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玉米(Zea mays L.)病害的发生和流行是限制玉米高产稳产的重要因素。玉米细菌性褐斑病是目前具有潜在危害性的病害之一,在抗性基因遗传规律和染色体定位研究方面取得一定进展,但在基因克隆、功能鉴定等研究上进展较为缓慢,利用构建的Fosmid文库克隆抗病候选基因是目前较为快捷和有效的方法之一。本研究以玉米细菌性褐斑病的抗病自交系F349为材料构建了玉米Fosmid文库,克隆总数约为3.7×105个,平均插入片段长度为32 kb,实现4.73倍的玉米基因组覆盖,筛选到任意基因或序列的概率达到了99.12%。基于该文库,利用不同引物组合进行了两个类受体蛋白激酶基因(Psy1和Psy2)的克隆筛选,得到14个阳性克隆,其中4个阳性克隆包含Psy2基因和Psy1基因部分片段;3个阳性克隆包含完整Psy1基因;对其中两个阳性克隆13-12F-23和32-4A-6的测序结果显示,Psy1基因的启动子和内含子分别被插入了10.0和13.5 kb的外源片段;13.5 kb的插入片段是LTR家族的huck反转录转座子,10.0 kb的插入片段是含有helitron转座元件的复杂转座子;扩增到了Psy1基因的cDNA全长,说明这两种类型反转录转座子的插入并未使基因失活。本研究为玉米基因的克隆和功能分析提供了一种可行的研究途径。 相似文献
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由革兰氏阴性细菌水稻白叶枯病菌引起的水稻白叶枯病是亚洲、北美以及非洲部分地区最严重的水稻病害之一,水稻白叶枯病可使水稻减产高达50％以上。研究表明水稻白叶枯病菌的毒力主要依靠三型分泌系统所分泌的效应物。为了解水稻白叶枯病菌广西菌株GX1329中含有avrBs3／pthA家族基因的情况,本研究应用Alu I部分酶切其基因组DNA,构建了含有736个克隆的菌株GX1329的基因组文库。BamHI酶切分析随机挑取的15个文库克隆表明,克隆的外源DNA随机性良好,克隆的最小片段为27．7kb,最大为58．5kb,平均大小为39．9kb,文库克隆容量约为2．8×10^3Mb,该文库中包含基因组中任一个基因的概率为99．4％。利用来自水稻白叶枯病菌菲律宾菌株PX086的无毒基因avrXa10的第252位～第486位核苷酸序列作为探针,通过菌落原位杂交从GX1329基因组文库中筛选到37个含avrBs3／pthA家族基因的克隆。再通过Southern杂交分析,得到了17个独立克隆。这17个克隆中至少含有13个不同的avrBs3／pthA家族基因。这些基因在GX1329基因组中有的单独存在,有的两个或两个以上串联存在。本工作基本上明确了菌株GX1329基因组中avrBs3／pthA家族基因的数量,为进一步研究菌株GX1329中avrBs3／pthA家族基因的功能奠定了基础。 相似文献
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玉米混合组织的EST文库的构建和部分EST序列的分析 总被引：1，自引：1，他引：1
以CLONTEECH的pDNR-LIB质粒为载体,构建了干旱和盐碱共胁迫48h和相应的无胁迫正常生长条件下耐旱玉米(ZeamaysL.)YQ7-96品系的雌雄分化期(12片叶龄)的混合组织(叶、茎和花器)EST文库。该文库容量>2×105个克隆,覆盖了预计的玉米基因组5万个基因的4倍以上。随机对3168个克隆中插入的cDNA进行测序,获得有效序列2098条,其中,2002个克隆中的cDNA进行了5'端测序,96个克隆中的cDNA的进行了5'和3'两端测序。结果表明,3'端测序的96个克隆的cDNA都含有polyA尾巴;进一步对这2098条组装分析,形成168个重叠群(Contig)和1693个单拷贝EST(Singlet),代表了共计1861条独立基因(Unigene);根据GenBank中的玉米EST数据库和BLASTn分析软件进行核苷酸同源性分析,1731条(93.01%)EST的score值大于或等于100,130条(6.99%)的EST的score值小于100,说明这130条属于新的表达基因的序列,有21条可以定位在玉米的不同染色体上;BLASTx分析表明,2098条EST中,1007条(48%)有功能注释信息,1091条(52%)无功能注释信息。该文库中的EST将会对公共数据库中现存的玉米EST数据起到补充作用。 相似文献
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旨在构建酵母单杂交文库用于筛选与胚柄特异基因G564启动子顺式元件结合的转录因子。本研究根据植物胚柄特异表达基因G564启动子关键序列(GAAAAGCGAA)合成了5次串联重复序列,并与报告质粒pHIS2.1连接构建诱饵载体pHIS2.1-G564-5A;以纯化的拟南芥(Arabidopsis thaliana)幼嫩种子mRNA为模板,合成SMARTTMⅢ和CDSⅢ锚定末端dscDNA;并将dscDNA与线性化融合表达载体pGADT7-Rec2以及诱饵载体pHIS2.1-G564-5A共转化到酵母Y187,构建酵母单杂交文库。文库的共转化效率为5.53×105cfu/μg。对文库中的阳性克隆进行测序,获得117条可读序列。对其进行基因功能注释并进一步分析基因的功能发现,具有DNA结合功能的蛋白14个,具有蛋白质结合功能的蛋白8个。上述22个蛋白包括TATA结合蛋白1(TBP1),支架结构相关区(SAR)DNA-结合蛋白,胚珠发育蛋白,G-box结合因子1(GBF1),组蛋白H3等。本研究为分离和克隆胚柄中特异表达的转录因子提供了候选基因。 相似文献
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利用高盐法从鸡血中提取高分子量ＤＮＡ，以λＥＭＢＬ３为载体构建了鸡染色体文库，用鸡生长激素受体ｃＤＮＡ基因的部分序列作探针，从文库中筛选得到３个阳性克隆。通过对阳性克隆Ｉ插入片段的酶切和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析，表明它含有全长的鸡生长激素受体基因，建立了该基因的限制性酶切图谱。将插入片段亚克隆到ｐＧＥＭ－７Ｚｆ（＋）质粒上，对含有基因５’端序列的２．５ｋｂＥｃｏＲＩ酶切片段进行了序列分析。 相似文献
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用γ射线和叠氮化钠诱变的玉米愈伤组织筛选耐旱和雄性不育材料 总被引：10，自引：4，他引：10
用60Coγ射线和叠氮化钠(NaN3)处理玉米愈伤组织,在含1.0%NaCl的高渗培养基上筛选,对再生植株株系进行耐旱性鉴定。结果表明,20 Gy的辐射和1 mmol/L NaN3是较为适合玉米愈伤组织诱变的处理组配。22个再生植株株系中,有5个诱变株系的耐旱性高于未诱变对照,其中1个株系的耐旱性与耐旱自交系“81565”接近。此外,从M1代株系中发现了1个雄性不育株,鉴定为细胞核隐性单基因控制的孢子体雄性不育。 相似文献
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为了解有机肥施用对于红壤中反硝化细菌群落结构的影响,设置了4个处理:CK(不施肥)、LM(低量有机肥)、ML(高量有机肥+石灰)和HM(高量有机肥)进行研究,并通过末端限制性片段长度多态性(T-RFLP)和克隆文库的DNA测序估计了nirK基因的多样性。结果表明:各处理分别挑选的288个阳性克隆子可分为78个类型,各处理nirK文库中的优势类群属于同一种类型,在CK处理中的占比为51%,在其他3个处理中的占比依次为33%、32%和27%。4个文库之间两两的相似性在37.50%~45.34%,系统进化树分析表明,51个OTUs测序结果中6个OTUs与苍白杆菌属的相似性最高,占测序总数的11.8%;其余45个OTUs属于未培养类型,占测序总数的88.2%。有机肥添加有助于提高nirK基因的多样性,并且出现了红壤原始环境中未出现的反硝化细菌类型。 相似文献
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玉米花粉特异性基因ZM401 cDNA片段的克隆及其表达研究 总被引：1，自引：1，他引：1
采用差异筛选法，并结合冷噬菌斑筛选，从玉米成熟花粉cDNA文库中克隆分离了9个花粉特异性表达的cDNA克隆，并对其中之一ZM401（Zea mays401）进行了分析。经基因组Southern杂交和Northern杂交分析表明，ZM401基因以单拷贝存在于玉米基因组中，只在花粉组织中表达，在叶片、根、花药的营养组织中均检测不到ZM401mRNA的积累。ZM401基因的mRNA明显表显为1.2和2.0kb两种，推测可能为转录后前体mRNA可变剪切的结果。 相似文献
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卵特异性连接组蛋白(oocyte-specific linker histone H1,H1foo)是在哺乳动物卵母细胞与早期胚胎内特异表达的连接组蛋白,它在卵母细胞生长成熟、受精及胚胎发育中起关键性作用.本研究旨在克隆猪H1foo基因,并构建其真核表达载体.首先利用5'RACE和RT-PCR的方法获得猪H1foo基因的CDS区,并提交GenBank,登录号为HQ915640;然后将H1foo基因的CDS区连接到载体pMD19-T上,经酶切后定向克隆到表达载体pVenus上,从而构建pVenus-H1foo真核表达载体;用脂质体2000介导重组质粒pVenus-H1foo转染Hela细胞,荧光显微镜下观察、RT-PCR检测,确定重组质粒在Hela细胞内的表达和定位;最后通过体外转录试剂盒将H1foo-venus体外转录为mRNA,并显微注射至猪卵母细胞,荧光显微镜观察其表达和定位.序列分析表明猪Hlfoo基因CDS区全长1 041bp,编码346个氨基酸,蛋白分子量为36.45kD,在核苷酸水平上与牛、人和小鼠H1foo基因的相似度分别为75.7％、67.9％和54.3％;真核表达载体pVenus-H1foo转染后,能在He(l)a细胞中表达并可以准确的定位在细胞核;体外转录的H1foo-venusmRNA显微注射猪卵后其融合蛋白也能准确定位于细胞核.本研究克隆了猪H1foo基因并成功构建其真核表达载体;体外转录的H1foo-venusmRNA能在猪卵中正确表达和定位,为进一步研究H1foo在猪卵母细胞成熟以及核移植过程中的作用提供了基础资料. 相似文献
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DNA甲基化与细胞分化 总被引：1，自引：0，他引：1
DNA甲基化与DNA遗传信息的传递及组织特异性基因的正确表达存在着十分密切的关系。DNA甲基化受组蛋白H 3和DNA甲基化转移酶的调控;甲基化的DNA与许多的蛋白质共同相互作用,调控基因转录,从而导致基因印迹和基因沉默,使细胞向特定方向分化。本文重点综述了DNA甲基化位点、甲基化转移酶及DNA甲基化相关的蛋白质;DNA甲基化与基因印记、基因沉默的关系及其对细胞分化的影响。 相似文献
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Lunasin is a unique 43 amino acid soy peptide that has been shown to be chemopreventive in mammalian cells and in a skin cancer mouse model in this work against oncogenes and chemical carcinogens. The observation that lunasin inhibits core histone acetylation led to the proposal of an epigenetic mechanism by which lunasin selectively kills cells that are being transformed by disrupting the dynamics of cellular histone acetylation-deacetylation when the transformation event is triggered by the inactivation of tumor suppressors that function via histone deacetylation. Here is reported for the first time the core histone H3- and H4-acetylation inhibitory properties of lunasin from different Korean soybean varieties used for various food purposes and from tissues of rats fed with lunasin-enriched soy (LES) to measure bioavailability. Lunasin was analyzed by immunostaining and inhibition of core histone acetylation by a non-radioactive histone acetyl transferase assay. Various amounts of lunasin are found in the soybean varieties, which correlated with the extent of inhibition of core histone acetylation. Both soy lunasin and synthetic lunasin inhibit core histone acetylation in a dose-dependent manner. Lunasin in LES is protected from in vitro digestion by pepsin. Lunasin extracted from blood and liver of rats fed with LES is intact and inhibits core histone acetylation. 相似文献
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2008年至2009年间,在湖南和湖北两省的活禽市场中分离到了14株H6亚型禽流感病毒,为了解这14株病毒之间的分子特征和差异,我们运用PCR和测序鉴定对这14株病毒的NA基因进行了分型,并对其表面基因HA和NA进行序列测定及序列分析。14株H6亚型病毒中,H6N2亚型12株,H6N6亚型2株。序列测定和进化分析结果显示：DK/HN/284的HA基因与其它13株的HA差异性较大,差异性达到19.4%～20.2%,其余13株毒同源性在94.2%～99.9%;N2亚型NA基因的同源性在91.1%～99.9%,差异性比较大;两株N6亚型NA基因同源性为89.5%,差异明显。这些数据表明：不同毒株呈现一定的地域性差异。与我国周边其它地区的H6亚型禽流感毒株序列进行比较发现,只有DK/HN/284的HA基因与香港早期的毒株可能有着共同的来源,其余都与香港和韩国等的毒株有着较大的差异性,并且各个毒株的HA基因上潜在的糖基化位点和受体结合位点也有所不同,这些数据表明,这些毒株表现出明显的异源性。 相似文献
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De Lucca AJ Heden LO Ingber B Bhatnagar D 《Journal of agricultural and food chemistry》2011,59(13):6933-6939
Wheat ( Triticum spp.) histones H1, H2, H3, and H4 were extracted, and H1 was further purified. The effect of these histones on specific fungi that may or may not be pathogenic to wheat was determined. These fungi included Aspergillus flavus , Aspergillus fumigatus , Aspergillus niger , Fusarium oxysporum , Fusarium verticillioides , Fusarium solani , Fusarium graminearum , Penicillium digitatum , Penicillium italicum , and Greeneria uvicola . Non-germinated and germinating conidia of these fungi were bioassayed separately. The non-germinated and germinating conidia of all Fusarium species were highly susceptible to the mixture (H1-H4) as well as pure H1, with viability losses of 99-100% found to be significant (p < 0.001) at ≤10 μM or less for the histone mixture and pure H1. F. graminearum was the most sensitive to histone activity. The histones were inactive against all of the non-germinated Penicillium spp. conidia. However, they significantly reduced the viability of the germinating conidia of the Penicillium spp. conidia, with 95% loss at 2.5 μM. Non-germinated and germinating conidia viability of the Aspergillus spp. and G. uvicola were unaffected when exposed to histones up to 10 μM. Results indicate that Fusarium spp. pathogenic to wheat are susceptible to wheat histones, indicating that these proteins may be a resistance mechanism in wheat against fungal infection. 相似文献
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本工作研究了分子氢对不同生长条件下三种红萍:细绿萍(Azollsa filiculoides),卡洲萍(Azolla caroniana)和小叶萍(Azolla microphylla)的固氮活性的支持作用,结果表明,在5000—20000lx不同光照强度下,分子氢对红萍固氮活性均有支持作用,当光照强度为10000lx时,10％的分子H_2可使红萍的固氮活性增加30—80％,在5000lx弱光条件下,相同浓度分子氢使红萍固氮活性增加的幅度比10000lx光照时大。在相同的光照条件下,大叶萍的固氮活性较高,分子氢对其固氮活性的支持作用也较强,说明了在萍藻共生体系中,光能利用、固氮效率与分子氢利用效率呈正相关。同时,分子氢对于红萍固氮活性受尿素毒害所致的抑制也有减慢作用。在培养液中尿素浓度超过5ppm时,红萍的固氮活性受到抑制,当尿素浓度达到50ppm时,其固氮活性抑制率达50—60％,但20％的分子氢可使其固氮活性恢复到正常培养下的70％以上。在一定的尿素浓度范围内,红萍固氮活性受抑程度愈大,分子氢对其减慢的作用也愈强。 相似文献
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Jeong JB Jeong HJ Park JH Lee SH Lee JR Lee HK Chung GY Choi JD de Lumen BO 《Journal of agricultural and food chemistry》2007,55(26):10707-10713
Lunasin, a unique 43 amino acid, 4.8 kDa cancer-chemopreventive peptide initially reported in soybean and now found in barley and wheat, has been shown to be cancer-chemopreventive in mammalian cells and in a skin cancer mouse model against oncogenes and chemical carcinogens. To identify bioactive components in traditional herbal medicines and in search for new sources of lunasin, we report here the properties of lunasin from Solanum nigrum L. (SNL), a plant indigenous to northeast Asia. Lunasin was screened in the crude extracts of five varieties of the medicinal plants of Solanaceae origin and seven other major herbal plants. An in vitro digestion stability assay for measuring bioavailability was carried out on SNL crude protein and autoclaved SNL using pepsin and pancreatin. A nonradioactive histone acetyltransferase (HAT) assay and HAT activity colorimetric assay were used to measure the inhibition of core histone acetylation. The inhibitory effect of lunasin on the phosphorylation of retinoblastoma protein (Rb) was determined by immunoblotting against phospho-Rb. Lunasin isolated from autoclaved SNL inhibited core histone H3 and H4 acetylation, the activities of the HATs, and the phosphorylation of the Rb protein. Lunasin in the crude protein and in the autoclaved crude protein was very stable to pepsin and pancreatin in vitro digestion, while the synthetic pure lunasin was digested at 2 min after the reaction. We conclude that lunasin is a bioactive and bioavailable component in SNL and that consumption of SNL may play an important role in cancer prevention. 相似文献