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1.
为了建立一种简便、快速、可靠和经济的牛γ干扰素(BOIFN-γ)的免疫学检测方法,本研究通过杂交瘤技术建立了2株抗rBoIFN-γ单克隆抗体(MAb)2G6和5F9.Western blot、抗病毒活性阻断实验表明2株MAb与rBoIFN-γ有高亲和活性.相加EUSA表明2G6和5F9识别rBoIFN-γ不同的抗原表位.利用2G6作为捕获抗体,5F9-HEP作为检测抗体建立的抗原捕获ELlSA方法可特异性的检测不同系统表达的rBoIFN-γ,而且与rBoIFN-a、rBoIFN-β不发生交叉反应.该方法的建立为抗原捕获ELISA定量检测BoIFN-γ试剂盒的研制奠定了基础. 相似文献
2.
《畜牧兽医杂志》2017,(6)
本研究以纯化原核表达重组蛋白rBovIFN-γ-PET28a-His为免疫原,以重组蛋白为筛选抗原,通过杂交瘤细胞技术,研制出5株稳定分泌rBovIFN-γ单克隆抗体的细胞株,命名为1C11、6E2、7F7、9F5、10C8;腹水效价分别为1∶12 800、1∶6 400、1∶12 800、1∶25 600、1∶12 800。5株单抗中:1C11、7F7、9F5、10C8只与rBovIFN-γ-PET28a-His反应,而不与IFN-α、IFN-β、IL-4、白介素2、鸡IFN-γ等其他细胞因子发生交叉反应;6E2除了与rBovIFN-γ-PET28a-His反应外,还与鸡IFN-γ发生交叉反应。Western blot分析表明,4株单抗均能特异性识别并结合rBovIFN-γ,纯化后的5株单抗的腹水效价分别为1∶6 400、1∶3 200、1∶6 400、1∶12 800、1∶6 400;同时,本研究制备的兔抗rHis-BoIFN-γ多抗效价达1∶25 600。 相似文献
3.
为建立掺糖造假蜂蜜中残留糖化酶的检测方法,用从黑曲霉中提取的糖化酶作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术获得了12株稳定分泌针对糖化酶抗体的杂交瘤细胞株。单克隆抗体亚型鉴定结果显示,10株为IgG1,2株为IgG2b,轻链均为κ轻链。Western blotting分析结果表明,12株抗体均可特异性结合糖化酶。其中6株单抗(McAb-2H4F9、6H9D8、8F2F11、8F2E9、1A8G6、1C4D5)细胞株采用体内诱生法制备的腹水效价均1∶1×104以上。采用抗体叠加试验对这6株抗糖化酶单抗的抗原识别位点进行检测,反应增殖结果表明,6株单抗分别针对4类不同抗原位点,McAb-6H9D8和McAb-8F2F11针对第Ⅰ种抗原决定簇;McAb-1A8G6和McAb-1C4D5针对第Ⅱ种抗原决定簇;McAb-8F2E9针对第Ⅲ种抗原决定簇;McAb-2H4F9针对第Ⅳ种抗原决定簇。制备的抗体针对不同的抗原表位,为双抗夹心ELISA方法的建立提供前提。 相似文献
4.
抗猪圆环病毒2型Cap蛋白中和性单克隆抗体的制备及鉴定 总被引：6，自引：1，他引：5
以纯化的杆状病毒表达的重组猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白(PCV2-rCap)免疫BALB/c小鼠,利用淋巴细胞瘤杂交技术获得了5株稳定分泌抗PCV2-rCap蛋白的杂交瘤细胞株,分别命名为1D2、2E8、3A10、5F2和6F10.这5株杂交瘤细胞诱导同品系小鼠产生的腹水抗体效价分别为1:2 048 000、1:512 000、1:1 024 000、1:512 000、1:1 024 000;其中1D2、2E8、5F2和6F10单抗亚类为IgG2a,仅3A10为IgG1;2E8、3A10、5F2和6F10单抗轻链为入型,仅1D2轻链为K型.Western blot结果显示,这5株单抗中2E8、3A10、5F2和6F10可与自然PCV2-Cap发生反应,而1D2无反应.IPMA和抗原捕获ELISA结果表明,ID2单抗可与PCV2病毒蛋白发生反应,而与PCV1无交叉反应;病毒中和试验证实,1D2单抗具有中和活性,是一株针对PCV2-Cap蛋白中和表位的单抗.这些单抗的制备为PCV2抗原表位分析及分子诊断提供了技术手段. 相似文献
5.
猪急性腹泻综合征冠状病毒(swine acute diarrhea syndrome coronavirus, SADS-CoV)目前尚未有商品化诊断试剂盒，为填补行业空白，本研究制备了抗SADS-CoV核衣壳(N)蛋白单克隆抗体并对其序列进行了分析。利用原核表达系统表达SADS-CoV N蛋白并进行纯化，纯化的N蛋白作为免疫源免疫BALB/c小鼠，通过细胞融合、筛选及亚克隆，获得5株能够稳定分泌抗SADS-CoV N蛋白的杂交瘤细胞株，将其命名为1C10、4B10、6G1、6F3和6E8;此外，利用套式PCR扩增技术获得了抗体可变区基因序列。间接免疫荧光试验(IFA)结果表明，5株单抗特异性识别Huh7细胞感染的SADS-CoV。ELISA结果表明，5株单抗与纯化的SADS-CoV N蛋白具有良好的反应性，但是，与SADS-CoV反应性分析发现，只有6E8的反应性较好，其余四株均不反应。Western blot结果表明，5株单抗均能特异性识别纯化的以及SADS-CoV感染表达的N蛋白。亚类分型鉴定结果表明，1C10、4B10、6G1和6F3重链为IgG1型，6E8为IgG2a型，它们... 相似文献
6.
将鸡白细胞介素18成熟蛋白(mature chicken interleukin 18,mChIL-18)基因亚克隆至原核表达载体pET-28a(+),并在大肠杆菌中高效表达,采用Ni-NTA亲和层析方法纯化重组蛋白,免疫BALB/c小鼠,经融合、筛选制备特异性单克隆抗体(mAb),并通过间接ELISA、间接免疫荧光(IFA)和Western blot等方法对mAb做初步鉴定.结果表明,试验成功表达了mChIL-18蛋白,并获得2株持续且稳定分泌抗体的杂交瘤细胞(1G9、2E6),其腹水ELISA效价分别为1∶5.12×10 5和1∶3.2×104,亚类鉴定结果均为IgM.Western blot结果显示,2株单抗均能特异性识别原核表达的mChIL-18蛋白,IFA分析表明它们均能与真核表达的mChIL-18发生特异性反应,ELISA叠加试验证实1G9与2E6针对2个不同的抗原表位.本研究所获单抗可以用于建立鸡IL-18的检测方法,为进一步开展其生物学功能研究奠定了基础. 相似文献
7.
为研制传染性法氏囊病病毒（IBDV）快速检测试剂盒,用重组IBDV-VP2蛋白免疫BALB/c小鼠,制备免疫脾细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞触合,获得3株稳定分泌抗VP2蛋白单克隆抗体（mAb）的杂交瘤细胞株,分别命名为1D11、2G8和2E5,抗体亚类分别为IgG1κ、IgG2bκ和IgG1κ。间接免疫荧光试验（IFA）证明,3株单抗均与VP2发生特异性反应。相加ELISA证明3株mAb识别VP2不同的抗原表位。在病毒中和试验中,1D11和2G8腹水对IBDV的中和效价分别为104和103,而2E5无中和活性。用亲和层析方法纯化1D11和2E5,分别作为包被抗体和标记抗体,建立了IBDV夹心ELISA检测方法,优化了试验条件,测定了其主要性能指标,对IBDV的最低检出量为102 TCID50/mL。用夹心ELISA、AGP和RT-PCR 3种方法同步检测8种试验样品,夹心ELISA与RT-PCR的检测结果一致,显著高于AGP方法。组装成的试剂盒,置于37℃保存7d、4℃保存6个月和-20℃保存24个月,其检测结果没有显著差异（P〉0.05）。 相似文献
8.
为研制传染性法氏囊病病毒(IBDV)快速检测试剂盒,用重组IBDV-VP2蛋白免疫BALB/c小鼠,制备免疫脾细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞触合,获得3株稳定分泌抗VP2蛋白单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株,分别命名为1D11、2G8和2E5,抗体亚类分别为IgG1κ、IgG2bκ和IgG1κ。间接免疫荧光试验(IFA)证明,3株单抗均与VP2发生特异性反应。相加ELISA证明3株mAb识别VP2不同的抗原表位。在病毒中和试验中,1D11和2G8腹水对IBDV的中和效价分别为104和103,而2E5无中和活性。用亲和层析方法纯化1D11和2E5,分别作为包被抗体和标记抗体,建立了IBDV夹心ELISA检测方法,优化了试验条件,测定了其主要性能指标,对IBDV的最低检出量为102 TCID50/mL。用夹心ELISA、AGP和RT-PCR 3种方法同步检测8种试验样品,夹心ELISA与RT-PCR的检测结果一致,显著高于AGP方法。组装成的试剂盒,置于37℃保存7d、4℃保存6个月和-20℃保存24个月,其检测结果没有显著差异(P>0.05)。 相似文献
9.
单增李斯特菌ActA的表达、免疫原性研究及单克隆抗体的制备 总被引：1，自引：1，他引：0
原核表达单增李斯特菌(Lm)ActA蛋白并进行亲合层析纯化,检测ActA的免疫原性,以表达蛋白为检测抗原制备Lm单克隆抗体,并对单抗的亚型、效价、亲合力及特异性进行测定。结果表明,成功表达了ActA蛋白;表达蛋白诱导了特异性的细胞免疫和体液免疫,具有良好的免疫原性;共获得4株抗Lm ActA单克隆抗体。其中3G6、4E10和2B9为IgG1亚类;腹水抗体效价,3G6和4E10为1∶64000,2B9为1∶32000;3G6、4E10和2B9的亲和常数分别为6.62×107M-1、5.67×107M-1和7.15×106M-1;3G6、2B4和4E10为Lm特异性单抗,2B9为致病性李斯特菌特异性单抗。所制备的单抗可用于Lm检测方法的建立。 相似文献
10.
单核细胞增生李斯特菌ActA单克隆抗体的制备 总被引：1，自引：1，他引：0
原核表达单核细胞增生李斯特菌(Lm)ActA蛋白并进行亲合层析纯化,以Lm全菌为免疫原、以纯化的表达蛋白为检测抗原制备Lm单克隆抗体,共获得4株抗Lm ActA单克隆抗体。其中3G6、4E10和2B9为IgG1亚类,2B4为IgM亚类;检测腹水抗体效价,3G6和4E10为1∶64 000,2B9为1∶32 000;3G6、4E10和2B9的亲和常数分别为6.62×107L/mol、5.67×107L/mol和7.15×106L/mol;3G6、2B4和4E10为Lm ActA特异性单抗,2B9为致病性李斯特菌特异性单抗。所制备的单抗为Lm检测方法的建立奠定了基础。 相似文献