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1.
通过研究枸杞多糖(LBP)对免疫抑制小鼠血清中细胞因子IL-6、IL-12/IL-23p40和IL-10分泌的影响,探讨LBP的免疫调节机制,为LBP的开发利用提供理论依据。60只ICR雌性小鼠,随机分为5组,对各组小鼠进行连续4d每日腹腔注射环磷酰胺(40mg/kg),间隔3d后,再连续4d每日腹腔注射环磷酰胺(40mg/kg);同时,用高(40mg/1kg)、中(20mg/1kg)、低剂量(10mg/1kg)的LBP给小鼠连续灌胃2周,阳性对照和阴性对照分别用LPS(1mg/kg)和PBS,连续2周。小鼠眼眶取血,分离血清,ELISA检测血清中IL-6、IL-12/IL-23p40和IL-10的分泌水平。结果显示,与阳性对照和阴性对照组相比,LBP能提高免疫抑制小鼠血清中IL-6、IL-12/IL-23p40和IL-10的分泌水平,提示LBP能增强小鼠细胞免疫与体液免疫应答,为枸杞多糖作为免疫增强剂的开发应用奠定了一定的理论基础。 相似文献
2.
杂交猪IL-2和IL-6全基因克隆及序列分析 总被引：2，自引：0，他引：2
为研究杂交猪白细胞介素2(IL-2)和白细胞介素6(IL-6)在机体免疫应答中的作用,将杂交猪外周血淋巴细胞在伴刀豆球蛋白A(Con A)的刺激下进行体外培养后,提取淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR技术扩增出杂交猪淋巴细胞IL-2和IL-6的cDNA,克隆到pMD18-T载体上并测序.测序结果表明:杂交猪IL-2基因核苷酸序列与参考序列的同源性为100%;IL-6基因核苷酸序列与GenBank登录的参考序列的核苷酸同源性在99.8%～100%之间,推导氨基酸同源性在99.1%～100%之间. 相似文献
3.
为获得具有猪白细胞介素-2(pIL-2)和猪白细胞介素-6(pIL-6)双重活性的融合蛋白,研究其作为高效免疫佐剂的可行性,本研究利用基因重组技术将克隆到的pIL-2和pIL-6的成熟肽基因利用一段柔性Linker序列串联后插入到原核表达载体pBV220中,转化大肠杆菌,42℃诱导表达得到融合蛋白pIL-6-2,对蛋白进行纯化复性后用MTT法检测其生物学活性。结果显示不同浓度pIL-6-2蛋白对小鼠脾淋巴细胞的增殖活性差异很大,0.1μg/mL浓度的pIL-6-2活性最好。本研究为利用该蛋白作为高效免疫制剂的应用奠定了良好基础。 相似文献
4.
《中国兽医学报》2014,(6):883-888
本研究旨在建立鸡白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)和白细胞介素18(IL-18)基因实时荧光定量PCR(Realtime FQ-PCR)检测方法。应用RT-PCR方法扩增鸡外周血淋巴白细胞(peripheral blood leukocytes,PBLs)的IL-6和IL-18基因片断,分别克隆至pGM-T载体上,将浓度梯度的IL-6和IL-18基因的重组质粒DNA进行实时荧光定量PCR,并建立相应的标准曲线。经PCR、双酶切和测序分析显示,成功地构建了重组克隆质粒pGM-T-IL-6和pGM-T-IL-18。标准曲线分析显示,IL-6和IL-18基因标准曲线的Ct值与其标准品浓度的对数值之间有良好的线性关系,IL-6和IL-18检测的灵敏度均达到10拷贝/μL。为下一步应用实时荧光定量PCR技术检测IL-6和IL-18基因的转录水平奠定了基础。 相似文献
5.
根据GenBank中的鸡IL-2和IL-15序列设计了2对引物，采用RT-PCR法从山地乌骨鸡外周血淋巴细胞RNA中克隆了IL-2和IL-15基因，与pcDNA3．1连接构建了真核表达质粒pDNAIL-2和pDNAIL-15，研究了其对禽流感灭活疫苗的免疫增强作用。结果显示，免疫后第10d，pDNAIL-15＋AI灭活疫苗组和pDNAIL-2＋AI灭活疫苗组HI抗体水平显著高于AI灭活疫苗组（P〈0．05）。免疫后第10d，pDNAIL-15＋AI灭活疫苗组CD4^＋淋巴细胞百分含量显著高于pDNAIL-2＋AI灭活疫苗和AI灭活疫苗组（P〈0．05）；免疫后第23d，pDNAIL-2＋AI灭活疫苗组CD4^＋淋巴细胞百分率显著高于pDNAIL-15＋AI灭活疫苗和AI灭活疫苗组（P〈0．05）。证实pDNAIL-2和pDNAIL-15能提高禽流感灭活疫苗的免疫效果。 相似文献
6.
IL-2和IL-6是机体重要的免疫调节因子,在佐剂的应用方面具有很好的发展前景。论文以pTIL-2和pTIL-6为模板进行PCR扩增得到猪白细胞介素2(pIL-2)和猪白细胞介素6(pIL-6)的全基因序列,通过EcoRⅠ和HindⅢ双酶切及连接反应将目的基因亚克隆到原核表达载体pET30a中构建了融合表达质粒pETIL-2和pETIL-6。将重组质粒分别转化大肠埃希菌BL21(DE3)和Rosetta(DE3),37℃在IPTG诱导下高效表达了pIL-2和pIL-6,分子质量分别约为26ku和30ku。将包涵体纯化并复性后免疫家兔,制备的兔抗pIL-2和pIL-6的多克隆抗体经ELISA检测效价在1∶12800以上。 相似文献
7.
广西巴马小型猪IL-4和IL-10基因的克隆和序列分析 总被引：6，自引：0，他引：6
为研究猪白细胞介素4（IL-4）和白细胞介素10（IL-10）在机体免疫应答中的作用,从ConA刺激的巴马小型猪的外周血淋巴细胞提取总RNA,用RT-PCR方法扩增出IL-4和IL-10基因,将其分别克隆到PMD18-T 载体上,进行序列分析.结果表明,克隆的IL-4和IL-10基因的核苷酸和氨基酸序列与GenBank上登录的其它猪种的IL-4和IL-10基因的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为98.8%～100%、97.0%～99.3%和99.2%、97.7%. 相似文献
8.
为了获得具有猪白细胞介素-2(pIL-2)和猪白细胞介素-6(pIL-6)双重活性的融合蛋白,研究其作为高效免疫佐剂的可行性,作者利用基因重组技术将克隆到的pIL-2和pIL-6基因的成熟肽片段利用一段柔性Linker序列串联,然后插入到原核表达载体pBV220的适当位置,获得重组质粒pBVpIL-6-2,转化E.coli DH5α、E.coli BL21(DE3)和E.coli Rosetta(DE3)后,42℃诱导表达得到相对分子质量约为36.7ku的重组蛋白pIL-6-2,对蛋白进行纯化、复性后用MTT法检测其对小鼠脾淋巴细胞的促增殖活性,结果显示不同浓度的pIL-6-2蛋白对小鼠脾淋巴细胞的促增殖活性差异很大,其中以0.1μg·mL-1浓度的pIL-6-2活性最好。本研究为利用该蛋白作为高效免疫制剂的应用奠定了良好的基础。 相似文献
9.
本研究旨在探索免疫抑制剂环孢菌素A（CsA）对LPS诱导的子宫内膜基质细胞中促炎症细胞因子白细胞介素1β（IL-1β）和白细胞介素6（IL-6）表达的影响。母兔子宫内膜基质细胞经过体外培养和鉴定后,用1 μg/mL脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导构建子宫内膜基质细胞炎症模型,0 μg/mL LPS处理作对照组。用0、50、100、200和500 ng/mL CsA处理后,分别检测IL-1β和IL-6的表达水平。结果显示,与对照组相比,添加LPS显著诱导IL-1β和IL-6在子宫内膜基质细胞中的表达（P<0.05）,CsA对子宫内膜基质细胞IL-1β和IL-6的表达无影响,但50、100、200和500 ng/mL CsA均极显著地抑制1 μg/mL LPS诱导的IL-1β和IL-6表达的上调（P<0.01）。因此,在子宫内膜基质细胞中,一定剂量的CsA能够有效抑制LPS诱导的子宫内膜基质细胞的免疫应激。本研究为雌性生殖道遭受革兰氏阴性菌感染引起免疫应激后用CsA治疗的可行性提供了依据,但在临床上的应用及其机制尚需进行深入研究。 相似文献
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《中国兽医学报》2017,(7):1343-1347
试验选取6峰12岁健康双峰母驼,试验组与对照组各3峰。周期14d,分为一期(感染前,1~3d)、二期(发病期间,4~12d)、三期(蝇蛆落地后,12~14d),每天采集血液获得血清保存,于第4天对试验组进行人工感染蝇蛆。结果显示:对照组一期与试验组一期3种细胞因子含量均无显著性差异(P>0.05);对照组二期与试验组二期IL-10、IFN-γ含量差异显著(P<0.05),试验组含量较高,IL-4含量差异不显著(P>0.05);在三期中,试验组IL-4含量较低,IFN-γ含量较高且与对照组比较均差异显著(P<0.05)。对照组一、二、三期之间3种细胞因子含量差异均不显著(P>0.05);试验组IL-4含量一、二、三期间无显著性差异(P>0.05),IL-10二期含量高于一期且差异显著(P<0.05),IFN-γ二、三期含量均高于一期且差异显著(P<0.05)。结果表明:阴道蝇蛆病对双峰驼外周血清中IL-4含量基本没影响,但会使IL-10、IFN-γ含量升高,在蝇蛆落地后IL-10含量会降低,IFN-γ仍维持在较高水平。 相似文献
12.
为研究在新城疫La Sota疫苗免疫不全的情况下，重组鸡痘病毒（rFPV）表达的鸡白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素2（IL-2）和髓细胞生长因子（MGF）是否具有免疫增强作用。10日龄SPF鸡随机分成8组（I～VIII），每组18只，每只接种1个半数保护剂量（PD50）的LaSota疫苗，同时免疫不同剂量的表达鸡IL-1β、IL-2或cMGF的rFPV（rFPV-IL-1β、IL-2、cMGF）。结果：rFPV表达的IL-1β、IL-2或cMGF可以消除鸡痘病毒在免疫早期对雏鸡体重增长的影响；一定剂量的IL-1β和IL-2可使鸡脾脏中CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞的总体水平提高；免疫21d后用新城疫的F48E8强毒经肌肉攻毒。一定剂量的IL．1B和IL一2（I和III组）能提高La Sota疫苗的免疫保护率，而cMGF却没有表现出这种作用。本研究表明rFPV表达的IL-1β和IL-2在一定的剂量下可以增强La Sota疫苗的免疫效果，具有免疫增强作用。 相似文献
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将128只10日龄SPF鸡随机分成8组，每只免疫1PD50的新城疫LaSota疫苗；同时Ⅰ～Ⅵ组鸡分别皮下注射不同剂量的重组鸡痘病毒rFPV-IL-1β、rFPV-IL-2或cMGF，而Ⅶ组和Ⅷ组鸡分别皮下注射鸡痘病毒wt-FPV和PBS作为阴性对照和空白对照。结果，重组鸡痘病毒表达的IL-1β、IL-2或cMGF可以消除鸡痘病毒在免疫后第7d对雏鸡体重增长的影响；一定剂量的IL-1β和IL-2可使鸡脾中CD4^＋T细胞在免疫后第7d和CD8^＋T细胞在免疫后第14d的总体水平提高；免疫第21d新城疫F48E8强毒攻毒后，一定剂量的IL-1β和IL-2能提高免疫保护率，而cMGF却无此作用。结果表明，重组鸡痘病毒表达的IL-1β和IL-2在一定剂量下可增强新城疫LaSota疫苗的免疫效果。 相似文献
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白细胞介素17(Interleukin 17, IL-17)是免疫反应的中枢蛋白,既是免疫反应关键的炎性细胞因子,也是调控细胞凋亡的关键细胞因子。本文从白介素17生物学功能及相关疾病来阐明其在动物体内发挥的作用,为IL-17的研究提供简明扼要的参考资料。 相似文献
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以pGEMT/pIL-18为模板,应用PCR法扩增出猪IL-18基因,用EcoR Ⅰ和Xba Ⅰ双酶切后,插入酵母表达载体pPICZαA中,经酶切、PCR扩增及序列测定,成功构建了酵母重组表达载体pPICZ/pIL-18,电击转化毕赤酵母X-33,应用Zeocin筛选获得高拷贝重组转化菌株,甲醇诱导表达,经SDS-PAGE电泳分析重组pIL-18蛋白的表达,并用SephadexG200纯化表达的重组pIL-18蛋白.运用MTT法检测其生物学活性.试验结果表明,重组X-33酵母菌株能够表达分泌性pIL-18,诱导72 h表达量最高,其表达量占总蛋白表达量的38％.而且纯化的重组pIL-18蛋白具有明显促进淋巴细胞增殖的活性. 相似文献
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鸡白细胞介素2(IL-2)对鸡免疫功能的影响 总被引：12，自引：2，他引：10
为研究鸡IL-2对雏鸡免疫功能的影响，进行了3个方面的试验。①对体液免疫及细胞免疫的影响。结果表明，鸡IL-2能明显提高鸡新城疫疫苗免疫后HI水平、T淋巴细胞增殖反应及ANAE^＋细胞百分数；②对雏鸡腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响。结果表明使用IL-2与否对巨噬细胞的吞噬功能没有明显的影响；⑧人工感染法氏囊病的防治试验。在攻毒前后注射IL-2，均可明显降低发病率和死亡率。本研究结果表明，鸡IL-2可明显提高特异性免疫应答能力，与疫苗共同注射可作为佐剂提高疫苗的免疫原性，对法氏囊等病毒性疾病具有一定的防治作用。 相似文献
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猪IL-18基因原核表达载体的构建及表达 总被引：1，自引：0，他引：1
以含新兴猪IL-18基因的真核质粒pcDNA3.1-pIL18为模板,扩增出新兴猪IL-18基因,将其定向克隆至原核表达载体pET32c和pET41c的SacⅠ和KpnⅠ位点,构建了原核表达载体pET32c-pIL18和pET41c-pIL18。经酶切和PCR鉴定,表明所构建的重组质粒为特异性新兴猪IL-18基因原核表达质粒。将该重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3)细胞,筛选的阳性菌落经SDS-PAGE分析及Western-blotting分析,表明成功构建了表达重组猪IL-18的大肠埃希菌基因工程菌株。蛋白的可溶性分析表明,重组蛋白呈不可溶表达,在菌体内以不溶性的包涵体形式存在。 相似文献
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根据GenBank上登录的鸡白介素15（IL-15）基因序列,设计合成一对特异性引物,以ConA诱导的鸡脾淋巴细胞提取的总RNA为模板进行RT—PCR扩增,并克隆到pMD18-T载体测序。测序结果表明,四川草科鸡IL-15开放阅读框（ORF）由564个核苷酸组成,编码187个氨基酸,与GenBank中公布的鸡白介素15基因进行比较,核苷酸和氨基酸同源性为98．6％-99．5％。生物信息学分析表明,该基因编码的蛋白具有亲水性,有很强的抗原性,共有3个潜在的N-糖基化位点,可能存在3个蛋白激酶C磷酸化位点,存在2个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点。 相似文献