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设汁两对引物，PCR扩增香蕉乙烯受体基因cDNA序列自AUG启始密码子起长538bp区段的正向(记为5‘I)、反向(记为AI’)DNA区段。构建含该正、反向互补重复序列DNA片段的中间载体，经测序证实连接正确后。克隆到植物表达载体pCAMBIA-1301中的GUs基因位置并经双酶切证实。在所得表达载体pCAMBIA-1301-S5’I-AI’中，该插入正反互补重复片段处于35S启动子之后，由此转录的mRNA因两端序列反向互补而形成发夹式RNA，因此可应用于RNA干扰研究。同时，文中对构建含正、反向重复序列插入片段植物表达载体过程中出现的插入片段链内退火引起连接困难等问题进行了分析讨论。 相似文献
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以PMI基因替换植物表达载体pCAMBIA1301中的hpt基因以及pBI121中的GUS基因，构建了以PMI基因为选择标记基因的植物表达载体pCAMBIA1301PMI和pBIPMI，并导入根癌农杆菌EHA105中。研究了两种表达载体对雪柑上胚轴的转化，在培养基附加25 g•L-1甘露糖和5 g•L-1蔗糖为碳源的选择压下，pCAMBIA1301PMI的转化率为27.7％，pBIPMI的转化率为12.7％，对再生植株进行了氯酚红检测和PCR检测，建立了以PMI/甘露糖为选择系统的雪柑转基因体系。 相似文献
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埃及伊蚊TMOF同源基因表达载体构建及烟草转化 总被引：2，自引：2，他引：0
胰蛋白酶调节抑制因子（Trypsin-modulating oostatic factor, TMOF）可以有效地抑制昆虫中肠胰蛋白酶的活性。本文为了研究埃及伊蚊TMOF同源物基因在转基因植物广谱抗虫中的作用,利用人工合成的Aea-TMOF同源物基因,以改造过的pCAMBIA1301质粒为基本载体,构建了由组成型CaMV35S启动子驱动Aea-TMOF基因的植物表达载体pCAMBIA1301+ Aea-TMOF。然后,采用冻融法转入农杆菌LBA4404菌株,通过叶盘法对烟草进行了遗传转化。经PCR和GUS染色检测,Aea-TMOF同源物基因已整合到烟草基因组中。 相似文献
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利用农杆菌侵染法获得抗软腐病转BrWRKY33基因大白菜,首先要构建植物表达载体。本实验根据BrWRKY33基因的序列及pROK2表达载体的酶切位点设计引物(FN/RN),获得BrWRKY33基因,然后将该基因连接到克隆载体pGEM-TEasy,重新构建了克隆载体T-WRKY。经测序及酶切验证,选取PCR反应中错配率最低的产物,构建了表达载体pROK2-WRKY,并将该表达载体转入到根癌农杆菌EHA105中,并对其转化子进行了鉴定。结果表明,PCR扩增获得目的基因BrWRKY33全长约1443bp,PCR及酶切结果鉴定表明克隆载体T-WRKY已经重新构建成功。表达载体的PCR及BamHⅠ和KpnⅠ双酶切鉴定表明有4个重组子表现阳性,表明目的基因已经插入到pROK2表达载体,表达载体构建成功。PCR鉴定表明表达载体pROK2-WRKY已经转入根癌农杆菌EHA105中。本实验结果将为进一步研究大白菜抗软腐病基因的转化奠定基础。 相似文献
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水稻OsHsfA7基因RNA干扰载体的构建及遗传转化研究 总被引：1，自引：1，他引：0
为研究水稻热激转录因子基因OsHsfA7的功能及其在水稻耐热育种方面的应用价值,本文通过构建水稻OsHsfA7基因RNA干扰载体获得功能抑制变异材料,从反向遗传学进行基因的功能分析。扩增OsHsfA7c DNA3'编码区470bp片段,分别以反向和正向插入到中间载体pBSK连接的GUS片段两侧,然后将得到的RNA干扰片段克隆到改造的植物表达载体p1301M,构建以CaMV35S启动子驱动表达的水稻OsHsfA7基因RNA干扰表达载体。将该载体转入根癌农杆菌EHA105后,采用农杆菌介导法进行了水稻日本晴品种的遗传转化,获得了23株具有潮霉素抗性的转基因植株,其中12株经GUS染色呈蓝色并且DNA检测10株已插入目的片段,RNA检测其中6株OsHsfA7基因的表达水平下降甚至未检出。结果说明本研究构建的OsHsfA7基因RNA干扰载体对该基因表达沉默是有效的。 相似文献
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人胰高血糖素样肽1（GLP1）是一种短肽激素,对Ⅱ型糖尿病具有很好的疗效。本研究在设计合成GLP1基因并构建植物表达载体的基础上,通过农杆菌介导将GLP1基因导入番茄基因组中,经过PCR扩增和Southern Blot分析,证实GLP1基因已整合进入9个株系的番茄基因组中。Western Blot检测表明,其中4个株系转基因番茄的叶片能够检测到hGLP1融合蛋白的表达。通过Ni—NTA亲和层析分离纯化转基因番茄表达的hGLP1融合蛋白,动物实验表明该融合蛋白具有显著的降血糖生物活性。本研究结果将为转基因番茄作为生物反应器表达药用蛋白提供重要的理论和技术支持,并将为培育具有糖尿病治疗功能的番茄新品种奠定基础。 相似文献
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水稻钙依赖型蛋白激酶（CDPKs）是一个响应逆境胁迫并在植物发育过程中起重要作用的蛋白激酶。我们采用RT—PCR从水稻品种日本晴（Oryza sativa L．CV．Nipponbare）中克隆了OsCPK9基因靠近翻译起始位点下游的一段280bp的特异基因片段。将该片段以正、反向分别连接到来源于小麦TAK14基因的548bp内含子片段（NCBIaccessionnumber：AF325198）两侧,从而获得pSK．OsCPK9-RNAi的中间表达载体。进而将其克隆到植物双元表达载体pCAMBIA1301中,构建shRNAi表达载体pCAMBIA．05CPK9一RNAi。经酶切和测序鉴定正确后,利用农杆菌介导转化水稻。通过抗性筛选和标记基因hyg和gus进行PCR鉴定,筛选到20株转基因水稻植株,实时荧光定量PCR分析显示,部分转基因植株OsCPK9的表达受到显著抑制。 相似文献
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以大肠杆菌(Escherichia coli)6-磷酸甘露糖异构酶(6-phosphomannose isomerase,PMI)基因替换植物表达载体pCAMBIA1301中的hpt基因以及pBI121中的gus基因,构建了以PMI基因为选择标记基因的植物表达载体pCAMBIA1301PMI和pBIPMI,并导人根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)EHA105中.研究了两种表达载体对雪柑(Citrus sinensis L.Osbeck)上胚轴的转化,在培养基附加25 g/L甘露糖和5 g/L蔗糖为碳源的选择压力下,pCAMBIA1301PMI的转化率为27.7%,pBIPMI转化率为12.7%,对再生植株用氯酚红和PCR检测证实了PMI基因的导入,建立了以PMI/甘露糖为选择系统的雪柑转基因体系. 相似文献
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为了探究NAC转录因子在番茄生物胁迫响应中的功能,本试验通过逆转录PCR(RT-PCR)技术从番茄中克隆得到一个NAC转录因子基因SlNAP2,其cDNA全长（ORT）1 227 bp,包含142 bp的5′非编码区和257 bp的3′非编码区以及一个长度为828 bp编码275个氨基酸的开放阅读框（ORF）,含1个NAM结构域。同源序列比对及系统进化树分析结果表明,SlNAP2与潘那利番茄SpNAP2亲缘关系最近,并与其他茄科NAC聚为一组,而与菊科、葫芦科、葡萄科、大戟科、杨柳科NAC的亲缘关系较远,在系统发育树上处于不同的分支。生物信息学分析结果显示,SlNAP2相对分子质量为31 877.23 Da,理论等电点pI为8.56,该基因编码的蛋白不存在跨膜结构。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)结果表明,SlNAP2基因表达具有组织特异性,在番茄茎中的表达量最高,并参与了番茄对青枯菌胁迫及水杨酸和茉莉酸刺激的响应。利用病毒诱导的基因沉默（VIGS）技术发现,沉默SlNAP2后降低了植株对青枯病的抗性,表明SlNAP2在番茄抗青枯病过程中起正调控作用。本研究为深入探讨SlNAP2基... 相似文献
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黄土高原泾河流域梯田对河道径流及生态基流影响 总被引：1，自引：1，他引：1
[目的]定量分析泾河流域梯田建设对河道径流、生态基流的影响程度,为流域梯田建设提供一定理论支撑。[方法]采用合作开发的嵌入梯田模块的SWAT(soil and water assessment tool)模型模拟河道径流量。[结果]嵌入梯田模块的SWAT模型在模拟河道径流时可满足模型模拟精度的要求;随着梯田面积增加,河道年径流量减少,生态基流保障程度提高,年、月生态基流不满足天数降低;梯田的年平均减流量为4.25×104 m3/(km2·a);梯田具有蓄洪补枯作用,且对丰水期的调控效果高于枯水期,对河道生态基流的影响为:枯水期平水期丰水期。[结论]嵌入梯田模块的SWAT模型在该流域具有较好的适用性,提高流域内梯田面积是滞洪补枯的有效手段之一,在一定程度上保障了河道生态基流。 相似文献
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Yang L Zhang H Guo J Pan L Zhang D 《Journal of agricultural and food chemistry》2008,56(10):3438-3443
One tomato ( Lycopersicon esculentum) gene, LAT52, has been proved to be a suitable endogenous reference gene for genetically modified (GM) tomato detection in a previous study. Herein are reported the results of a collaborative ring trial for international validation of the LAT52 gene as endogenous reference gene and its analytical systems; 14 GMO detection laboratories from 8 countries were invited, and results were finally received from 13. These data confirmed the species specificity by testing 10 plant genomic DNAs, less allelic variation and stable single copy number of the LAT52 gene, among 12 different tomato cultivars. Furthermore, the limit of detection of LAT52 qualitative PCR was proved to be 0.1%, which corresponded to 11 copies of haploid tomato genomic DNA, and the limit of quantification for the quantitative PCR system was about 10 copies of haploid tomato genomic DNA with acceptable PCR efficiency and linearity. Additionally, the bias between the test and true values of 8 blind samples ranged from 1.94 to 10.64%. All of these validated results indicated that the LAT52 gene is suitable for use as an endogenous reference gene for the identification and quantification of GM tomato and its derivates. 相似文献
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OBJECTIVE: To investigate factors influencing the practices of partial breast-feeding (PBF) and exclusive breast-feeding (EBF). DESIGN: A national, cross-sectional survey was conducted among married women aged 15-49 years from May to August 2003. SETTING: South Korea. SUBJECTS: A total of 865 mothers answered questions regarding the feeding practices of their youngest baby, born between January 2001 and May 2003. RESULTS: The initiation rates of PBF and EBF were 81% and 63%, respectively. However, the median durations of PBF and EBF were very short: 12 and 8 weeks, respectively. According to stepwise logistic and Cox regression analyses, the more prenatal care women received, the more likely they were to initiate PBF and EBF but the less likely to continue EBF. Delivery by Caesarean section decreased the initiation of PBF and EBF. The mother's education level and employment status before marriage, the amount of prenatal care, delivery method and baby's status at birth affected breast-feeding initiation, whereas the amount of prenatal care influenced breast-feeding duration. CONCLUSION: To promote breast-feeding, education and campaigning on the importance of continued breast-feeding should be provided to the general public, particularly to health workers in maternity units. 相似文献
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胨冻样芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus YNUCC0001)絮凝剂生产、絮凝特性及其系统发育学分析 总被引：3，自引：0，他引：3
对BacillusmucilaginosusYNUCC000116SrDNA的1481bp片段与GenBank中最相似的16个分类单位进行了比较。UPGMA,NJ,ME和MP方法构建的系统发育树显示B.mucilaginosusYNUCC0001与B.mucilaginosusHSCC1605T、B.mucilaginosus1480D及Paenibacillussp.NBT形成一个单系群分支。在50L全自动发酵罐中30℃发酵52h后,菌株YNUCC0001产生的胞外生物多聚絮凝剂(EBF)达到最大产率(粘度:3420C.P.)。在pH4.0、用量为0.25mlL-1的条件下,这种EBF对高岭土悬浊液的絮凝活性最大(99.8%);121℃高压灭菌60min后絮凝活性维持在98.6%。Hg2+,Ca2+,Mg2+,K+,Zn2+对其絮凝活性有促进作用,而Fe3+、Al3+、EDTA和Cu2+则有强烈抑制。 相似文献
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Yang L Pan A Jia J Ding J Chen J Cheng H Zhang C Zhang D 《Journal of agricultural and food chemistry》2005,53(2):183-190
Toward the development of reliable qualitative and quantitative Polymerase Chain Reaction (PCR) detection methods of transgenic tomatoes, one tomato (Lycopersicon esculentum) species specific gene, LAT52, was selected and validated as suitable for using as an endogenous reference gene in transgenic tomato PCR detection. Both qualitative and quantitative PCR methods were assayed with 16 different tomato varieties, and identical amplified products or fluorescent signals were obtained with all of them. No amplified products and fluorescent signals were observed when DNA samples from 20 different plants such as soybean, maize, rapeseed, rice, and Arabidopsis thaliana were used as templates. These results demonstrated that the amplified LAT52 DNA sequence was specific for tomato. Furthermore, results of Southern blot showed that the LAT52 gene was a single-copy gene in the different tested tomato cultivars. In qualitative and quantitative PCR analysis, the detection sensitivities were 0.05 and 0.005 ng of tomato genomic DNA, respectively. In addition, two real-time assays employing this gene as an endogenous reference gene were established, one for the quantification of processed food samples derived from nontransgenic tomatoes that contained degraded target DNA and the other for the quantification of the junction region of CaMV35s promoter and the anti-sense ethylene-forming enzyme (EFE) gene in transgenic tomato Huafan No. 1 samples. All of these results indicated that the LAT52 gene could be successfully used as a tomato endogenous reference gene in practical qualitative and quantitative detection of transgenic tomatoes, even for some processed foods derived from transgenic and nontransgenic tomatoes. 相似文献
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番茄KNOX基因家族鉴定及茄科作物KNOX基因进化关系分析 总被引：1，自引：0，他引：1
为了探明番茄KNOX基因家族特征及茄科作物中KNOX的进化关系,利用生物信息学方法,在全基因组水平上对番茄及其它茄科作物KNOX基因家族成员进行鉴定和分析。结果表明,番茄基因组中共含有8个KNOX基因(Sl KNOX1~Sl KNOX8),分别分布在番茄8条染色体上;多序列比对发现,除Sl KNOX5外,所有基因均含有同源异型盒蛋白特有的4种结构域,即KNOX1、KNOX2、ELK和Homeobox KN。利用系统发育树将茄科作物KNOX基因分为2类:ClassⅠ和ClassⅡ。茄科作物KNOX基因与拟南芥同源基因可能经历了不同的进化历程,在茄科作物中,特有的进化分支(Class I C)已经出现。qRTPCR分析发现,番茄Sl KNOX1在花蕾和花中具有较高表达,在果实生长发育过程中表达量逐渐降低,Sl KNOX2~Sl KNOX4在果实生长发育过程中几乎不表达,Sl KNOX6和Sl KNOX7在所测组织中均有表达,Sl KNOX8在果实成熟过程中表达量逐渐增加,且在根中表达量最大。本研究在全基因组水平上揭示了番茄中KNOX基因家族特征以及茄科作物中KNOX基因的系统发育关系,为进一步揭示KNOX基因家族在番茄组织器官中的功能及进化模式奠定了基础。 相似文献
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采用室内模拟培养的方法,研究了不同用量(2%,4%)转抗线虫基因番茄秸秆和普通番茄秸秆分解对土壤酶活性及微生物量碳的影响。结果表明:与普通番茄秸秆相比,添加低量(2%)秸秆,23d前,抗线虫处理土壤脲酶活性显著提高,9d时土壤碱性磷酸酶活性显著提高,23d时则显著降低,23d后,土壤微生物量碳含量显著提高。添加高量(4%)秸秆,4d时抗线虫处理土壤脲酶活性显著提高,91d时则显著降低,9d时,土壤碱性磷酸酶活性显著提高,23d,42d时则显著降低,9d,23d时,抗线虫处理土壤微生物量碳含量显著提高。抗线虫处理与普通处理间土壤蔗糖酶活性的差异在秸秆添加量为2%和4%时都不显著。 相似文献
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为了获得高抗番茄黄化曲叶病毒(TYLCV)番茄材料,本研究通过人工设计以TYLCV病毒基因V1、C1为靶标的双链RNA(dsRNA),通过农杆菌介导法转化番茄,探索RNAi技术在番茄抗TYLCV中的防御效果。结果表明,通过RNAi技术干扰TYLCVV1和C1基因可以延缓病毒症状的发生,提高番茄植株对TYLCV的抗性。田间试验结果发现,以TYLCV V1和C1为靶标的RNAi株系RNAi-CP-2和RNAi-Rep-12,不仅可以干扰病毒V1、C1的表达,而且可以干扰TYLCV其他4个基因V2、C2、C3和C4,表明RNAi技术可以在靶标基因附近传递,影响相邻其他基因的表达。本研究结果为番茄抗病毒研究奠定了理论基础。 相似文献