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一种快速提取香蕉叶片总核酸、总RNA和总DNA的新方法 总被引：1，自引：0，他引：1
在SDS法的基础上,以富含多糖、多酚等次生代谢物质的香蕉叶片为材料,通过选择性添加适量5 mol/L KAc(pH4.8)或不同体积无水乙醇分别提取香蕉叶片总核酸、总RNA(不含DNA)和总DNA(不含RNA)。结果表明:不添加KAc的可提取到总核酸;添加1/3体积和2/3体积的KAc得到总RNA,添加1/3体积无水乙醇处理得到总DNA。该结果获得一种简单、快速,能在1次实验中添加不同试剂提取香蕉叶片总核酸、总RNA和总DNA的新方法。 相似文献
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《大豆科学》2020,(4)
大豆除了含有大量的脂类和蛋白质外,还含有糖类和酚类物质,为解决难于从大豆中提取高质量DNA和传统提取方法耗时长的问题,本研究以中豆41与天隆一号的幼嫩叶片(V3)和成熟种子作为材料,对高盐低pH法进行改良,提高其裂解液pH值,同时结合冷冻裂解法缩短裂解时间,使用不同pH值醋酸钠纯化DNA,并与经典CTAB法进行比较,评价其提取DNA的效果及其应用范围。结果表明,高盐高pH法对成熟种子的DNA提取效率较高,且蛋白与RNA污染少。CTAB法提取的DNA虽然完整性较高,但是耗时较长,蛋白与RNA污染较多。另外,高盐高pH法提取的DNA PCR扩增条带清晰,与常规CTAB法提取DNA扩增效果一致,但其DNA质量不能满足高通量测序要求。综上,改良的高盐高pH法是一种快速有效的大豆DNA提取方法,可满足常规分子试验的要求。 相似文献
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剑麻核酸的高效提取及应用 总被引：1，自引：0，他引：1
针对剑麻组织中多糖、多酚和次生物质含量高的特点,对其总RNA和基因组DNA提取进行研究。比较了改良SDS法、改良CTAB法提取总RNA和SDS法、CTAB法提取基因组DNA的效果,结果表明：改良CTAB法提取总RNA效果较佳,所得RNA OD260／OD280高于1．8,OD260／OD230大于2．0,而CTAB法提取基因组DNA纯度和完整性较好。基于RNA和DNA水平,分别对剑麻的苯丙氨酸解氨酶基因（PAL）RT—PCR和RAPD反应体系进行优化,均得到理想条带。此方法提取剑麻的核酸可运用于后续分子生物学研究,为其它材料核酸的分离提供参考依据。 相似文献
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《中国麻业》2015,(5)
悬铃叶苎麻(Boehmeria tricuspis(Hance)Makino)是一种多年生草本植物,含有较多的多酚、多糖等次生代谢物质,这些次生代谢物质能够与基因组DNA结合从而影响其DNA的提取。本文以悬铃叶苎麻幼嫩叶片为试材,采用6种方法提取基因组DNA,并比较其提取效果,以期寻找到正确的、快速的、能够得到高质量的基因组DNA的方法。琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度仪、SSR-PCR扩增和限制性内切酶酶切等方法检测不同方法提取的全基因组DNA的质量和纯度。结果显示:采用方法 1(Tian Gen试剂盒)提取的溶液中含有杂质,DNA含量较少;方法 2(常规CTAB法)提取的DNA含有较多杂质;方法 3(硅胶-CTAB法)和方法 4(酚抽提-CTAB法)没有提取到DNA;方法 5(高盐预先去杂-CTAB法)得到的基因组DNA溶液含有较多的蛋白质或盐;方法 6(葡萄糖预先去杂-CTAB法)是唯一能获得高质量的基因组DNA,能够满足PCR、限制性内切酶酶切等分子实验对DNA的要求。本研究找到了一种通用、简单易行,成本低且安全的去除植物DNA提取过程中多糖等杂质的方法,为悬铃叶苎麻后续的其他分子生物学的研究奠定了基础。 相似文献
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为满足对大批量材料进行分子标记检测的需要,以小麦幼叶为材料,探索了在液氮和无液氮条件下提取DNA方法的改进.结果表明,改进提取法Ⅰ(用液氮)中,水浴中加KCl抽提一次便可得到质量较好的DNA,且液氮用量是常规提取法的1/40～1/30;改进提取法Ⅱ(无液氮)中,水浴后加KCl比水浴前加KCl及不加KCl的RNA含量和杂质含量低,OD260/OD280比值大,DNA浓度和纯度有所提高.两种改进方法提取的DNA经琼脂糖凝胶电泳检测都能得到质量较高的DNA图谱,又经SCAR-PCR扩增均能得到2条片段大小相同的条带. 相似文献
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一种适用于多糖多酚植物的高质量RNA快速提取方法 总被引：1，自引：0，他引：1
植物总RNA的提取是进行下游分子生物学实验的关键基础,高质量的RNA是下游实验成功的保障。许多植物由于其体内含有酚、多糖以及其他的一些次生代谢物,要获得这些植物高质量的总RNA比较困难。本文在多次实验的基础上,提出了改良LiCl沉淀法,该方法步骤少、效率高,使用此方法得到的棉花幼苗总RNA经检测表明其质量比使用冷酚法提取的RNA要高得多,且完全满足后续实验的要求。使用此方法成功提取了香蕉叶片、根、木薯叶片的RNA,经检测表明,所得到的RNA完整性好,完全可以满足后续实验的要求,说明改良LiCl沉淀法是一种适用于多酚多糖植物的快速RNA提取方法。 相似文献
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一种改良的大豆DNA提取方法 总被引：2，自引：0，他引：2
大豆组织中含有较多的蛋白质、糖类、酚类和脂类物质,要从中提取高质量的DNA比较困难。针对这一情况提出一种改良UREA大豆DNA提取方法(m UREA),该方法用异丙醇沉淀DNA,并配制washing buffer洗涤DNA沉淀。并以大豆叶片和种子为材料,将m UREA法与CTAB法和SDS法进行对比。结果表明,以大豆叶片为材料时,m UREA法提取的DNA产率最高,质量最好;以大豆种子为材料时,m UREA法提取的DNA产率略低于SDS法,但纯度最高。综合来看,m UREA法是一种高效的大豆基因组DNA提取法,从大豆种子和叶片中提取的DNA浓度和纯度都较高,能满足后续各种分子生物学的要求。 相似文献
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总RNA的纯度和完整性对橡胶树分子生物学实验至关重要。为探索更适合橡胶树总RNA的提取方法，本文以巴西橡胶树无性系热研7-33-97叶片为试材，利用凝胶电泳、紫外吸光值测定、RT-PCR检测等方法对CTAB-LiCl法和CTAB-NaAc法提取的总RNA进行比较。结果显示：CTAB-LiCl法提取RNA不仅耗时产率低，且RNA溶液中的Li+和Cl-影响反转录效率。CTAB-NaAc法提取叶片的总RNA经DNaseⅠ处理后凝胶电泳条带完整，产率高，无DNA污染；A260/A280比值为2.03，A260/A230比值为1.96；反转录的cDNA 经PCR检测质量较好。另用CTAB-NaAc法对橡胶树的花、树皮、胚、根进行总RNA的提取，均能得到较高质量的总RNA。 相似文献
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玉米双低频酶cDNA-AFLP体系的建立 总被引：2，自引：0，他引：2
以玉米自交系QCL1094为材料,用RNAiso Reagent、柱式试剂盒法、异硫氰酸胍法等3种方法提取苗期叶片总RNA,用PrimeScriptTM 1st Strand cDNA Synthesis Kit反转录获得第一链cDNA,用RNase H、E.coli DNA聚合酶I和E.coli DNA连接酶合成第二链cDNA,用T4 DNA聚合酶进行末端平滑得到双链cDNA,最后,用双低频酶EcoR I和Pst I酶切双链cDNA,用T4 DNA连接酶连接接头,用引物EA00和P00进行预扩增,用引物EA01和P01进行选择性扩增。经1%琼脂糖凝胶和6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,结果表明,RNA提取及cDNA-AFLP预扩增和选择性扩增的效果良好。 相似文献
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玉米成熟子粒含有较多的多糖、蛋白质和脂类,传统的RNA提取方法难以提取到高质量的RNA。以授粉后28 d灌浆后期的玉米子粒为试材,以授粉后7 d的玉米子粒为对照,对目前国内外常用的Trizol法、Biozol法、RNAiso Plus法、三种硅胶柱商业试剂盒总RNA提取方法以及本研究建立的改良提取方法进行比较。结果表明,以授粉后7 d的玉米子粒为材料时,各种方法都能获得较好提取效果;以灌浆后期接近成熟玉米子粒为试材时,采用本研究改良或新建立的提取法,可以大幅降低提取成本,快速提取高质量和高得率的RNA。 相似文献
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信使 RNA 是传递 DNA 遗传信息的工具,它也可以通过逆转录酶的催化合成互补 DNA(cDNA),用作分子杂交的探针,以分离特定的基因。本文选用10日龄水稻幼苗提取总 mRNA,52.6g 新鲜组织中获得6.5mg 总 RNA,根据 A260/A280=1.69,说明 RNA 中含极少量蛋白质。采用多聚尿苷酸-琼脂糖柱层析,从总的 RNA 中分离到88μg 总的 mRNA,免网织红细胞溶胶体外翻译体系产物表明,分离的 mRNA 具有生物功能。 相似文献
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大豆叶片DNA提取方法的比较研究 总被引：4，自引：1，他引：3
以大豆叶片为材料,对大豆基因组DNA提取方法中若干影响因子如提取液、提取液的浓度、蛋白质去除次数、提取步骤等进行比较研究,试图寻找大豆叶片DNA提取的最佳方法.结果表明,碱裂解法提取速度快,但提取的DNA量少,在SSR分析中,银染效果较CTAB、SDS提取液差,CTAB、SDS提取液均能得到较高质量的DNA;在1%～4%CTAB、SDS提取液浓度下,4%CTAB易使DNA产生降解,但不同浓度提取液提取DNA均可用于SSR分析;提取叶片重量在一定范围内时,随抽提次数减少,DNA浓度增加,纯度下降,但即使用氯仿/异戊醇抽提一次,也能够满足SSR分析的需要;不同提取步骤下,使用氯仿/异戊醇抽提2次后使DNA沉出后再溶解抽提2次和直接抽体4次相比,A260/A280值偏大,但A260/A230值较好. 相似文献