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1.
[目的]探索食蟹猴—猪异种核移植胚胎的发育能力,为食蟹猴异种核移植胚胎干细胞的构建奠定基础.[方法]以食蟹猴和猪胎儿的耳部成纤维细胞为供体,猪MⅡ期去核卵母细胞为受体,构建异种核移植重构胚,并从核移植融合/激活方式、培养液两个方面进行优化.[结果]70枚食蟹猴—猪异种核移植胚胎中,有49枚分裂（70.0％）,与猪同种核移植胚胎的分裂率（76.6％）无显著差异;使用微卫星引物D15S823对食蟹猴—猪异种核移植胚胎进行遗传学鉴定,均能扩增获得D15S823条带（350 bp）;食蟹猴—猪异种核移植胚胎融合后1h的染色体早熟凝集率（24.2％）显著低于猪同种核移植胚胎（44.7％）和猪孤雌激活胚胎（100.0％）,通过使用无Ca2＋融合液能够显著提高染色体早熟凝集率（48.2％）;在PZM-3、HECM-10和HECM-10＋10％ FBS 3种培养液中,食蟹猴—猪异种核移植胚胎的分裂率无显著差异.[结论]食蟹猴体细胞核能够在猪MⅡ期去核卵母细胞胞质中发生核重塑,并发育到8-细胞阶段. 相似文献
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[目的]探索食蟹猴—猪异种核移植胚胎的发育能力,为食蟹猴异种核移植胚胎干细胞的构建奠定基础.[方法]以食蟹猴和猪胎儿的耳部成纤维细胞为供体,猪MⅡ期去核卵母细胞为受体,构建异种核移植重构胚,并从核移植融合/激活方式、培养液两个方面进行优化.[结果]70枚食蟹猴—猪异种核移植胚胎中,有49枚分裂(70.0%),与猪同种核移植胚胎的分裂率(76.6%)无显著差异;使用微卫星引物D15S823对食蟹猴—猪异种核移植胚胎进行遗传学鉴定,均能扩增获得D15S823条带(350 bp);食蟹猴—猪异种核移植胚胎融合后1h的染色体早熟凝集率(24.2%)显著低于猪同种核移植胚胎(44.7%)和猪孤雌激活胚胎(100.0%),通过使用无Ca2+融合液能够显著提高染色体早熟凝集率(48.2%);在PZM-3、HECM-10和HECM-10+10% FBS 3种培养液中,食蟹猴—猪异种核移植胚胎的分裂率无显著差异.[结论]食蟹猴体细胞核能够在猪MⅡ期去核卵母细胞胞质中发生核重塑,并发育到8-细胞阶段. 相似文献
3.
广西巴马小型猪体细胞核移植体系的建立 总被引：1，自引：0，他引：1
通过建立广西巴马小型猪体细胞核移植培养体系,为后续转基因克隆猪生产及其相关研究提供最佳条件.试验探讨了盲吸法对猪卵母细胞的去核效率;利用分离到的广西巴马小型猪附睾成纤维细胞作供体构建重构胚胎,探讨6-二甲氨基嘌呤(6-DMAP)和细胞松弛素B(CB)对其后续胚胎发育的影响;利用分离到的广西巴马小型猪腹部成纤维作供体,探讨其对核移植胚胎的发育效率.结果表明:猪卵母细胞盲吸法去核的效率为73.75％;广西巴马小型猪附睾成纤维细胞作供体构建重构胚胎,6-DMAP和CB对其后续胚胎发育没有显著差异(分裂率和囊胚率分别为:89.89％and 6.74％vs.82.95％and 5.68％,P＞0.05);腹部成纤维细胞作供体,重构胚胎的融合率、分裂率和囊胚率分别为55.40％、67.53％和6.49％.采用盲吸法可以对体外成熟猪卵母细胞成功去核,广西巴马小型猪腹部成纤维细胞和附睾成纤维细胞均可作供体成功构建体细胞核移植胚胎,并可以发育到囊胚. 相似文献
4.
盘羊供体细胞对异种核移植效率的影响 总被引：4，自引：1，他引：3
【目的】利用核移植技术生产异种重构胚,研究供体细胞对异种核移植效率的影响。【方法】以新疆盘羊和绵羊耳皮肤组织建立成纤维细胞系,进行细胞遗传学分析;以来自不同个体、不同代次、不同汇合度和不同保存方式的盘羊成纤维细胞为核供体,当地绵羊卵母细胞为受体,进行异种重构胚的构建。【结果】来自3只盘羊耳皮肤成纤维细胞的异种重构胚的卵裂率与囊胚率均无显著差异;采用10代以内的细胞作为核供体,细胞代次不会影响重构胚的发育率;生长到70％～80％汇合的供体细胞重构胚的囊胚率显著高于刚完全汇合组和汇合2～4 d组;将供体细胞4℃保存2 d,虽降低了卵裂率,但囊胚率没有受到显著影响;盘羊的染色体数目为2 n=56,核型式为4（M）+50（T）,XY（T,M）;绵羊的染色体数目为2 n=54,核型式为6（M）+46（T）,XY（T,M）。【结论】利用本试验中的3只盘羊耳成纤维细胞,培养到10代以内、70％～80％汇合后用于构建异种重构胚,能得到较高的早期胚胎发育率。 相似文献
5.
为研究5-aza—dC和TSA提高核移植胚胎体外发育能力的作用是否有供体细胞特异性,实验选择皮肤成纤维细胞、胎儿成纤维细胞和卵丘颗粒细胞作为核供体细胞进行核移植,联合使用20nM（72h）5-aza—dc和50nM（12h）TSA处理供体细胞和重构胚,比较5-ttZa—dC＋TSA对不同供体细胞来源核移植胚胎体外发育的影响。实验结果表明,经5-azaLdC＋TSA处理后,极显著提高了3种供体细胞来源核移植胚胎的体外囊胚发育率（P〈0．01）。虽然胎儿成纤维细胞和卵丘颗粒细胞得到的发育率稍高于皮肤成纤维细胞组,但各对照组之间以及各处理组之间的体外发育率没有明显差异,5-aza—dC和TSA对核移植胚胎体外发育的影响没有供体细胞特异性。 相似文献
6.
为给体细胞核移植提供更多的G0/G1期供体细胞以提高克隆的成功率,本试验采用不同的接触抑制和血清饥饿时间及含羞草酸(mimosine)不同浓度和时间3种方法对麋鹿皮肤成纤维细胞进行同期化处理,然后利用流式细胞仪分析细胞周期.结果表明,接触抑制24 h G0/G1期比例可达91.95%;血清饥饿24 h有89.42%的细胞处于G0/G1期,当处理时间超过144 h细胞凋亡和异常聚集的比例会增加;适宜浓度(0.4 mmol ·L-1)的含羞草酸处理24 h能使麋鹿成纤维细胞同步化至G0/G1期,但易引起细胞损伤. 相似文献
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为给体细胞核移植提供更多的G0/G1期供体细胞以提高克隆的成功率,本试验采用不同的接触抑制和血清饥饿时间及含羞草酸(mimosine)不同浓度和时间3种方法对麋鹿皮肤成纤维细胞进行同期化处理,然后利用流式细胞仪分析细胞周期.结果表明,接触抑制24 h G0/G1期比例可达91.95%;血清饥饿24 h有89.42%的细胞处于G0/G1期,当处理时间超过144 h细胞凋亡和异常聚集的比例会增加;适宜浓度(0.4 mmol ·L-1)的含羞草酸处理24 h能使麋鹿成纤维细胞同步化至G0/G1期,但易引起细胞损伤. 相似文献
8.
[目的]为生产转基因克隆猪奠定基础。[方法]以反转录病毒转染的带有红色荧光蛋白（RFP）基因的猪胎儿成纤维细胞作为核移植的核供体,利用体细胞克隆技术研究红色荧光蛋白克隆胚胎体外发育情况。[结果]RFP转基因细胞的融合率为83.87%,与未转基因细胞（80.56%）相比无显著差异（P〉0.05）;RFP转基因体细胞重构胚体外囊胚率为8.67%,与未转基因细胞组（6.56%）相比无显差异著（P〉0.05）;RFP转基因体细胞重构胚移植于15头受体后,尚无受孕个体。[结论]利用转红色荧光蛋白基因的细胞为供体细胞,能够成功克隆出转基因胚胎,并获得转基因囊胚。 相似文献
9.
以牛外耳皮肤成纤维细胞为核供体细胞,比较了不同同步化诱导方式(血清饥饿法与接触抑制法)、供体细胞冷冻与否、供体动物性别与年龄等因素对体细胞核移植效率的影响。结果表明,接触抑制法处理的供体细胞核移植胚囊胚率显著高于饥饿法(P<0.05);未冷冻的供体细胞核移植胚囊胚率显著高于冷冻供体细胞(P<0.05);成年母牛供体的囊胚率显著高于成年公牛(P<0.05);不同年龄供体细胞的核移植胚囊胚率差异不显著(P>0.05)。试验表明,以接触抑制法诱导未冷冻成年母牛外耳皮肤成纤维细胞为核供体,有利于核移植胚囊胚的发育。 相似文献
10.
为研究不同组织来源的供核细胞对猪体细胞核移植胚胎发育能力的影响,分别采用颗粒细胞、耳成纤维细胞和尾成纤维细胞作为供核细胞,移入体外成熟的猪去核卵母细胞中形成重构胚,培养后对比其卵裂率和囊胚率。结果表明：以耳成纤维细胞作为供核细胞的重构胚的囊胚率最高,为17．8％,显著高于颗粒细胞（11．4％）（P〈0．05）。在卵裂率方面,两者无显著差别,分别为65．6％和61．9Voo（P〉o．05）。猪尾尖成纤维细胞的发育能力最差,卵裂率仅为20．2％且未获得囊胚,与其它两组差异显著（P〈O．05）。因此,耳组织来源的成纤维细胞作为供核细胞组织来源丰富且细胞易于传代和保存,以此为供核细胞的重构胚发育能力强,适合作为供核细胞。 相似文献
11.
目的观察Pokemon敲减对结肠癌Lovo细胞周期、迁移和侵袭能力的影响。方法转染shRNA质粒构建Pokemon敲减的稳定细胞株Lovo-KD和阴性对照细胞株Lovo-NC,用荧光定量PCR检测Pokemon基因敲减效率,流式细胞术检测细胞周期变化,Transwell实验观察细胞迁移和侵袭能力。结果与Lovo-NC细胞比较,Lovo-KD细胞Pokemon mRNA水平下降65.0%（P〈0.01）,G1期细胞比例升高[（56.7±0.8）%vs（26.7±1.6）%,P〈0.01],迁移细胞数[（8±4）vs（189±19）个/视野,P〈0.01]和侵袭细胞数[（6±3）vs（183±13）个/视野,P〈0.01]减少。结论 Pokemon基因敲减可将Lovo细胞阻滞于G1期,使细胞迁移和侵袭能力显著下降。 相似文献
12.
福建三明地区烤烟生长期气候特征分析 总被引：9，自引：2，他引：7
[目的]分析三明地区烟草生长期间温度、降雨和日照等气候特征及其对烟草生产的影响。[方法]根据不同项目的分析要求,对三明市各县的累（历）年气象观测结果进行统计计算。[结果]三明地区各县1～7月的月平均气温基本上为17～19℃。三明地区各县的月平均降水量为150～210mm,且从1月开始逐渐增加,至6月达到最大,总降水量在1000～1500mm之间,北部降水量多于南部。三明地区各县的空气平均相对湿度依次是：永安（77．5％）〈大田（80．1％）〈沙县（81．3％）〈宁化（82．0％）〈将乐（82．1％）=明溪（82．1％）〈建宁（83．1％）=尤溪（83．1％）〈清流（83．4％）〈泰宁（85．9％）。三明地区1～7月的月平均日照时数为107．4～131．2h,日照总时数为751．5～918．4h。[结论]三明地区的气候条件比较适宜于烤烟生产,三明地区可作为CB-1烟叶的主要生产地。 相似文献
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【目的】探讨分析兔胚胎移植的影响因素,为提高兔胚胎移植效率及生产转基因兔奠定基础。【方法】采集获得的交配胚胎经体外培养后,按单只受体移植胚胎数、受体类型（经产母兔与青年母兔）、受体同期发情方式随机分组,对比观察胚胎移植后受体母兔的妊娠情况。【结果】单只受体兔每次移植10～20枚和20～30枚胚胎获得的妊娠率分别为23．1％和20．0％,二者差异不显著（P〉0．05）;采用经产母兔为受体可获得显著高于青年母兔的妊娠率（27．8％vs13．3％,P〈0．05）;以自然同期发情为受体母兔胚胎移植后获得的妊娠率显著高于诱导同期发情的受体母兔（30．7％vs10．0％,P〈0．05）。【结论】兔胚胎移植时选择自然发情的经产母兔作为受体能获得较好的胚胎移植效果,单只受体移植胚胎数以控制在10-30枚为宜。 相似文献
14.
[目的]研究牙鲆胚胎发育过程中孵化腺细胞的分化规律。[方法]采用常规固定、切片方法,利用高碘酸-雪夫染色反应（PAS）对各个发育时期的牙鲆胚胎和孵化后的仔鱼切片进行染色。[结果]典型的孵化腺细胞（阳性细胞）出现于孵化前15h,位于胚胎的前中部,孵化腺细胞的数量和体积均在孵化前达到最大值,且均位于胚胎头部和背部表面。一旦孵化结束,孵化腺细胞的数量和体积均急剧下降,并于孵化后13h消化。[结论]牙鲆胚胎中孵化腺细胞的变化规律与其发育进程密切相关。 相似文献
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[目的]建立茄子愈伤组织悬浮细胞培养体系。[方法]以三月茄为试验材料,利用正交设计筛选适合茄子愈伤组织诱导、继代保存以及悬浮培养的培养基并测定悬浮培养过程中细胞生长状况。[结果]适宜茄子愈伤组织诱导的培养基为MS＋6-BA（0.2 mg/L）＋NAA（0.2 mg/L）;适宜继代保存的培养基为MS＋6-BA（0.2 mg/L）＋NAA（0.2 mg/L）＋KT（0.1 mg/L）;适宜悬浮细胞培养的培养基为MS＋NAA（0.4mg/L）＋6-BA（0.2 mg/L）液体培养基。茄子悬浮培养细胞生长呈S形曲线,其中前3 d为起始期,3~7 d处于对数生长期,7~8 d为静止期;8~11 d为衰退期。悬浮细胞密度随着培养时间的延长增长,在培养第7天达到最高值,约3.8×105个/ml.随后细胞数量迅速减少。起始期细胞活力最高。茄子悬浮细胞在MS＋NAA（0.4 mg/L）＋6-BA（0.2 mg/L）液体培养基上生长良好,其分裂指数最大达4.1%。[结论]茄子悬浮细胞培养体系为茄子生物技术研究提供了一条途径,可应用该体系进行遗传转化等方面的研究。 相似文献
16.
研究了体细胞制备过程中细胞培养时间、血清饥饿浓度和饥饿对间对体细胞周期同步化的影响.体细胞为牛卵巢颗粒细胞,细胞用碘化丙啶(PI)染色法,用流式细胞仪检测细胞周期.细胞传代培养至第2、10和25代,在0.5％和0.05％的血清饥饿浓度下诱导处理2、3、4和5d.试验结果表明,第2、10和25代的细胞在G0/G1期的比例没有差异(P＞0.05).培养液中添加0.5％ FCS和0.05％ FCS较对照组(10％FCS)提高了细胞G0/G1期的比例(P＜0.05),0.5％FCS和0.05％ FCS试验组获得了相近的细胞G0/G1期比例(P＞0.05).血清饥饿至第5天的细胞较第2天的细胞有高的G0/G1期的比例(P＜0.05).结果显示,体外培养至不同代的牛卵巢颗粒细胞对G0/G1期的比例没有影响,血清饥饿和延长血清饥饿的时间能够有效诱导体细胞进入G0/G1期. 相似文献
17.
复合螺旋藻多糖对人宫颈癌HeLa细胞的抑制作用 总被引：1，自引：0，他引：1
[目的]探讨复合螺旋藻多糖对人宫颈癌HeLa细胞增殖的影响。[方法]将螺旋藻多糖（PSP）与银杏叶有效成分（GBE）按不同剂量、3种比例（1：1、1：2和2：1）复合,用MTT法研究复合螺旋藻多糖对人宫颈癌HeLa细胞的抑制作用。[结果]PSP与GBE按3种比例复合使用组对人宫颈癌HeLa细胞的抑制作用均明显好于相对应剂量的单一成分组,且同一配比组的抑瘤率与剂量呈正相关。PSP与GBE联合使用能对抑制人宫颈癌HeLa细胞产生协同增效作用。其中PSP与GBE按2：1比例复合的作用最突出,在高、中和低剂量时抑瘤率分别为67．92％、58．93％和34．86％（P〈0．01）。[结论]该研究为人宫颈癌的治疗奠定了基础。 相似文献
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奶牛卵母细胞体外受精和胚胎培养研究 总被引：5，自引：0，他引：5
[目的]探讨适合于奶牛体外胚胎生产的最佳条件。[方法]以奶牛卵母细胞为试验材料,研究不同温度、运送时间对奶牛卵母细胞成熟的影响,并比较在相同培养条件下孤雌激活和体外受精对奶牛卵母细胞胚胎发育的影响。[结果]卵巢在37—42℃运输后的成熟率（11．3％）明显低于20—30℃、30-37℃的成熟率（79．3％,85．1％）,20～30℃、30～37℃组间差异不显著;运送时间6h后的卵母细胞成熟率（53．2％）明显低于4h内、4—6h的成熟率（85．6％,77．8％）,4h内、4～6h差异不显著;孤雌激活和体外受精胚胎在相同条件下的卵裂率（72．41％,68．18％）、8细胞率（45．24％,47．22％）、囊胚率（25．60％,18．89％）差异均不显著。[结论]卵巢在30℃左右4h内运回实验室最适宜,而孤雌激活和体外受精胚胎在相同条件下发育率差异不显著。 相似文献