利用陆海杂种BC1群体构建棉花遗传连锁图谱并初步定位产量性状相关的QTL   总被引：1，自引：0，他引：1  

李骏智  杨泽茂  李俊文  石玉真  刘爱英  陈琴  李爱国  张保才  刘广平  蒋建雄  王涛  袁有禄 《中国农学通报》2009,25(9)

利用陆地棉推广品种中棉所36和海1配制杂交组合,并用中棉所36为轮回亲本构建回交群体(BC1F1,BC2F1和BC1S1).用亲本和F1对新开发的2102对SSR引物进行多态性筛选,共筛选到317对含有海1显性带的引物,占筛选引物总数的15.08%;最终对其中的275对引物进行了BC1F1群体扩增,获得306个SSR标记差异位点.连锁分析表明(LOD=6.5),有254个标记位点连锁,分布在42个连锁群中,覆盖2252.36 cM,约占棉花基因组的50.05%;平均每个连锁群有6.08个标记,覆盖53.63 cM;标记间平均间距为8.87 cM.利用BC1F1、BC2F1和BC1S1三个不同世代分离群体产量性状数据,共定位16个产量性状QTL,解释表型变异5.77%/～19.86%.其中,衣分6个,铃重6个,籽指4个.有9个增效基因来自陆地棉亲本中棉所36,7个增效基因来自海岛棉亲本海1,说明了表型性状较差的品种同样可能含有可用于性状改良的增效基因.控制衣分的3个QTL可在不同的世代稳定检测到,效应稳定,增效基因均来自高值亲本陆地棉,为进一步分子标记辅助选择奠定了基础.  相似文献   

鸡传染性支气管炎病毒Real-time RT-PCR检测方法的建立及应用   总被引：1，自引：1，他引：0  

王鹏 高峰 王园杨莹  路红周双海  刘凤华 《中国农学通报》2013,29(8):45-49

为定量检测鸡传染性支气管炎病毒(IBV)载量,建立IBV的Real-time RT-PCR方法.用RT-PCR方法扩增出IBV的N基因片段,并克隆到pEASY-T3载体中,构建成含有N基因片段的重组质粒.应用该重组质粒进行SYBR Green I Real-time PCR,建立了定量检测IBV核酸的标准曲线与直线回归方程,该方法显示:特异性强,检测下限至少达到5.58× 102拷贝/μL,其重复性试验的变异系数小于3.2％;用建立的方法对实验接种IBV M41株的雏鸡组织中的病毒核酸进行了定量检测,检测结果显示:攻毒后肾脏中IBV含量高于支气管和肺脏,支气管和肺脏中病毒含量在攻毒后第3天高于攻毒后第7、10天,并证实临床表现与病毒载量之间存在密切关系.研究结果表明,建立的Real-time RT-PCR检测方法特异性强、灵敏度高、可重复性好,可用于IBV的定量检测.  相似文献   

毕赤酵母表达的猪传染性胃肠炎病毒纤突糖蛋白及其免疫原性分析     

《华北农学报》2015,(6)

为了获得具有良好免疫活性的基因工程抗原蛋白,利用毕赤酵母真核表达系统,表达猪传染性胃肠炎(河北分离株)的纤突糖蛋白。根据Gen Bank TGEV S基因设计一对引物,经PCR扩增出长2.2 kb的目的基因S,将S基因亚克隆于p PIC9k载体,转化TOP10感受态,PCR、酶切鉴定阳性克隆,SalⅠ线性化重组穿梭质粒pPIC9k-S,然后电转GS115感受态,利用G418抗性进行多拷贝整合子初步筛选,提取基因组并做PCR鉴定,得到阳性菌株,经诱导发酵后,上清发酵液经SDS-PAGE电泳检测,显示获得分子量为82 kDa左右的目的蛋白,同时用Western-Blotting检测到一条特异的目的条带;用目的蛋白免疫小鼠,ELISA检测免疫S蛋白小鼠血清抗体效价为1∶100,表达蛋白具有免疫活性。  相似文献   

猪流感H3N2亚型HA 基因真核表达载体构建及其对小鼠的免疫效果的研究     

刘雪芹  郭万柱 《中国农学通报》2009,25(22)

采用PCR方法扩增出猪流感病毒四川分离株H3N2亚型HA全基因,将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)上,成功构建出真核重组质粒pcDNA3.1-HA.采用纯化后的pcDNA3.1-HA质粒和灭活全病毒以不同的组合免疫4～6周龄的Balb/c小鼠,免疫2次间隔3周,加强免疫3周后,小鼠接种致死量的H3N2病毒;检测免疫后小鼠的血清抗体水平及攻毒后肺部病毒残留.结果表明,pcDNA3.1-HA质粒和灭活全病毒免疫小鼠后,均能够产生一定的免疫效果,能为小鼠提供H3N2亚型猪流感病毒保护.  相似文献   

绵羊FecB基因的原核表达及其抗体制备     

丁强  张利平  贾建磊  王静  张勇 《华北农学报》2015,(3)

为了进一步研究FecB基因,利用PCR-RFLP技术筛选出FecB基因,PCR扩增FecB基因编码区序列1509bp,利用限制性内切酶BamHⅠ和EcoRⅠ定向插入原核表达载体pET30a(+),构建原核表达载体pET30a(+)-FecB,诱导表达纯化重组蛋白,免疫小鼠制备多克隆抗体,WesternBlot检测重组蛋白的免疫活性,ELISA检测抗体效价。结果表明,成功的构建了绵羊FecB基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中表达目的蛋白,经过4次免疫后,获得多克隆抗体,ELISA方法检测小鼠抗体免疫效价达到1∶32000,纯化的蛋白具有免疫活性。为研究绵羊FecB基因蛋白的功能提供参考。  相似文献   

鸡传染性支气管炎病毒RT-PCR快速检测方法的建立   总被引：1，自引：1，他引：0  

刘金朋商艳红  陈红英王淑娟王子馨  王亚丹师丽刚 《中国农学通报》2011,27(3):342-346

根据鸡传染性支气管炎病毒(IBV) N基因序列（FJ767920）,利用引物软件Premier5.0,设计并合成了1对特异引物,通过对RT-PCR扩增条件的优化,建立了一种快速检测IBV的RT-PCR方法。应用该方法成功地从IBV M41和河南株HN99中扩增出318 bp的目的片段,而传染性喉气管炎病毒、新城疫病毒及马立克病毒基因组均未扩增为出相应的片段。将回收的RT-PCR产物克隆到pGEM-T Easy载体后测序,进一步证实RT-PCR检测方法的特异性。对IBV的最低检出量为0.6 pg的cDNA。经临床初步应用表明,本方法的建立对IBV的早期诊断和临床检测具有快速、灵敏、特异、经济的特点。  相似文献   

抗玉米螟基因Cry1A.301原核表达和玉米遗传转化     

王 慧杨小艳  翁建峰等 《作物杂志》2014,(2):34-38

增强玉米品种的抗虫性是减少玉米螟为害、提高玉米产量的有效途径。通过密码子优化改造获得抗虫基因Cry1A.301,构建原核表达载体pET30a-Cry1A.301,进行蛋白免疫学、ELISA检测以及玉米螟抗性生测。结果表明,原核表达载体中Cry1A.301蛋白高效表达,且7d后杀虫效率达100%。通过Cry1A.301基因与植物表达载体CPB连接,构建CPB-35S∶∶Cry1A.301-35S∶∶bar载体进行农杆菌介导的玉米萌动胚遗传转化,得到12株T0代转基因植株。T0代植株叶片中目的基因、筛选标记bar基因的PCR检测与蛋白免疫学检测结果表明,Cry1A.301基因已经整合到玉米基因组并表达。  相似文献   

猪瘟病毒DNA疫苗的构建及动物免疫试验   总被引：1，自引：0，他引：1  

许信刚  胡建和  张彦明 《中国农学通报》2005,21(3):9-9

利用DNA重组技术将猪瘟病毒（CSFV） C株E2囊膜蛋白全长基因克隆到真核表达载体pcDNA4.0的CMV启动子下游,采用磷酸钙转染法将重组质粒转入293T细胞,流式细胞仪(FACS)检测293T细胞瞬时表达了E2囊膜蛋白。将构建的重组质粒肌肉注射BALB/c小鼠,用流式细胞仪和酶联免疫吸附试验（ELISA）检测证明成功诱导小鼠产生了抗E2蛋白的抗体,为下一步利用DNA疫苗免疫小鼠研制抗猪瘟病毒单克隆抗体打下基础。  相似文献   

禽流感病毒H9N2亚型HA蛋白在水稻胚乳中的稳定、高效表达及活性鉴定     

赵翔玥  张二芹  许倩茹  马凡舒  王雅楠  牛香香  李雪洋  张申立  张同旭  邓瑞广  张以芳  张改平 《华北农学报》2020,35(4):230-238

为了在体外获得表达量高、储存容易、成本低且免疫活性高的H9N2亚型HA蛋白,利用水稻胚乳表达系统表达HA蛋白。首先,将HA基因根据水稻偏好密码子进行优化,合成到pUC57载体上,通过双酶切、连接将HA基因先后构建到中间载体pMP3和植物表达载体pCAMBIA1300上;再通过电极法将pCAMBIA1300-HA导入到根癌农杆菌EHA105中;然后用农杆菌侵染TP309水稻愈伤组织;最后经潮霉素筛选、分化、生根、移栽至田间种植。利用CTAB法提取叶片基因组DNA,PCR鉴定T_0阳性植株;利用Dot Blot和Western Blot检测HA蛋白在水稻胚乳中的表达;提取阳性的T_1叶片DNA,通过荧光定量PCR方法筛选纯合植株;利用温汤杀雄剪颖授粉法,将含有HA蛋白的TP309与低谷蛋白水稻杂交;利用Western Blot检测杂交后的T_3植株蛋白表达量;利用双抗夹心ELISA方法比较水稻源和昆虫表达HA蛋白的活性。结果显示,成功构建了中间载体pMP3-HA和植物表达载体pCAMBIA1300-HA,且pCAMBIA1300-HA成功导入到根癌农杆菌EHA105中;PCR检测到有66株植株的HA基因成功整合到水稻基因组;Dot Blot和Western Blot检测结果表明,HA蛋白在水稻胚乳中成功表达;利用荧光定量PCR方法,107株T_1中筛选到31株纯合植株;Western Blot检测结果表明,杂交后的HA蛋白表达量大幅度提高;双抗夹心ELISA结果证实,水稻胚乳表达的HA蛋白的活性高于杆状病毒-昆虫细胞。  相似文献   

犬瘟热病毒核衣壳蛋白基因免疫小鼠诱导抗体的研究     

李晓叶 刘颖艾纯旭  袁宝文力正  陈承祯陈健 任文陟 《中国农学通报》2011,27(3):360-364

将犬瘟热病毒(Canine distemper virus, CDV)核衣壳蛋白基因(Nucleocapsid protein, N)的N蛋白基因克隆到pMD-18T载体,经酶切分析测序获得阳性重组质粒。采用EcoRⅠ和KpnⅠ双酶切后定向克隆进真核表达载体pcDNA中,电泳测序筛选阳性克隆pcDNA-N,转染COS-7细胞,IFA验证结果显示转染的COS-7细胞胞浆中表达了CDV的N蛋白。与弗氏佐剂乳化完全后将重组质粒pcDNA-N腹腔注射8周龄BABL/c小鼠,同时设pcDNA原载体做阴性对照,2周为间隔共免疫3次,三免两周后采血,ELISA检测效价。结果显示：pcDNA-N试验组抗体滴度为101.62±0.164,对照组为100.52±0.56。表明犬瘟热病毒核衣壳蛋白基因免疫小鼠可诱导机体产生特异性体液免疫。  相似文献   

HBV RNA复制子疫苗、DNA疫苗在BHK-21细胞中表达情况的比较     

李莉  任林柱  张英  杨东  闫森  李小平  高飞  肖雪斌  欧阳红生  逄大欣 《中国农学通报》2010,26(10):17-20

为建立更有效的乙肝疫苗,通过将所构建的HBVRNA疫苗和DNA疫苗分别转染BHK-21细胞,并比较其在细胞中表达情况及细胞凋亡现象。以pSFV为基础构建的疫苗载体的表达效率高于以pcDNA3.1为基础构建的疫苗载体,pSFV为基础构建的疫苗载体出现细胞凋亡的现象。HBVRNA疫苗比DNA疫苗表达效果更好,安全性更高,更具有应用前景。  相似文献   

一株鸡传染性支气管炎病毒地方分离株膜蛋白基因的遗传变异分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

闫芳  岳文斌  吉文汇  李绪英  赵宇军  刘娟  刘风波  吴倩  任家琰  化丽珍 《中国农学通报》2009,25(12):10-13

摘要：对从山西省分离到的1株IBV (IBVSX16)的膜蛋白基因片段进行序列测定及分析,结果发现, IBVSX16株膜蛋白基因含有一个长681bp的ORF,编码226个氨基酸残基组成的多肽,与疫苗株H120和我国分离株LX4推导的氨基酸序列比对发现,存在基因突变现象,未发现缺失和插入现象,变异主要发生在2~l7位。系统进化关系显示19株IBV毒株分属于5个群。IBVSX16株位于第II群,我国IBV分离毒株主要集中在第III群和第Ⅳ群,具有较明显的地理区域性,可见IBV分离株在基因进化关系上形成了自己较为独立的进化群。关键词：鸡传染性支气管炎病毒;M基因;遗传变异  相似文献   

O型口蹄疫病毒蛋白酶3C基因在哺乳细胞中的表达   总被引：1，自引：1，他引：0  

马琪陈豪泰  薛慧文 《中国农学通报》2014,30(20):17-20

为构建O型口蹄疫病毒(FMDV)蛋白酶3C基因的真核表达质粒,并在BHK-21细胞中进行表达,以RT-PCR扩增O型口蹄疫病毒蛋白酶3C基因,利用XhoⅠ和HindⅢ限制性内切酶将3C基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1(-),通过脂质体法转染重组质粒pcDNA3.1(-)-3C。PCR,双酶切鉴定及测序结果表明：重组质粒pcDNA3.1(-)-3C构建成功;Western-blot分析结果表明：重组质粒pcDNA3.1(-)-3C在BHK-21细胞中能够表达O型FMDV蛋白酶3C基因。该真核表达质粒的构建,为进一步研究O型口蹄疫空衣壳的体外组装以及O型口蹄疫空衣壳疫苗的开发建立了实验基础。  相似文献   

基因枪法转Bt/GNA基因超甜玉米植株的获得及抗虫性鉴定   总被引：1，自引：0，他引：1  

李余良  胡建广  苏菁  刘建华  李敦松 《分子植物育种》2007,5(4):461-466

以超甜玉米自交系S1幼胚诱导的愈伤组织为受体材料,利用基因枪法共转化Bt和GNA基因,获得了128株再生植株,移栽成活31株,其中26株可育.经PCR检测外源基因整合进玉米基因组中,含Bt基因11株,其中有5株能扩增出GNA基因.Southern杂交证明,目的基因已经整合在玉米基因组中.对9株转基因T1代植株叶片室内接虫抗性鉴定,结果显示,5株转基因植株叶片饲喂6 d后明显抑制玉米螟幼虫的发育,幼虫体重增加较少,幼虫死亡率高,表现较强的抗性.  相似文献   

水稻稻瘟病菌诱导表达启动子OsQ16p的克隆与功能分析     

王光  吴智丹  张磊  刘凤权  邵敏 《作物学报》2012,38(6):980-987

qRT-PCR分析表明,日本晴OsQ16基因受稻瘟病菌诱导表达。利用PCR技术从日本晴基因组中克隆了该基因编码区5′端上游1 229 bp的启动子序列,命名为OsQ16p。用其取代pBI121中gus基因上游的CaMV35S启动子,构建重组表达载体pBIQ16p,经农杆菌介导转化日本晴,获得转基因植株。GUS组织化学染色和qRT-PCR分析表明: (1) gus基因在抗性愈伤组织和阳性转基因植株中均能表达; (2)转基因植株在接种稻瘟病菌后12 h,GUS表达量是处理前的2.7倍; (3)抗病相关信号分子水杨酸(salicylic acid,SA)和茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)喷施转基因植株叶面后12 h,GUS表达量分别为处理前的3.1倍和3.5倍。以上结果表明,OsQ16p启动子具有启动活性,并明显受稻瘟病菌、MeJA和SA诱导表达。  相似文献   

18个甘肃地方梨品种S基因型鉴定及新S-RNase基因克隆     

徐非凡 衡伟周宏胜  张绍铃 《中国农学通报》2014,30(1):138-142

为鉴定甘肃地方梨品种的自交不亲和基因型（S基因型）,利用梨自交不亲和基因的特异引物对18个梨品种基因组DNA进行特异PCR扩增,对扩增片段进行回收、克隆和测序,确定了14个梨品种的S基因型。结果如下:‘临夏香把’S₁₂S₂₁、‘甘谷黑梨’S₁₆ S₅₄、‘康乐白果’S_bS_i、‘武都甜梨’S₂₆S_i、‘临夏黄麻’S₃S_e、‘康乐酥木梨’S₁S_h、‘临夏萨拉’S₁₆S_e、‘九泉长把梨’S₆S₂₂、‘临姚麻甜梨’S₂₂S_d、‘九泉麦梨’S₆S₁₇、‘漫路窝窝果’S₁₂S₂₁、‘武山糖梨’S₈S₁₉、‘康乐甘长把’S₂₂S_d、‘河政甘长把’S₂₂S_d。品种‘甘谷香水’和‘礼县新八盘’含有S_e基因,‘临夏大吊蛋’和‘甘谷红霞’分别含有1个S₂₆、S₁₆基因。在‘甘谷黑梨’中发现1个新S等位基因,暂定名S₅₄。该结果为研究梨属不同种间S-RNase基因的进化、田间授粉树的配置和新品种的选育等提供参考。  相似文献   

自交亲和苹果品种S基因型的鉴定     

张雪梅  李保国  秦立者  齐国辉  郭素萍 《华北农学报》2009,24(5)

为了探讨苹果自交亲和的发生机理,根据保守氨基酸序列"FTQQYQ"和"anti-1/WⅠPNV"设计了苹果花柱S基因的通用引物:P1:5＇-TTTACGCAGCAATATCAG-3＇;P2:5＇-ACGTTCGGCCAAATA/CATT-3＇,根据 GeneBank登陆的花粉SLF1(DQ422810)、SLF9(AB270792)基因设计了花粉S基因的引物分别为:P SLF1(上游5＇-3＇:CTGGTGGTGTTCTTTCCTGTGTAT;下游5＇-3＇:ACTTAACTCTTCCCTCAACTCA)和P SLF9(上游5＇-3＇CAGGTGCGTGAAAGTGAAA;下游5＇-3＇:TGAGCCAAGCATAAGAACCT),以自交亲和的苹果品种早红香为试验材料,利用PCR-RFLP、克隆、测序等方法研究早红香苹果发生自交亲和的分子性状.结果表明:自交亲和的早红香苹果2条花柱S基因没有发生变异.经BLAST比较,由花粉S基因引物P SLF1 和P SLF9扩增得到的花粉S基因的DNA序列,与MdSLF2 和MdSLF9 基因DNA序列的相似性分别为94%和96%,推导氨基酸序列相似性分别为94%和97%.由P SLF1扩增得到的花粉S基因SLF1?与MdSLF1的DNA序列相似性仅为83%,且二者不一致的碱基分布于整个DNA序列中,自交亲和苹果品种早红香花粉SLF1?基因可能变异为了MdSLF2.  相似文献   

转IPT基因油菜提高抗蚜虫能力     

李海林  赵德刚 《分子植物育种》2011,9(3):343-349

本研究利用农杆菌介导IPT(isopentenyl-transferases,异戊烯基转移酶)基因转化喀斯特特有甘蓝型油菜自交品种S65,在无激素的筛选培养基中获得再生植株14株,PCR检测12株外源基因整合入油菜基因组中.对其中5株转基因植株及5株野生型植株人工接种蚜虫试验,研究超量表达IPT基因油菜对蚜虫的抗性.结...  相似文献   

鸡白痢沙门氏菌与鸡伤寒沙门氏菌基因组消减文库的构建     

徐耀辉  焦新安  李求春  潘志明  黄金林 《中国农学通报》2007,23(7):15-15

为了解鸡白痢沙门氏菌与鸡伤寒沙门氏菌的基因组差别,筛选鸡白痢沙门氏菌特有的序列,利用SSH对鸡白痢沙门氏菌C79-13（实验方）与鸡伤寒沙门氏菌Sg9（驱动方）基因组进行了比较。选择四碱基内切酶Rsa I将C79-13与Sg9基因组DNA酶切,酶切的C79-13基因组DNA分成两份,分别与接头1和接头2R连接,然后进行两轮杂交和两轮PCR ,得到消减混合物, 将其与PCR?2.1克隆载体连接,转化感受态E.coli DH5α建立消减文库。结果共获得400个阳性克隆;筛选240个克隆制备质粒进行PCR检测,均扩增出100～2000 bp大小的片段。差异DNA消减文库的构建为进一步筛选、克隆鸡白痢沙门氏菌特异的未知新基因、建立分子鉴别新体系奠定了基础。  相似文献