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1.
采用固相亚磷酸三酯法人工化学合成了人胰岛素样生长因子－Ⅰ（ｈｕＩＧＦ－Ｉ）基因的４条寡核苷酸 片段，再通过片段１、２与３、４末端互补配对和Ｋｌｅｎｏｗ酶促补平及酶切连接成为完整的ｈｕＩＧＦ－ＩＤＮＡ片段，用 ＥｃｏＲ Ｉ／ＰｓｔＩ酶切后克隆于 ｐＧＥＭ Ｔ－Ｅａｓｙ Ｖｅｃｔｏｒ，经测序证明所得 ＤＮＡ序列与设计的序列完全一致；选用植物 偏爱密码子校正了启始密码子ＡＴＧ下游的６个密码子，并在ＡＴＧ处增加Ｋｏｚａｋ序列后，插入ｐＢＩ１２１的ＢａｍＨＩ／ ＳａｃＩ位点，构建了以 ３５Ｓ为启动子的植物表达载体；以 Ｈｉｎｄ ＩＩ／ＥｃｏＲＩ切下“３５Ｓ－Ｋｏｚａｋ－ＩＧＦ－Ｉ－ＮＯＳ（ｔｅｒ．）”插入 ｐＣＡＭＢＩＡ２３００之Ｈｉｎｄ ＩＩ／ＥｃｏＲ Ｉ位点，构建成ｈｕＩＧＦ－Ｉ植物表达载体；通过ＣａＣｌ２直接转化法将表达载体导入农 杆菌ＥＨＡ１０５（Ｒｉｆ．ｒ），并以菌落原位杂交技术和 ＤＮＡ ｄｏｔ ｂｌｏｔ对重组农杆菌进行了筛选，所获得的重组农杆菌菌株为培育ｈｕＩＧＦ－Ｉ豆药用植物奠定了基础。 相似文献
2.
家蚕核多角体病毒Lef—1和DA26基因的克隆及部分序列分析 总被引：2，自引：1，他引：2
ｌｅｆ－１和ＤＡ２６基因分别位于ｅｇｔ基因的上游和下游．从ｐＵＡｃ－ｅｇｔ中分离出ＥｃｏＲＩ－ＸｂａＩ１．１ｋｂ的ｅｇｔ基因片段，进行缺口平移标记，获得探针。与ＢｍＮＰＶＤＮＡ经ＨｉｎｄⅢ酶切、电泳、转移至ＮＣ膜的ＤＮＡ进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交，发现ＢｍＮＰＶＤＮＡ的ＨｉｎｄⅢＤ片段呈阳性。从ＢｍＮＰＶ基因组中分离出１０．４ｋｂ的ＨｉｎｄⅢＤ片段，用ＥｃｏＲＩ酶切得到ＨｉｎｄⅢ－ＥｃｏＲＩ２．２ｋｂ、ＥｃｏＲＩ１．４ｋｂ和ＥｃｏＲＩ－ＨｉｎｄⅢ６．８ｋｂ３个片段，分别克隆于ｐＵＣ１９中，命名为ｐＵＨＥ２．２、ｐＵＥ１．４和ｐＵＥＨ６．８。经双链测序并与ＡｃＮＰＶ相关基因序列进行比较，发现ｌｅｆ－１基因被克隆于ｐＵＨＥ２．２中，ＤＡ２６基因克隆于ｐＵＥＨ６．８中。从所测定的ｌｅｆ－１和ＤＡ２６基因的启动子及５＇端部分序列来看，它们在ＡｃＮＰＶ和ＢｍＮＰＶ之间有极高的同源性。 相似文献
3.
分别制备了遗传工程稻ＧＥＲ－１及其ＤＮＡ供体（慈利玉米）、ＤＮＡ受体（水稻湘早籼８号）的叶绿体ＤＮＡ（ｃｐＤＮＡ），对三者之间的多种限制性内切酶酶切图谱比较表明，ＧＥＲ－１的ｃｐＤＮＡ基本与ＤＮＡ受体水稻一致。进一步克隆了ＣＥＦ－１的ｐｓｂＡ基因，并构建其酶切图谱、测定其３＇非翻译区（３＇ＵＴＲ）序列，初步认为该基因的序列结构与水稻相同，从而排除了ＧＥＲ－１的性状变异是由其ｐｓｂＡ基因发生变化所致 相似文献
4.
以稃尖紫红色的Ｖ２０Ａ（Ｂ）分别与稃尖无色的珍鼎２８Ａ（Ｂ）、５４６０、ＩＲ５４和ＩＲ３０杂交，获得Ｆ１、Ｆ２、Ｂ１Ｆ１、Ｂ２Ｆ１以及三亲本杂交群体．研究发现，Ｆ１稃尖紫红色对稃尖无色完全显性，Ｆ２因组合不同呈不同的比例分离．Ｖ２０Ａ（Ｂ）／ＩＲ３０Ｆ２分离为３紫红色１无色；Ｖ２０Ａ（Ｂ）／５４６０Ｆ２和Ｖ２０Ａ（Ｂ）／ＩＲ５４Ｆ２呈４５紫红色１９无色分离；而Ｖ２０Ｂ／珍鼎２８ＢＦ２则呈１６２紫红色９４无色分离．为合理地解释上述分离现象，可以假定控制这些亲本稃尖颜色的主效基因至少有３对Ｐ１ｐ１、Ｐ２ｐ２、Ｐ３ｐ３．Ｐ１、Ｐ２和Ｐ３为控制花青素在稃尖分配的基因．当显性的色素源基因Ｃ和激活基因Ａ存在时，至少两个显性的Ｐ基因互补，植株才能表现稃尖紫红色，即紫红色稃尖的基因型为：Ｃ＿Ａ＿Ｐ１＿Ｐ２＿Ｐ３＿、Ｃ＿Ａ＿ｐ１ｐ１Ｐ２＿Ｐ３＿、Ｃ＿Ａ＿Ｐ１＿ｐ２ｐ２Ｐ３＿、Ｃ＿Ａ＿Ｐ１＿Ｐ２＿ｐ３ｐ３．椐此，可暂定这７个亲本的５种核基因型为：ＣＣＡＡＰ１Ｐ１Ｐ２Ｐ２Ｐ３Ｐ３〔Ｖ２０Ａ（Ｂ）〕、ｃＡＡｐ１ｐ１ｐ２ｐ２ｐ３ｐ３〔珍鼎２８Ａ（Ｂ）〕、ｃＡＡＰ１Ｐ１ｐ２ｐ２ｐ３ｐ３（５４６０）、ｃＡＡＰ１Ｐ１ｐ２ｐ２ｐ３ｐ３（ 相似文献
5.
含有IBV S1基因的昆虫杆状病毒表达载体的构建 总被引：4，自引：0，他引：4
以含有鸡传染性支气管炎病毒Ｈｏｌｔｅ株Ｓ１基因的重组质粒ｐＵＣ１８－Ｓ１．Ｈｏｌｔｅ和ｐＵＣ１８－Ｓ‘１．Ｈｏｌｔｅ为材料,分别构建了可表达ＩＢＶ Ｓ１基因的昆虫杆状病毒转移载体质粒ｐＳＸＩＶＶＩ＾＋Ｘ３－Ｓ１．Ｈｏｌｔｅ（含ＩＢＶ先导序列）,ｐＳＸＩＶＶＩ＾＋Ｘ３／４－Ｓ１．Ｈｏｌｔｅ（ＩＢＶ先导序列为融合短肽）,ｐＡｃＧＨＬ－Ｃ－Ｓ１,Ｈｏｌｔｅ。 相似文献
6.
鸡白细胞介素-2 cDNA克隆 总被引：7，自引：1，他引：7
用哺乳动物细胞表达克隆系统克隆了鸡ＩＬ－２ｃＤＮＡ。以ＣｏｎＡ（２０μｇ／ｍＬ）诱导ＳＰＦ鸡脾脏淋巴细胞,第２０小时收集细胞,提取ｍＲＮＡ,以ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔＰｌａｓｍｉｄＳｙｓｔｅｍｆｏｒｃＤＮＡＳｙｎｔｈｅｓｉｓ试剂盒合成ｃＤＮＡ,定向连结于穿梭质粒ｐＳＶ·ＳｐｏｒｔⅠ,构建ｃＤＮＡ文库。将文库分组提取重组质粒,转染ＣＯＳ－７细胞,表达ｃＤＮＡｓ。以淋巴细胞增殖试验检测表达产物ＩＬ－２活性。经过３轮筛选,获得１４个具有ＩＬ－２活性的克隆。选择其中４个进行酶切分析,结果显示这４个ｃＤＮＡ大小分别为１．５,１．０,０．８和０．８ｋｂ。 相似文献
7.
分别制备了遗传工程稻ＧＥＲ－１及其ＤＮＡ供体（慈利玉米）、ＤＮＡ受体（水稻湘早籼８号）的叶绿体ＤＮＡ（ｃｐＤＮＡ），对三者之间的多种限制性内切酶酶切图谱比较表明，ＧＥＲ－１的ｃｐＤＮＡ基本与ＤＮＡ受体水稻一致．进一步克隆了ＣＥＲ－１的ｐｓｂＡ基因，并构建其酶切图谱、测定其３′非翻译区（３′ＵＴＲ）序列，初步认为该基因的序列结构与水稻相同，从而排除了ＧＥＲ－１的性状变异是由其ｐｓｂＡ基因发生变化所致的可能．此外，对叶绿体ＤＮＡ的制备及酶切消化作了较深入的探讨 相似文献
8.
新城疫病毒F48E8株cDNA文库的构建 总被引：2，自引：0，他引：2
以ＳＰＦ鸡胚繁殖我国标准新城疫病毒Ｆ４８Ｅ８强毒株，经蔗糖密度梯度超速离心纯化病毒。再以酚－ＳＤＳ法提取病毒基因组ＲＮＡ，作为反就模板，采用Ｐｒｏｍｅｇａ公司商品试剂合成双股ｃＤＮＡ。以同聚物加尾的方法将ｃＤＮＡ克隆 粒ｐＧＥＭ ３Ｚｆ中，经ＡＩＸ平板筛选，限制性内切酶分析和Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记的核酸探针检测，共获得插入外源片段大小在０．６－４．８ｋｂ的阳性克隆７５个，初步构建了Ｆ４８Ｅ８株 相似文献
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肠炎沙门氏菌鞭毛蛋白基因快速克隆和鉴定 总被引：1，自引：0，他引：1
以提纯的肠炎沙门氏菌染色体ＤＮＡ为材料,在一对含有ＣＵＡＣＵＡＣＵＡＣＵＡ的特殊引物引导下,应用ＰＣＲ扩增出鞭毛蛋白基因ｆｌｉＣｇ．ｍ,允１．８ｋｂ左右大小,然后以ＵＤＧ法快速克隆到质粒,ｐＡＭＰ１０中,转化第１宿主大肠杆菌ＴＧ１或大肠杆菌ＤＨ５ａ,在氨苄青霉素平板上筛选转化子,小量制备重组质粒ＤＮＡ,再转入第２宿主大肠杆菌ＬＣ－２ａ（ｈａｇ－,ｒｅｃＡ－）,所有转化子均出现动力。其中的一个克隆ｐ 相似文献
11.
将组织型纤溶酶原激活剂基因ｃＤＮＡ经多次亚克隆插入到真核表达载体ｐＳＶＬ的ＳＶ４０启动子和ｐｃＤＮＡ３的ＣＭＶ启动子下游,构建了重组表达质粒ｐＳＶＬ－ｔＰＡ和ｐｃＤＮＡ３－ｔＰＡ。经酶切和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交鉴定,ｔ－ＰＡ基因的插向正确,可用于哺乳动物细胞和个体表达系统中表达。 相似文献
12.
将重组ＤＮＡ导入细菌细胞是分子克隆的中心工作之一．转化率的高低直接关系到实验成败．使用３种质粒ｐＢＲ３２２、ｐｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ和ｐＵＣ１８，对３种大肠杆菌菌株进行转化，比较转化率，推荐使用１００ｍｍｌ／ＬＣａＣｌ２，ｐＨ６～８和４℃１２ｈ作为转化的优选条件。 相似文献
13.
新城疫病毒F_（48）E_8株cDNA文库的构建 总被引：1，自引：0，他引：1
以ＳＰＦ鸡胚繁殖我国标准新城疫病毒Ｆ＿（４８）Ｅ＿８强毒株，经蔗糖密度梯度超速离心纯化病毒。再以酚－ＳＤＳ法提取病毒基因组ＲＮＡ，作为反应模板、采用Ｐｒｏｍｅｇａ公司商品试剂盒合成双股ｃＤＮＡ。以同聚物加尾的方法将ｃＤＮＡ克隆到质粒ｐＧＥＭ３Ｚｆ（一）中，经ＡＩＸ平板筛选，限制性内切酶分析和Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记的核酸探针检测，共获得插入外源片段大小在０．６～４．８ｋｂ的阳性克隆７５个，初步构建了Ｆ＿（４８）Ｅ＿８株的ｃＤＮＡ文库 相似文献
14.
本实验所用的马传染性贫血病毒（ＥＩＡＶ）Ｌ株（ＥＩＡＶ－Ｌ）是我国研制成功的ＥＩＡＶ弱毒疫苗的原始强毒株。以ＥＩＡＶ－Ｌ感染马外周血液白细胞中ＤＮＡ为模板，利用ＰＣＲ技术，分４个片段扩增ＥＩＡＶ－Ｌ前病毒ＤＮＡ，并分别克隆到载体质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＳＫ中，得到 ４个重组质粒ｐ２．８、ｐ２．４、ｐ３．１和 ｐ１．２，经酶切鉴定后测序。对测序结果分析、拼接，得到 ＥＩＡＶ－Ｌ前病毒基因组全序列。ＥＩＡＶ－Ｌ前病毒基因组全长 ８２３５ｂｐ，其中 Ｇ＋Ｃ含量为 ３８％。通过使用计算机软件ＤＮＡＳＩＳ分析，ＥＩＡＶ－Ｌ与马传贫驴强毒和马传贫驴白细胞疫苗毒序列同源性分别为９８．４％和９６．９％。同源性如此接近反映了它们之间的亲缘关系，另外 ＥＩＡＶ－Ｌ与驴强毒的同源性高于其与驴白细胞弱毒疫苗株的同源性，这符合驴白细胞弱毒疫苗株的衍生过程。基因组两端是长为３１６ｂｐ的ＬＴＲ，其中Ｕ３为１９７ｂｐ，Ｒ为８０ＢＰ，Ｕ５为３９ｂｐ。前病毒基因组有 ３个较大的开放阅读框架（ＯＲＦ），分别编码 ｇａｇ、ｐｏｌ和 ｅｎｖ基因。ｇａｇ基因位于 ７１３～１９１２位碱基之间，全长１２００ｂｐ；ｐｏｌ基因位于 １７０８～５１０９位碱基之间，全长 相似文献
15.
利用含有苜蓿花叶病毒中国分离株（ＡＩＭＶ－Ｃｈ）复制酶（Ｐ２亚基）基因编码区５’端ｃＤＮＡ（１３０６ｂｐ）的重组质粒ｐＡＭ５和编区３’端及其非编码区（１２３４ｂｐ的重组质粒ｐＡＭ３构建了含有复制（Ｐ２亚基）基因全长ｃＤＮＡ及其３’端非编码区的重组质粒ｐＡＭ３５,并将其重组于植物表达载体ｐＧＡ６４３,构建其正链ＲＮＡ的表达载体ｐＧＡ３５,为进一步开展转基因研究创造条件。 相似文献
16.
本文作者构建了ｐＸＭ１和ｐＧＣＹ６两个质粒，其中质粒ｐＸＭ，含有高赖氨酸基因和ＧＵＳ报告基因，质粒ｐＧＣＹ６则由裂解多肽Ｃｅｃｒｏｐｉｎ Ｂ基因和ＧＵＳ基因组成。这两个基因均以ＣａＭＶ３５Ｓ作为启动子，以ＮＯＳ作为终止子。经纯化的质粒ＤＮＡ以ＰＥＧ法导入４个水稻品种：８９－２、Ｌａｃｃａｓｉｎ、Ｃｙｐｒｅｓｓ、台北３０９细胞悬浮系的原生质休中，组织化学检测结果表明，ＧＵＳ基因在原生质体、愈伤组织及 相似文献
17.
以提纯的肠炎沙门氏菌染色体ＤＮＡ为材料,在一对含有ＣＵＡＣＵＡＣＵＡＣＵＡ的特殊引物引导下,应用ＰＣＲ扩增出鞭毛蛋白基因ｆｌｉＣｇ,ｍ,约１．８ｋｂ左右大小,然后以ＵＤＧ法快速克隆到质粒ｐＡＭＰ１０中,转化第１宿主大肠杆菌ＴＧ１或大肠杆菌ＤＨ５α,在氨苄青霉素平板上筛选转化子,小量制备重组质粒ＤＮＡ,再转入第２宿主大肠杆菌ＬＣ－２ａ（ｈａｇ－,ｒｅｃＡ－）,所有转化子均出现动力。其中的一个克隆ｐＡＭＰ·ＧＭ经动力和动力抑制试验、血清学试验、鞭毛电镜观察及部分序列测定,均证实ｐＡＭＰ·ＧＭ中载有肠炎沙门氏菌鞭毛蛋白基因ｆｌｉＣｇ,ｍ。ｆｉｌＣｇ,ｍ克隆成功为寻求肠炎沙门氏菌防制新方法奠定了基础,研究中建立的快速克隆策略为广泛、深入地开展ｆｌｉＣ研究提供了便捷的新途径。 相似文献
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河南丝核菌分组和致病性研究 总被引：4，自引：0，他引：4
从小麦、玉米，水稻和土壤中共分离出３９个丝核菌株，其中有双核菌株２２个，多核菌株１６个，经与标准菌株配合测定，可划分为９个融合组，有２个菌株待定，这９个融合组是ＡＧ－Ｄ组１１个，ＡＧ－１－１Ａ组６个，ＡＧ－Ｂａ组５个，ＡＧ－Ｅ组５个，ＡＧ－４组３个，ＡＧ－５组２个；ＡＧ－６组２个，ＡＧ－Ａ组１个，ＡＧ－７Ｃ组１个，小麦上的多为ＡＧ－Ｄ组，玉米，水稻上的为ＡＧ－１－１Ａ组，土壤中的较复杂，小麦上的分 相似文献
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对四川产的４种贝母进行了核型研究，米贝母ＦｒｉｔｉｌｌａｒｉａｄａｖｉｄｉｉＦｒａｎｃｈ，核型公式为２ｎ＝２ｘ＝２４＝２ｍ＋２ｓｍ＋１０ｓｔ＋１０ｔ，染色体相对长度系数Ｉ．Ｒ．Ｌ＝２Ｌ十２Ｍ２十７Ｍ１＋２ｓ核型为２Ｂ型，瓦布贝母ＦｒｉｔｉｌｌａｒｉａｗａｂｕｅｎｓｉｓＳ．Ｙ．ＴａｎｇｅｔＳ．Ｃ．Ｙｕｅｈ，核型公式为２ｎ＝２ｘ＝２４＝２ｍ＋２ｓｍ（ＳＡＴ）＋２０ｔ，染色体相对长度系数Ｉ．Ｒ．Ｌ＝４Ｌ＋６Ｍ２＋１２Ｍ１＋２Ｓ，核型为２Ｂ型；浓度贝母ＦｒｉｔｉｌｌａｒｉａｍｅｌｌｅａＳ．Ｙ．ＴａｎｇｅｔＳ．Ｃ．Ｙｕｅｈ，核型公式为２ｎ＝２ｘ＝２４＝２ｍ＋２ｓｍ＋２０ｔ，染色体相对长度系数Ｉ·Ｒ·Ｌ＝４Ｌ＋８Ｍ２＋１０Ｍ１＋２Ｓ，核型为３Ａ型；槽鳞贝母ＦｒｉｔｉｌｌａｒｉａｕｎｉｂｒａｃｔｅａｔａＨｓｉａｏｅｔＫ．Ｃｓｉａｖａｒ．ｓｕｌｃｉｓｑｕａｍｏｓａ（Ｓ．Ｙ．ＴａｎｇｅｔＳ．Ｃ．Ｙｕｅｈ）ＨｓｉａｏｅｔＳ．Ｃ．Ｙｕ，核型公式为２ｎ＝２Ｘ＝２４＝２Ｘ（ＳＡＴ）＋２ｓｍ＋１０ｔ，染色体相对长度系数Ｉ．Ｒ．Ｌ＝４Ｌ＋４Ｍ２＋１４Ｍ１＋２Ｓ，核型为３Ｂ型。该４种贝母核型较一致，但各种之间在次缢痕、随体、Ｂ染色体的数目? 相似文献
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利用低融点琼脂糖凝胶电泳，回收牛生长激素ｃＤＮＡ全序列，克隆于原核表达载体ＰＴ７７－７中Ｔ７启动子下游，转化大肠杆菌Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５α，经分离，酶切分析，获得６个牛生长有质粒ＰＴＧＨ１－６，选取其中两质粒ＰＴＧＨ１１－２，转化Ｅ．ｃｏｌｉＫ８３＝ｐＧ１－２，４２℃诱导３０ｍｉｎ，收集，破裂菌体，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳检测，于２２ＫＤ处有一特异性蛋白带，经ＳｈａｍａｄｚｕＣＳ９３０扫描测定，其表达量 相似文献