肠致病性大肠杆菌和魏氏梭菌PCR诊断方法的建立     

杨少华  王洪梅  高运东  柴同杰  仲跻峰 《家畜生态》2006,(2)

本研究建立了一种同时检测大肠杆菌和魏氏梭菌的二重PCR方法,根据兔肠致病性大肠杆菌(REPEC)的eae毒力基因和魏氏梭菌的α-toxin毒力基因的基因文库,设计了两对分别与eae基因和α-toxin基因互补的引物,用这两对引物对同一样品中的REPEC和魏氏梭菌模板进行二重PCR扩增。结果均得到了两条特异性大小与试验设计相符的833bp(REPEC)和324bp(魏氏梭菌)的扩增条带,而对其它3种病原菌的PCR扩增结果均为阴性;敏感性试验结果表明,该二重PCR技术能检出10cfu的REPEC,10cfu的魏氏梭菌。  相似文献   

利用多重PCR检测兔肠致病性大肠杆菌和魏氏梭菌的毒力基因   总被引：3，自引：0，他引：3  

杨少华  柴同杰 《中国预防兽医学报》2006,28(2):228-231

我们建立了一种同时检测兔肠致病性大肠杆菌和魏氏梭菌毒力基因的二重PCR方法。在一次PCR反应中同时扩增兔肠致病性大肠杆菌（REPEC）的eae毒力基因和魏氏梭菌的α-toxin毒力基因，扩增产物经电泳，出现与阳性对照细菌条带大小一致的条带即判断为该标本阳性，本试验还对79份腹泻兔粪便或肠内容物样品进行了检测，结果35.4％（28／79）检出eae＋的REPEC，而魏氏梭茵的检出率为。6．3％。敏感性试验结果表明，该二重PCR能检出10 CFU的REPEC，10 CFU的魏氏梭菌，具有简便、快速、特异、经济等特点，宜于临床应用。  相似文献   

魏氏梭菌α毒素核酸探针的制备和应用     

田颖  柴同杰  陈本龙 《家畜生态学报》2006,27(6):102-104

根据GeneBank上发表的A型魏氏梭菌α毒素基因序列，设计合成了一对特异性引物，通过PCR的方法，扩增出了大小为470bp的α毒素基因的部分片段。应用地高辛标记法来标记该片段，制备了α毒素基因探针，该探针只与魏氏梭菌DNA发生阳性反应，与其它多种细菌DNA不发生反应；该探针在1：1000的工作浓度下，能检出1-5pg／uL的魏氏梭菌基因组DNA。应用该探针对33株魏氏梭菌进行核酸杂交（Dot-Blotting）检测，结果表明该探针具有良好的特异性和灵敏性，可用于对魏氏梭菌的诊断检测以及流行病学调查。  相似文献   

魏氏梭菌α-毒素基因探针的制备及应用     

王开功  周碧君  王琛  方英  李海阔  文明 《畜牧兽医学报》2004,35(2):198-201

以A型魏氏梭菌贵州分离株为材料,提取染色体DNA，经PCR扩增和酚：氯仿抽提回收得到242bp的α-毒素基因部分片段，用地高辛标记制备了α-毒素基因探针。该探针不与埃希氏大肠杆菌、都柏林沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、猪丹毒杆菌、蜡样芽胞杆菌及多杀性巴氏杆菌等细菌的DNA样品发生反应,只与魏氏梭菌DNA样品呈阳性反应，能检出300pg的DNA样品；应用探针对40株魏氏梭菌进行了Dot-Blotting检测,结果与生化试验鉴定的符合率达到90％，表明该探针具有较高的特异性和灵敏度，可应用于临床上魏氏梭菌的检测。  相似文献   

D型产气荚膜梭菌主要毒素基因的PCR检测     

冶贵生  康耀鹏  张龙刚 《黑龙江畜牧兽医》2012,(3):107-108

为了研究产气荚膜梭菌主要毒素基因,试验采用生物软件以NCBI上登录的产气荚膜梭菌α毒素、ε毒素作为参考,设计扩增D型产气荚膜梭菌α毒素与ε毒素的特异性引物,预期基因片段大小分别为1 110 bp、888 bp,进行PCR扩增。结果表明:设计的引物可以良好地扩增α毒素基因与ε毒素基因,基因片段大小与预期一致。  相似文献   

奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌和大肠杆菌二重PCR检测方法的建立     

聂培  易驰喆  贺婷  陈亚明  刘平  侯小露  杜玉兰  何宝祥 《广西畜牧兽医》2013,(1):11-15

金黄色葡萄球菌和大肠杆菌是引起奶牛乳房炎的主要病原菌。选取金黄色葡萄球菌的Nuc基因和大肠杆菌16S-23SrRNA基因作为扩增靶基因序列,设计两对特异性引物。通过正交试验优化反应条件建立二重PCR检测体系,优化结果表明二重PCR扩增出两条特异性条带,大小与实验设计的249bp(金黄色葡萄球菌)和375bp(大肠杆菌)相符,而对其它奶牛乳房炎主要病原菌的PCR扩增结果均为阴性;敏感性测定结果表明,该二重PCR技术能同时检出14.6pg的金黄色葡萄球菌模板和26.0pg的大肠杆菌模板。使用该二重PCR检测29份临床奶样,发现其中17份携带相关基因,并分离得到相关致病菌。  相似文献   

羊魏氏梭菌PCR方法的建立及初步应用     

余波  冉懋韬  谭诗文  徐景峨  魏赐开  艾玉萍 《中国畜牧兽医》2011,38(11):106-108

根据羊魏氏梭菌A、B、C、D、E型共有的α毒素基因,设计了1对引物,通过对PCR反应条件进行优化,建立了羊魏氏梭菌PCR检测方法。该方法扩增条带大小为255 bp,最低核酸检测量A型为0.39 ng/L、B型为0.62 ng/L、C型为0.52 ng/L、D型为0.87 ng/L、E型为0.92 ng/L,而对羊大肠杆菌、羊链球菌、金黄色葡萄球菌、羊多杀性巴氏杆菌的扩增结果均为阴性。应用该PCR方法对54份临床样本进行检测,PCR检测结果高于细菌学和生化检测结果。结果表明,该PCR方法具有很好的特异性和敏感性,可用于临床羊魏氏梭菌病的早期快速诊断。  相似文献   

断奶幼兔腹泻肠致病性大肠杆菌LEE毒力岛的分子检测   总被引：8，自引：0，他引：8  

杨少华  柴同杰 《中国兽医杂志》2004,40(10):6-8

为了了解 L EE毒力岛在山东省兔场的流行情况 ,自 2 0 0 0年 2月到 2 0 0 3年 6月从潍坊、曲阜、恒台、烟台、莱芜、泰安等地兔场的断奶前后腹泻和健康兔肠内容物或粪便中分离的大肠埃希氏菌 ,用 PCR法检测 L EE毒力岛上的 eae A基因。结果发现 ,在 2 0～ 30日龄、30～ 5 5日龄、5 5～ 80日龄的腹泻幼兔中 ,携带 L EE毒力岛的大肠埃希氏菌检出率分别为 0 (0 / 5 )、72 .7%(2 4 / 33)、2 3.5 % (4 / 17) ,而在相同日龄的健康幼兔中检出率为 0 (0 / 2 4 )。从其他肠道致病菌的检出情况来看 ,沙门氏菌和魏氏梭菌检出率极低 ,沙门氏菌在腹泻兔为 9% ,健康兔为 4 .2 % ,魏氏梭菌在健康兔和腹泻兔均为 0。生化试验表明 eae A阳性的大肠杆菌为乳糖发酵试验弱阳性的菌株。结论 eae A阳性的肠致病性大肠杆菌 (EPEC)应是导致上述兔场断奶后幼兔发生腹泻症的主要细菌性病原 ;L EE毒力岛的检测能够作为兔肠致病性大肠杆菌 (REPEC)的诊断和流行分子病学调查的主要手段  相似文献   

魏氏梭菌α毒素核酸探针的制备和应用     

田颖  柴同杰  陈本龙 《家畜生态》2006,(6)

根据GeneBank上发表的A型魏氏梭菌α毒素基因序列,设计合成了一对特异性引物,通过PCR的方法,扩增出了大小为470 bp的α毒素基因的部分片段。应用地高辛标记法来标记该片段,制备了α毒素基因探针,该探针只与魏氏梭菌DNA发生阳性反应,与其它多种细菌DNA不发生反应;该探针在1∶1000的工作浓度下,能检出1~5pg/uL的魏氏梭菌基因组DNA。应用该探针对33株魏氏梭菌进行核酸杂交(Dot-Blotting)检测,结果表明该探针具有良好的特异性和灵敏性,可用于对魏氏梭菌的诊断检测以及流行病学调查。  相似文献   

兔支气管败血波氏杆菌PCR快速检测方法的建立及应用     

刘燕  章春桃  韦强  肖琛闻  鲍国连  季权安 《中国养兔杂志》2012,(1):8-10

参考GeneBank中支气管败血波氏杆菌fimN基因序列设计了一对特异性引物,扩增出大小为387bp的目的基因片段,优化PCR反应条件,建立了兔支气管败血波氏杆菌的PCR快速检测方法。特异性和敏感性试验显示,该方法与大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、魏氏梭菌和巴氏杆菌均无交叉反应,且检出最低浓度为10pg,可用于临床检测。  相似文献