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菊欧文氏菌分子检测技术的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
蝴蝶兰细菌性软腐病对蝴蝶兰的生长危害严重, Erwinia chrysanthemi(菊欧文氏菌)、Erwinia carotovora subsp. carotovora(胡萝卜软腐欧文氏菌胡萝卜软腐亚种)是引起蝴蝶兰软腐病的主要病原细菌, 其中E.chrysanthemi被列入我国三类检疫性有害生物。本文对菊欧文氏菌分子检测技术进行了研究, 设计出针对该病原细菌的特异性引物, 应用实时荧光PCR方法检测样品中存在的菊欧文氏菌, 检测灵敏度达到102cfu/mL。 相似文献
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本文通过三亲交配将带有梨火疫欧文氏杆菌功能完整的hrp基因簇的重组粘粒pCPP430转移到了胡萝卜软腐欧氏杆菌(Erwinia carotovora) Se9R中。从接合子中提纯的质粒与pCPP430的大小、酶切图谱相同;以该质粒为模板,用针对hrpN序列的引物经PCR扩增得到与hrpN大小相同的片段;用地高辛标记的hrpN作为探针进行Southern blotting分析,在接合子中的质粒上得到预期的杂交带。接合子可以在烟草叶片上稳定地引起过敏反应。另外,接合子可以在寄主马铃薯叶片上引起过敏反应样枯斑,表明异源harpin的表达及功能不受软腐菌的抑制。该接合子在体外产生的果胶酸裂解酶活性与受体菌Se9R无明显差别。低浓度的接合子在马铃薯块茎上的软腐症状明显低于受体菌Se9R。外源harpin表达可能不改变软腐欧氏杆菌的致病力、而是通过诱导马铃薯抗性达到减轻发病的作用。 相似文献
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在广西博白县发现一种国内外尚未报道的新病害-甘蔗心腐病。根据对病原细菌的个体形态、培养性状、生理生化反应及其对菠萝果实的致病性等方面的试验研究结果,鉴定甘蔗心腐病病原细菌为菠萝欧文氏杆菌(Erwinia ananas Serrano)。 相似文献
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半夏细菌性软腐病原菌的分离及鉴定 总被引：2，自引：1，他引：2
在浙江省人工栽培的半夏[Pinellia ternata(Thunb.) Breit.]上发现一种新的软腐病害,软腐症状常常表现在块茎上,高温高湿条件可导致叶面腐烂和整株死亡。为了对病原菌进行鉴定,从软腐的半夏病株块茎中分离到10个菌株,分别指定为RF1~RF10,并进行了致病性测定、形态观察和细菌学特性分析,同时对RF1菌株进行了分子鉴定。结果表明,10个菌株均可经人工接种导致半夏、胡萝卜、马铃薯、番茄、黄瓜和白菜软腐。在电镜下菌体呈短杆状,两端钝圆,具有4~6根周生鞭毛。兼性厌氧、革兰氏阴性,DNA中G+C mol%为51。RF1菌株的16S rDNA测序和系统发育学分析表明,其与胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜软腐亚种(Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum)M1菌株报告的序列相同点为99%,与该亚种另2个菌株(E161和441)的序列相同点达97%。结果表明,半夏软腐病原菌应归属于胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜软腐亚种。 相似文献
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芹菜细菌性软腐病病原的分离与鉴定 总被引：2，自引：0，他引：2
由植物病原细菌引起的芹菜软腐病在北京地区普遍发生,其中以顺义及通州区县较为严重。自发病芹菜茎段中分离细菌,通过接种芹菜进行致病性测定,确定了54个致病菌株。虽然菌株间致病力有一定的差异,但大多数菌株对芹菜致病力强。通过培养性状和菌体形态观察、生理生化反应和Biolog测定,结合胡萝卜软腐果胶杆菌Pectobacterium carotovorum 6个管家基因(pgi、rpoS、mdh、proA、mtlD、icdA)的基因扩增、序列测定和多基因联合系统发育分析,将病原菌鉴定为胡萝卜软腐果胶杆菌P. carotovorum的3个亚种。其中45个菌株为P. carotovorum subsp. odoriferum,频数为83.33%;6个菌株为P. carotovorum subsp. carotovorum,频数为11.11%;3个菌株为P. carotovorum subsp. brasiliensis,频数为5.56%。上述结果显示,北京地区芹菜细菌性软腐病的病原菌为胡萝卜软腐果胶杆菌P. carotovorum的3个亚种,其中以P. carotovorum subsp. odoriferum为优势种。 相似文献
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欧美杨溃疡病是由Lonsdalea quercina(原称Brenneria quercina,Erwinia quercina)引起的一种细菌性病害,2005年首次在我国河南发现,对我国杨树产业造成了严重影响。菌株N-5-1是从河南濮阳自然发病杨树枝条上分离到的致病菌株。根据N-5-1菌株全基因组测序的初步结果分析,发现N-5-1具有完整的III型分泌系统(Type III secretion system,T3SS)。该系统与植物病原菌Erwinia amylovora CFBP1430和Dickeya dadantii 3937的T3SS高度相似,共由26个基因编码,共约23 kb,其中9个为保守的hrc基因。将L. quercina N-5-1菌株T3SS中保守的结构基因hrcV进行缺失突变,生物测定发现ΔhrcV突变体对“中林46杨”(Populus ×euramericana ‘Zhonglin 46’)2年生枝条的致病力明显下降,而互补菌株HBhrcV致病力与野生菌株保持一致。表明该菌中T3SS是病原细菌重要的致病性因子。菌株N-5-1中hrcV基因的突变导致诱导烟草过敏性坏死反应能力丧失,但并没有影响菌株的生长速率、游动性和生物膜的形成。本研究首次证明了L. quercina N-5-1菌株的T3SS是重要的致病因子。 相似文献
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马铃薯内生细菌的分离及环腐病拮抗菌的筛选鉴定 总被引：27，自引：1，他引：26
本研究从大同、太原和内蒙古等地采集马铃薯块茎,分离到240株内生细菌,通过离体抑菌作用测定,共得到55株对环腐病菌有拮抗作用的菌株,占菌株总数的22.9%,抑菌圈半径最大的可达13 mm。按抑菌圈半径大小将拮抗菌分为强、中、弱三类。从中筛选出9个对环腐病等病菌具有较强拮抗作用的内生菌株进行了细菌学鉴定,结果表明:118为荧光假单胞生物型V (Pseudomonas fluorescens biovar V);110为短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus);085为嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus);069为草生欧文氏菌(Erwinia herbicola);043为草莓黄单胞菌(Xanthomonas fragariae);A-10'、T3为芽孢杆菌属(Bacillus);H1-6为荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens);116为短小杆菌属(Curtobacterium)。 相似文献
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从全国23个省、市、自治区的46份马铃薯块标本中分离到25株菊欧氏杆菌(Erwinia carysanthemi).经58项细菌学性状的研究,发现它们在酒石酸钠,乳酸钠,丙酸钠,菊糖,蜜二糖,D—山梨醇等项反应中有差别.据此将这25个菌株分为3个生物型,其中生物型Ⅰ是来自江苏的10个菌株;生物型Ⅱ是来自四川仁寿县和彭县的,也是10个菌株;生物型Ⅲ共4个菌株来自河北和内蒙。生物型Ⅰ和Ⅱ与Dickey系统中的生物型Ⅱ相似,而生物型Ⅲ则与任何已划分的生物型都有一定差异. 相似文献
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吉林省人参细菌性软腐病病原 总被引：4，自引：1，他引：3
对分离自吉林省主要参场的软腐病参根和厌气诱发产生软腐症状的参根的菌株进行了致病性测定、电镜形态观察和生理生化测定等。结果表明,造成吉林省人参细菌性软腐病的病原种类为:胡萝卜软腐欧文氏菌胡萝卜软腐亚种(Erwinia carotovora subsp, carotovora Dye)、胡萝卜软腐欧文氏菌黑胫亚种(Erwinia carotovora subsp, atroseptica Dye)和石竹假单胞菌[Pseudomonas caryophylli(Burkholder) Starr & Burkholder]。 相似文献
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软腐欧氏杆菌在离体条件下产生胞外酶的比较研究 总被引：1，自引：0，他引：1
3种软腐细菌在21,26和31℃下及6种培养液中的生长量和产生胞外酶的能力各不相同。Ecc在26℃生长最好,Eca为21℃,Ech在三种温度下的生长量差别不大。与其它2种细菌比较,Ech的生长及产生果胶裂解酶(PL)的能力总是最强的。随着温度的升高,各种细菌的PL活性都下降。果胶水解酶(PG)变化不大,但Ech在高温下产PG有减少趋势,且总没有另二种细菌的活性强。Eca以26℃时产PG最适宜。Ech在较高温度下蛋白酶活性大大下降,而Ecc,变化不大,Eca的蛋白酶活性则随温度升高而加强。培养液的无细胞滤液对马铃薯块茎组织的浸离力与其中PL的活性有密切关系,但没有或只有很低果胶酶活性,而蛋白酶活性正常的这种滤液也能使小薯碟浸离。Eca在31℃培养后果胶酶活性很低,蛋白酶活性很高,其无细胞滤液对马铃薯组织也表现较强浸离力。 相似文献
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采用Echandi方法,测定了从国内不同植物上分离,经鉴定的3个种和亚种的软腐欧氏杆菌(Erwiniacarotovora var.carotovora Dye,E.carotovora var.otroseptica Dye,E.chrysanthemi Burkholder.etal.)的224个菌株产生细菌素的能力。指示菌为代表3个不同种的菌株。测定结果表明:224个试验菌株中能产细菌素的有97个,占总数的43.3％。经测定产生细菌素的专化性有所不同,约各有1/3菌株分别对3种、2种、1种指示菌有抑制作用。有些广谱的细菌素甚至对其它属的植物病原细菌也有抑制作用。少数种内专化的产细菌素菌株可望用于软腐欧氏杆菌种鉴定的辅助手段。电镜观察初步表明,这些细菌素可能是分子大小不同的两种类型的细菌素:小分子细菌素在电镜下不可见,大分子细菌素具有短杆状结构,颇似无头壳的噬菌体的尾部。 相似文献
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北京地区蔬菜软腐细菌病原的研究 总被引：5，自引：0，他引：5
近年来京郊蔬菜软腐病害有所增加.经对夏季各类主要蔬菜和窖藏后期的大白菜研究鉴定,欧氏软腐细菌为害大白菜、蕃茄、青椒、马铃薯、黄瓜、冬瓜、南瓜和丝瓜等。经过形态、生理生化特性、致病性等一系列的测定,发现蔬菜上腐烂细菌的种类有所变化,窖藏后期大白菜腐烂主要病原是假单孢杆菌(Pseudomonas spp)夏季蔬菜上主要是胡萝卜软腐欧氏杆菌胡萝卜软腐致病型(Erwinia carotovora pv.carotovora),在蕃茄和丝瓜上还发现有胡萝卜软腐欧氏菌马铃薯黑胫病致病型(Erwinia carotovora pv.atroseptica). 相似文献
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B.A. Fraaije M. Appels S.H. De Boer J.W.L. Van Vuurde R.W. Van den Bulk 《European journal of plant pathology / European Foundation for Plant Pathology》1997,103(2):183-193
Automated conductance measurements in polypectate medium were used for the detection of pathogenic soft rot Erwinia spp. in potato peel extracts. The detection threshold for Erwinia carotovora subsp. atroseptica (Eca) in inoculated peel extracts was ca. 104 colony forming units (cfu) ml-1 when samples were considered positive on the basis of a response within 48 h at 20 °C. Detection of E. chrysanthemi (Ech) was less sensitive, only 105 cfu ml-1 peel extract were detected within 36 h at 25 °C. The linear correlation between detection times in conductimetry and inoculum levels of Eca and Ech in peel extracts was used for a quantitative estimation of Eca and Ech in naturally contaminated peel extracts. Samples giving a positive conductimetric response had to be confirmed with an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) or polymerase chain reaction (PCR) for the presence of Eca and Ech, because E. carotovora subsp. carotovora (Ecc) also generated a conductance response. Conductimetry was sensitive and efficient for detection of contamination levels of Eca higher than 104 cfu ml-1 peel extract. For Ech, conductimetric detection was less sensitive and inefficient due to low contamination levels of Ech and the presence of high numbers of Ecc in many samples after enrichment, which interfered with the test. Immunofluorescence cell staining (IF) combined with enrichment and immunofluorescence colony staining (IFC) were suited to detect and quantify low numbers of Eca and Ech at less than 104 cfu ml-1 in peel extracts. However, since false positive and negative reactions in serology were observed, the use of PCR after enrichment, or in combination with IFC to confirm positive results, was required for accurate detection. 相似文献
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水稻基腐病细菌和玉米茎腐病细菌的比较研究 总被引：5，自引：0，他引：5
对水稻基腐病细菌(18个菌株)、玉米茎腐病细菌和菊欧氏杆菌的6个致病变种的标准菌株及胡萝卜软腐欧氏杆菌的两个致病变种(Erwinia carotovora pv.carotovora和E.c.pv.atroseptica)进行了58项生化试验的比较。结果水稻菌株在生化性状上与玉米菌株十分相似,最接近菊欧氏杆菌玉米致病变种(E.chrysanthemi pv.zeae),但水稻基腐病细菌在兰色素产生,丙二酸、酒石酸钠利用,产氨和过氧化氢酶活性等项上与玉米致病变种不同。在致病性比较中,水稻菌株比玉米菌株致病力强,寄主范围广。可能是一个独特的致病变种。全细胞蛋白聚丙烯酰胺圆盘电泳的研究表明水稻菌株的蛋白电泳带数与玉米菌株相同,均为16条,但电泳带的迁移率互不相同。血清学研究表明水稻基腐病细菌和玉米致病变种没有共同抗原。 相似文献
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Phenotypic and genetic characteristics of nine bacterial strains isolated from mulberry ( Morus spp.), which were originally described as Erwinia carotovora ssp. carotovora (Ecc), were investigated. Based on the results of biochemical tests, these bacterial strains were divided into two different types, type 1 and type 2. Two strains of type 1 were similar to Ecc, whereas seven strains of type 2 were distinct from Ecc. A polyphasic study that included serological assay, specific PCR assay for E. carotovora ssp. atroseptica (Eca), PCR-RFLP of a pectate lyase ( pel ) gene and RAPD-PCR was performed on the type 2 strains, and the data were compared with those of related E. carotovora subspecies. The results of serological and specific PCR assays for Eca showed that the type 2 strains were distinct from Eca. In RFLP analysis of the pel gene using Sau 3AI, the type 2 strains showed a unique RFLP pattern. On the basis of RAPD analysis, similarity of RAPD patterns within the type 2 strains was very high. A unique RAPD fragment was isolated from the type 2 strains and used as a probe for Southern hybridization. This probe hybridized only with PCR products from the type 2 strains. Based on phenotypic, serological and genetic characteristics, the type 2 strains isolated from mulberry may belong to a distinct E. carotovora subspecies other than Eca or Ecc. 相似文献
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We recently reported that two diverse types (types 1 and 2) were identified among strains of Erwinia carotovora from mulberry trees. Type 1 strains were similar to E. carotovora subsp. carotovora (Ecc), whereas type 2 strains were distinct from Ecc and other E. carotovora strains. In this study, seven more mulberry strains of type 2 and reference strains were analyzed by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and randomly amplified of polymorphic DNA (RAPD). On the basis of SDS-PAGE profiles of whole-cell proteins, type 2 strains had high similarity with one another. In addition, they had an unique peptide band with a molecular mass of approximately 28kDa. RAPD analysis showed that they were also effectively differentiated by a strong, specific RAPD fragment for type 2 strains. Based on these two approaches, we have confirmed that the present type 2 strains from mulberry can be discriminated clearly from other soft rot Erwinia species. 相似文献
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生防细菌13-1对魔芋软腐病的控制及机理研究 总被引：2，自引：0，他引：2
生防菌13-1是溶杆菌属Lysobacter的一类极具生防潜力的新型生防细菌。本试验从拮抗作用、定殖特性、营养竞争三方面来研究其生防机理。结果表明,生防菌13-1能对不同致病力的魔芋软腐病菌Erwinia carotovora subsp. carotovora产生拮抗作用;能在魔芋根部、根际土等生态位点定殖,定殖量维持在10^3-10^6cfu/g,定殖时间长达42d,表现出良好的环境适应性和稳定性;同时该菌株与魔芋软腐病菌具有46.88%的营养物质利用相似性,具有一定的营养竞争关系。两年田间防效结果显示,在2005、2006年对照病情指数分别为38.68和61.66的情况下,生防菌13-1对魔芋细菌性软腐病的控制效果分别达到79.16%和54.91%。 相似文献