番木瓜幼叶原生质体分离研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

唐文忠  陆国昆  廖芬  黄茂康  黄伟雄  黄僚才 《广西农业科学》2011,42(5):468-470

【目的】探讨番木瓜幼叶原生质体的最佳分离条件。【方法】以20～30日龄番木瓜无菌苗幼叶为材料,对原生质体分离过程中酶液组合、酶解时间、纯化离心速度（500～1500rpm）及离心时间（6～10min）进行探讨。【结果】随着酶解液中纤维素酶和果胶酶含量的提高,番木瓜原生质体产量逐渐升高,而其活力逐渐降低,其中以为2.0%纤维素酶＋0.5%果胶酶组合的效果较好,解离时间以8h为宜。随着酶解液中甘露醇浓度的升高,原生质体的产量呈现先增加后降低的趋势,在0.55mol/L时达到最大（2.48×106个/gFW）。在悬浮纯化原生质体时,以1000rpm离心6～8min的效果较好。【结论】适宜原生质体分离的酶解液为2.0%纤维素酶＋0.5%果胶酶＋25mmol/LMES＋0.55mol/L甘露醇,最适酶解时间为8h;在原生质体纯化时,使用1000rpm离心6~8min,有利于获得产量及活力较高的原生质体。  相似文献   

烟草原生质体分离纯化条件的优化     

聂琼  刘仁祥  徐如宏 《贵州农业科学》2012,40(9):20-23

为提高烟草原生质体的产量和活力,对影响烟草原生质体分离纯化的酶解液组合、酶解时间、酶解渗透压、离心转速、基因型等因素进行了优化。结果表明:以1%纤维素酶+0.5%果胶酶+0.6mol/L甘露醇+0.1%MES的酶解液组合经6h酶解,700r/min离心5min得到的原生质体产量和活力相对较高;生理状态相近的不同烟草材料在产生原生质体的能力上存在一定差异。  相似文献   

黑果腺肋花楸原生质体分离研究     

岳超君  张志东  吴林  李亚东  杨瑞芹 《吉林农业大学学报》2010,32(6):639-643

为建立有效的原生质体分离体系,研究了黑果腺肋花楸(Aronia melanocarpa)原生质体酶解分离纯化条件。结果表明:黑果腺肋花楸愈伤组织在20g/L纤维素酶+0.5g/L果胶酶+13%甘露醇+5mmol/LMES酶解液中黑暗静置酶解10h,可获得高产量高活力的原生质体;采用500r/min离心8min分离纯化效果最好;愈伤组织比组培苗叶片分离获得的原生质体产量与活力更高。  相似文献   

‘白天堂’百合原生质体的分离纯化与培养     

李炆岱  张琪  王英姿  刘思泱  赵祥云  王文和 《北京农学院学报》2023,(1):76-81

【目的】探究百合原生质体分离纯化和培养条件，为百合原生质体融合、再生体系建立、转基因育种等研究奠定基础。【方法】以‘白天堂’百合无菌苗叶片为材料，采用纤维素酶、果胶酶和离析酶组合分离原生质体，采取单因素试验法，对影响原生质体的制备及再生条件的主要因素即渗透压、酶解组合、细胞筛和酶解时间进行筛选与优化。【结果】以百合无菌苗叶片在1.0%纤维素酶+0.5%离析酶+0.1%果胶酶+0.6 mol/L甘露醇+10.0 mmol/L CaCl₂·2H₂O+20.0 mmol/L MES+20.0 mmol/L KCl混合酶解液为最优条件，25℃,25 r/min, pH为5.6黑暗酶解6 h;孔径75μm细胞筛过滤，600 r/min离心5 min收集细胞，原生质体产量可达6.4×10⁵个/mL,原生质体活力为78.0%;将纯化后密度为1×10⁵个/mL的原生质体溶液接种在葡萄糖作为唯一碳源的培养基中可以存活，并生长产生细胞壁，但没有启动细胞分裂和诱导形成愈伤组织。【结论】初步建立‘白天堂’百合的高效原生质体...  相似文献   

月季原生质体分离条件的研究     

胡超  洪亚辉  黄颖  黄丽华 《湖南农业科学》2009,(1)

采用质壁分离和冰冻预处理月季幼叶.用纤维素酶、果胶酶、甘露醇的混合酶液分离原生质体,并对影响原生质体产量及活力因素进行分析.结果表明,纤维素酶对原生质体产量有极显著影响,适宜月季幼叶原生质体提取的酶液组合为:纤维素酶1.5%、果胶酶0.5%、甘露醇0.6 mol/L、酶解12 h;质壁分离后,原生质体产量增加,但活力降低;冰冻处理使产量提高,处理12 h时,原生质体活力达到最高.  相似文献   

不同酶解条件对普通红豆草下胚轴原生质体分离的影响   总被引：2，自引：0，他引：2  

罗玉鹏  张博  陈爱萍  李增红 《新疆农业科学》2008,45(5):880

对普通红豆草原生质体分离条件进行研究.以无菌发育5～7 d种子的下胚轴为材料,研究了不同的酶组合、酶解时间、渗透压和pH等因子对其原生质体游离的影响.结果表明:当酶液组合为2;纤维素酶+0.5;果胶酶+0.3;离析酶,25℃黑暗条件下酶解6 h可获得大量有较高活力的原生质体,其产量达到3.53×106个/g,存活率为90.6;;以甘露醇作为酶解渗透调节物质较为理想,酶解液中添加浓度为0.55 mol/L的甘露醇最为适合原生质体分离;酶解液pH调至6.0时原生质体产量、活力均高于其他各组.  相似文献   

菜豆叶片原生质体的分离条件     

张金鹏  韩玉珠  张晓旭  张广臣 《吉林农业大学学报》2014,(5)

以菜豆幼嫩叶片为材料,研究了预处理、酶液组合、酶解时间、酶解方式、甘露醇浓度及纯化时的离心转速对菜豆叶片原生质体分离的影响。结果表明:菜豆叶片质壁分离1 h后,在2%纤维素酶+1%离析酶+10%甘露醇+0.1%BSA+5 mmol/L MES+10 mmol/L CaCl2·2H2O,pH为5.8的混合液中,(25±1)℃黑暗条件下振荡酶解12 h可获得大量有活力的绿色原生质体。纯化时400 r/min离心3 min效果较好。  相似文献   

盾叶薯蓣原生质体分离   总被引：1，自引：0，他引：1  

刘艳丽  姚家玲 《华中农业大学学报》2008,27(3)

以盾叶薯蓣叶片、种子愈伤为材料,探讨了不同的酶浓度、酶解时间及渗透压对原生质体分离的影响.结果表明:生长5～10d的叶片置于0.6%纤维素酶、0.5%果胶酶、0.9mol/L甘露醇的酶液中、黑暗处理21h,其原生质体产量和活力最高;悬浮培养5～10d的愈伤组织在2.0%纤维素酶、1.0%果胶酶、0.7mol/L甘露醇的混合酶液中黑暗处理6～8h原生质体产量和活力最高.  相似文献   

菜心原生质体游离条件的优化     

《农业与技术》2020,(7)

本研究以发芽4d,生长状况良好,高约4cm的菜心无菌苗为材料,初步研究了菜心幼苗不同部位材料、渗透(甘露醇)浓度、酶解时间、果胶酶、纤维素酶浓度等关键因素对原生质体游离的影响。结果表明,从菜心幼苗的幼叶组织分离原生质体效果比下胚轴好;以w=1. 5%的纤维素和w=0. 4%的果胶酶为酶解液,在0. 8mol/L甘露醇浓度下,40～50r/min的摇床中黑暗酶解4h时,原生质体产量是最高的。  相似文献   

矮牵牛叶肉原生质体分离条件的优化   总被引：1，自引：1，他引：0  

王鹏  曾丽  刘国峰  刘晓丛  彭勇政  王梦茹 《上海交通大学学报(农业科学版)》2016,(6):55-60, 68

以幼嫩叶片为试材,探讨了渗透压(甘露醇浓度)、水解酶浓度、酶解时间等关键因素对矮牵牛叶肉原生质体分离效果的影响。研究结果表明,以2%纤维素酶R-10+0.2%果胶酶Y-23+0.4%离析酶R-10+20 mmol/L 2-(N-吗啡啉)乙磺酸(MES)+0.1%牛血清白蛋白(BSA)+0.11%无水氯化钙(CaCl_2)为酶解液,在0.5mol/L甘露醇浓度下静置酶解5h,1 100r/min离心2min沉淀原生质体,原生质体产量及活性分别为2.90×106个/g和88.1%,可为后续原生质体培养及融合提供材料。  相似文献   

毛葡萄原生质体分离与纯化研究   总被引：4，自引：0，他引：4  

袁彬  潘学军 《西南大学学报》2010,32(12)

以毛萄萄愈伤组织、悬浮培养细胞,无菌苗幼叶为材料,研究了毛葡萄原生质体的分离纯化方法及影响因素.结果表明,毛葡萄原生质体分离材料以悬浮细胞和愈伤组织最好.毛葡萄愈伤组织在0.5 mol/L甘露醇中预处理90 min,CPW+13%甘露醇+2%纤维素酶+0.25%果胶酶+0.5%离析酶的酶液中酶解10 h,其原生质体产量最高可达6.24×106个/g,活力为86.83%.  相似文献   

洋葱内表皮原生质体分离和纯化研究   总被引：1，自引：1，他引：0  

胡静  毛罕平 《江苏农业科学》2009,(3)

通过酶解法降解洋葱细胞壁释放出原生质体,利用离心从粗提取液中纯化出原生质体,并通过血球计数板计数来比较制备洋葱内表皮原生质体的效果.结果表明:酶解时间、pH值、渗透压稳定剂(甘露醇)及酶的种类是影响原生质体制备的重要因素.酶解时间2 h,pH值5.0～6.0之间,甘露醇0.5～0.7 mol/L,纤维素酶含量1.5%、果胶酶含量0.1%和0.1%牛血清蛋白组合时原生质体的分离效果最佳.  相似文献   

罗汉果原生质体分离条件     

唐兴国  周全  方丹  周峻江 《江苏农业科学》2012,40(9):53-54

以罗汉果叶片为材料,研究了酶解法分离原生质体的条件.结果表明:罗汉果叶肉细胞原生质体分离的最佳酶液组成为:2％纤维素酶+0.5％果胶酶+ 0.6 mol/L甘露醇+CPW盐溶液,pH值为5.8.用该酶液对罗汉果叶片酶解2h,原生质体产量可达5.75×105个/g.  相似文献   

云南疣粒野生稻原生质体高效分离培养体系的建立     

《西南农业学报》2019,(10)

【目的】为云南疣粒野生稻原生质体的培养、细胞融合、细胞再分化成植株奠定基础。【方法】测定不同酶解组合及浓度、酶解时间、渗透压稳定剂浓度下云南疣粒野生稻原生质体的产量和活力,同时筛选云南疣粒野生稻原生质体分离和培养的较优条件。【结果】优化后建立云南疣粒野生稻胚性悬浮细胞系的周期可缩短至45～60 d;在纤维素酶1.5%+果胶酶0.3%+甘露醇0.6 M+MES 5 mM+CaCl_(2 ) 5 mM条件下酶解2 h,云南疣粒野生稻原生质的产量为1.45×10~(6 )个/g·FW,活力达到90.17%,制备出的原生质体在固液培养下得到云南疣粒野生稻原生质体再生植株。【结论】建立了一套快速高效分离培养云南疣粒野生稻原生质体的体系,对研究重要植物资源、种质创新和发掘其优良基因具有重要意义。  相似文献   

酶解时间对灯盏花原生质体产量及活力的影响     

《天津农业科学》2020,(6)

原生质体是进行单细胞测序和基因编辑研究的理想材料。为了研究不同酶解时间对灯盏花原生质体分离的影响,采用纤维素酶1%+果胶酶0.3%+半纤维素酶0.5%酶液处理愈伤组织悬浮细胞2,3,4,5,6 h,纤维素酶0.5%+果胶酶0.2%+离析酶0.5%酶液处理幼叶4,6,8,10,12,14,16 h。结果表明,不同酶解时间,灯盏花悬浮细胞和幼叶的原生质体产量及活力均差异显著。悬浮细胞酶解5 h,原生质体的产量和活力达到最高,分别为3.73×105个·g-1、75.84%;幼叶酶解12 h,原生质体产量最高,达到1.17×106个·g-1,酶解10 h,原生质体活力最高,为80.98%。叶片的原生质体产量和活力明显高于悬浮细胞。  相似文献   

卡特兰叶片原生质体分离条件的研究     

陈泽雄  刘奕清  丁茂倩 《西南大学学报》2007,29(8)

试验以卡特兰叶片组织为材料,研究了预处理时间、酶液组合、酶解时间、酶液中甘露醇含量等不同因素对其原生质体分离的影响.结果表明,以1%的纤维素酶+0.3%的果胶酶为混合酶液,11%的甘露醇为渗透压稳定剂,在25±1 ℃的条件下,pH为5.8的酶液组合中酶解8 h,获得的原生质体产量最高,可达8.9×106/g鲜重,存活率高达91.2%.  相似文献   

牡丹叶片原生质体分离条件的研究     

于相丽  李勇慧  李业 《河南农业科学》2012,41(1):122-125

以地方品种洛阳红牡丹叶片为材料,通过单因素和正交试验,研究了预处理时间、酶解时间、不同酶组合及酶液中甘露醇含量等因素对牡丹叶片原生质体分离的影响。结果表明:在蔗糖浓度为0.3mol/L的溶液中,预处理0.5h效果最好,(25±1)℃条件下,在0.5%纤维素酶+0.4%果胶酶+0.3%半纤维素酶+10%甘露醇、pH值5.8的混合酶液中,酶解6h所得的原生质体产量最高,有活力的细胞可达2.325×106个/g。  相似文献   

人参原生质体的分离培养     

王义  杨晶  张颖  蒋世翠  朱延钧  张美萍 《吉林农业大学学报》2009,31(3)

以人参愈伤组织细胞悬浮系为材料,研究了人参原生质体的分离纯化方法及影响因素.结果表明:以人参愈伤组织细胞悬浮系为材料,在加入1%纤维素酶和0.5%果胶酶、甘露醇浓度0.7 mol/L的酶解液中酶解8 h分离得到的人参原生质体产量最高;采用人参与胡萝卜共培养培养基,进行看护培养成功地培养出愈伤组织.  相似文献   

拟堇花兰属植物Ionopsis utricularioides叶片原生质体分离条件研究     

李智  杨光穗  尹俊梅  黄明忠  冷青云 《江苏农业科学》2012,40(9):153-155

以Ionopsis utricularioides试管苗叶片为材料进行原生质体分离,研究了酶液组合、酶解时间、甘露醇浓度、预处理方法等因素对原生质体的产量及活力的影响.结果表明,Ionopsis utricularioides试管苗叶片在含有0.5％果胶酶+2.0％纤维素酶(绿色木霉)+(11％～12％)甘露醇CPW溶液的混合酶液中,在25℃黑暗环境下静置酶解3h,原生质体分离效果最佳.  相似文献   

红叶石楠叶片原生质体分离条件的研究     

陈泽雄  刘奕清  黄登艳 《湖北农业科学》2010,49(6)

以红叶石楠(Photinia×frasery)叶片为试验材料,研究了预处理时间、酶类组合、酶解时间、酶液中甘露醇含量及酶解温度等不同因素对其原生质体分离的影响。结果表明,以1.0%的纤维素酶+0.3%的果胶酶为混合酶液,11%的甘露醇为渗透压稳定剂,在25℃±1℃的条件下,酶解8h,获得的原生质体产量最高,可达14.7×106个/g(FW),原生质体活力可达84.5%。  相似文献