–糖基化位点和10个N–端豆蔻酰基化位点。基因表达模式表明,BrLTP1在两用系不育株花蕾中受到强烈抑制,在可育株的大花蕾、成熟花药以及花瓣中高水平表达。 相似文献
8.
通过TAIL-PCR 染色体步移技术,从甘蓝（Brassica oleracea L. var. capitata L.）基因组中克
隆到胞质雄性不育（OguCMS）相关基因BoMF1 翻译起始位点上游521 bp 的启动子序列。软件分析预测
表明,该启动子序列中存在多个顺式作用元件,包括TATA-box、CAAT-box、MYB 结合位点、植物激
素响应单元等。为了研究该启动子的表达特性,亚克隆了BoMF1 转录起始位点上游521 bp 序列,将其置
换pBI121 中的CaMV35S 启动子,驱动其下游的GUS 基因,构建植物表达载体pBI121-BoMF1P,以pBI121
空载体作为阳性对照,通过农杆菌（LBA4404）介导法转入拟南芥。结果表明,甘蓝BoMF1 启动子序列
能驱动GUS 基因在拟南芥花药发育晚期的花药和花粉中特异表达,表达具有组织特异性。 相似文献
9.
韧皮部特异启动子驱动密码子优化的抗菌肽D基因的植物表达载体构建 总被引：1，自引：1，他引：1
根据177个GenBank中登录的柑橘编码蛋白密码子用法的分析结果,优化并重新设计和合成了含柑橘偏爱密码子、对柑橘黄龙病有杀灭作用的柞蚕抗菌肽D基因(命名为CAPD),克隆入pUC19克隆载体并经测序验证后,获得了含新抗病基因的重组质粒pUC19-CAPD。用限制性内切酶BamHI和SacI双酶切pUC19-CAPD克隆载体和pBI121植物表达载体的质粒DNA,回收pUC19-CAPD克隆载体中的CAPD基因小片段和pBI121植物表达载体中去掉GUS报告基因的大片段,经连接、转化和鉴定后,构建了由CaMV35S组成型启动子(35SP)驱动CAPD目的基因的新植物表达载体(命名为pHZ05);用限制性内切酶BamHI和HindIII双酶切含笋瓜韧皮部特异启动子(PSP)的pUCm-PSP克隆载体和pHZ05植物表达载体的质粒DNA,分别回收pUCm-PSP克隆载体中的PSP小片段和pHZ05植物表达载体中去掉CAPD目的基因上游35SP的大片段,经连接、转化和鉴定后,构建了由PSP驱动CAPD目的基因的新植物表达载体(命名为pHZ06)。利用细胞感受态法直接将2个由不同启动子驱动的含CAPD目的基因的新重组植物表达载体分别导入根癌农杆菌LBA4404、GV3101、EHA105和发根农杆菌Ri15834等4个农杆菌菌株中,为利用农杆菌介导的遗传转化技术培育抵抗由韧皮部传导的毁灭性和检疫性病害柑橘黄龙病的新种质奠定了基础。 相似文献
10.
对NCBI基因库黄龙病亚洲种病原菌序列进行拼接, 并根据拼接结果在rplKAJL-rpoBC, 16S/23S rRNA和omp 3个位点上设计引物, 采用基因组步行方法, 在其亚洲种3个位点上共获得了15 168 bp非冗余新序列, 其中, 在rplKAJL-rpoBC位点上5′端上游区和3′端下游区分别获得了3 218和2 653 bp的非冗余新序列; 在16S/23S rRNA 位点上5′端上游区和3′端下游区分别延伸了1 853和2 459 bp的新序列; 在omp基因位点上分别获得了4 014和971 bp的新序列。序列分析表明在rplKAJL-rpoBC位点上的新序列包含2个新基因(suhB和serA); 16S/23S rRNA位点新序列包含4个新基因(膜转运蛋白基因、细胞壁脱氢酶假基因、5S rRNA、tRNAMet ) , omp位点新序列包含6个新基因(rpsB、tsf、pyrH、frr、cdsA2、cds2) 。这些新序列的获得为以PCR为基础的黄龙病相关研究提供了有用的参考依据。 相似文献
11.
12.
13.
AIM：To investigate the effects of interferon-inducible protein 16 (IFI16) on the proliferation and migration of human brain vascular adventitial fibroblasts (HBVAFs). METHODS：The siRNA of IFI16 gene was transfected into HBVAFs. Forty-eight hours after transfection, the cells were exposed to 2×106 U/L interferon alpha (IFN-α) for 24 h. Cell cycle was analyzed by flow cytometry. Cell migration was determined by scratch assay and transwell method. The mRNA and protein levels of IFI16, p53 and p21 were measured by real-time PCR and Western blotting, respectively. RESULTS：After transfection with IFI16 siRNA, the expression of IFI16, p53 and p21 at mRNA and protein levels was decreased in HBVAFs, and the cell cycle at G1/S transition was promoted. Meanwhile, stimulated with IFN-α up-regulated the expression of IFI16, p53 and p21 at mRNA and protein levels, and inhibited the cell cycle transition at G1/S and cell migration in HBVAFs. Such effect was restrained by transfection with IFI16 siRNA into HBVAFs. CONCLUSION：The expression of IFI16 inhibits the proliferation and migration of HBVAFs, which may be related to the activation of p53 and p21 expression. 相似文献
14.
本试验以新疆南疆地区特色甜瓜——“比斜克其”作为材料,通过培养皿滤纸法用苦豆子不同部位(叶片、茎秆、豆荚和种子)浸提液对“比斜克其”种子进行处理,分别测定种子发芽和幼苗生长情况。试验结果表明,对照组种子萌发率、发芽势和发芽指数均大于苦豆子处理组,其中种子浸提液处理的萌发率、发芽势和发芽指数等指标均小于其他4个处理。对照组幼苗的平均胚轴长度、平均主根长度、平均侧根数目、平均鲜质量和平均干质量均小于苦豆子处理组,其中茎秆浸提液处理的胚轴长度、主根长度、侧根数目以及鲜质量均大于其他处理组。因此苦豆子植株不同部位浸提液对“比斜克其”种子萌发具有抑制作用,其中种子浸提液的抑制作用最强;但对“比斜克其”幼苗及根系生长均具有促进作用,其中茎秆浸提液促进作用最强。因此不建议将苦豆子作为底肥在“比斜克其”播种之前施用,而应在种子萌发之后作为追肥施用。 相似文献
15.
阿维菌素与蚜虱净混配防治中国梨木虱药效试验 总被引：1，自引：0，他引：1
为克服梨木虱对单一药剂长期使用产生抗性以及高毒农药对环境的污染,研究阿维菌素与蚜虱净的混配药剂对梨木虱的防治效果。结果表明:阿维菌素与蚜虱净混配防治梨木虱,具有良好的速效性和持效性;药后1 d的防治效果为87.1%,高于各单剂和对照药剂;药后15 d的防治效果为93.2%,显著高于单剂10%吡虫啉WP 1 000倍和对照药剂40%水胺硫磷EC1 000,与1.8%阿维菌素EC 2 000倍差异不显著,但阿维菌素与蚜虱净混配扩大了杀虫谱。 相似文献
16.
LIU Qi-cai WANG Ying-feng YANG Chun-xiang LI Xiao-yan PENG Yan PENG Jie LI Bing LI Li 《园艺学报》2011,27(2):357-360
AIM: To investigate the effect of small interfering RNA(siRNA) on limb-bud and heart(LBH) gene expression in 16HBE cells, and further to observe the change of 16HBE cell cycle after knocking down of LBH gene. METHODS: Synthetical siRNA targeting LBH gene was transfected into 16HBE cells by the method of lipofectamine 2000. The mRNA expression of LBH was examined by real time RT-PCR. The cell cycle was assayed by flow cytometry. The expression of cyclin E1 and E2 was also detected by real time RT-PCR and Western blotting.RESULTS: The expression of LBH gene decreased by 86% in 16HBE cells transfected with 50 nmol/L of siRNA for 48 h. After transfected with siRNA for 48 h, 16HBE cells in G1 phase decreased by 9.28% and the cells in S phase increased by 14.08%. The expression level of cyclin E2 in 16HBE cells transfected with siRNA was twice higher than that of the negative control cells.CONCLUSION: Sequence-specific siRNA targeting LBH is capable of suppressing LBH gene expression in 16HBE cells. Down-regulation of LBH expression in 16HBE cells may promote the progress of cell cycle, and up-regulation of cyclin E2 expression plays a role in the process of G1/S phase. 相似文献
17.
18.
以感病紫茉莉叶片为材料,采用RT-PCR方法克隆落葵皱缩花叶病毒(Basella rugose mosaic virus,Ba RMV)的外壳蛋白(coat protein,CP)基因,并构建p ET30a-Ba RMV-cp原核表达载体。将原核表达载体转化大肠杆菌[Rosetta(DE3)Plys S],成功诱导表达得到大小约为40.0 k D的与预期大小相符的融合蛋白(His-CP)。SDS-PAGE电泳完毕后用0.25 mol·L~(-1)的KCl溶液染色,将目的蛋白切胶纯化后免疫新西兰大白兔,制备抗血清。间接酶联免疫吸附法(ID-ELISA)检测该抗体的效价为1︰16 000,Western-blotting分析表明该抗体具有很强的特异性。对野外感病紫茉莉和实验室内接种发病本氏烟检测结果也表明,所制备的抗体具有良好的特异性,可用于大规模样品检测。 相似文献
19.
AIM: To study the effects of angiotensin Ⅳ (Ang Ⅳ) on growth of cultured neonatal rat cardiomyocytes. METHODS: Cardiomyocytes isolated from neonatal SD rat were cultured in vitro and divided into groups: control DMEM, 10-6 mol/L Ang Ⅳ, 10-5 mol/L Ang Ⅳ. The effects of Ang Ⅳ were assayed as follows: protein synthesis was determined by modified Bradford method, and cell cycle by flow cytometry. RESULTS: Ang Ⅳ promoted protein synthesis (P<0.05), when cardiomyocytes were incubated for 36 h and 48 h, Ang Ⅳ promoted protein synthesis more evidently (P<0.01). Ang Ⅳ accelerated the change of rat cardiomyocytes from G0/G1 to S phases and increased the numbers of cells of S and G2/M phases. Besides, 10-6 mol/L AngⅣ accelerated the change of that from G0/G1 to S phases more evidently. CONCLUSION: Ang Ⅳ directly increases protein synthesis in cardiomyocytes in a time-dependent manner. Ang Ⅳ influences growth of cardiomyocytes in a concentration-dependent fashion. 相似文献